Negatiivne värvimise alus, tehnika, eelised ja puudused

The negatiivne värvimine See on eriline värvimismeetod, mis tõstab esile kapsli olemasolu mõnedes mikroorganismides Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae ja Cryptococcus neoformans-, kliinilistest proovidest või puhtast kultuurist.

Otsene proov, mida tavaliselt kasutatakse negatiivse värvimise rakendamiseks, on tserebrospinaalvedelik. See meetod on kiire alternatiiv meningiidi eeldatavale diagnoosile Cryptococcus neoformans.

Samuti võib seda plekki rakendada röga ja steriilsete vedelike puhul üldiselt, samuti noortelt puhaskultuuridelt saadud tüvedel. See meetod kasutab nigrosiini või Hiina tinti selle täitmiseks; seetõttu on väga lihtne ja majanduslik metoodika, mis annab lühikese aja jooksul suure diagnostilise väärtusega teavet.

Selles mõttes on iga labor võimeline seda värvi täitma. Loomulikult peab laboratooriumil olema pädev personal, kes suudab tunnustada pärmi Cryptococcus neoformans isoleeritakse või loovutatakse ja eristatakse neid leukotsüütidest ja artefaktidest, mida proov võib esineda.

Indeks

• 1 Sihtasutus
• 2 Tehnika
  • 2.1 Materjalid
  • 2.2 Proovide võtmise spetsifikatsioonid
  • 2.3 Tehnoloogia teostamine otseste proovidega
  • 2.4 Tehnoloogia teostamine kultuuri tüvedega
  • 2.5 Vaatlus mikroskoobis
• 3 Eelised
• 4 Puudused
• 5 Kudede värvimine India tindiga
• 6 Viited

Sihtasutus

Nigrosiin ja India tint toimivad sarnaselt; seetõttu võib ühte neist kahest ainest kasutada vaheldumisi.

Seda tehnikat nimetatakse negatiivseks värvimiseks, sest see toimib vastupidiselt ülejäänud värvimismeetoditele. Selles on see, mida ei ole varjatud, ülesehitust, mida otsitakse või mida soovite näha; see tähendab mikroorganisme.

Seetõttu põhineb värvus määrdeainete värvimisel tumedas värvitoonis. Selle stsenaariumi puhul tõstetakse piiritletud struktuure esile heledas või värvusetu värviga.

Üldiselt täheldatakse pärmi, mis on kapslile vastav läbipaistev halo, mida ümbritseb selge halo. See juhtub seetõttu, et Hiina tint ja nigrosiin on ained, mis ei suuda tungida elusate mikroorganismide kapslit moodustavasse polüsahhariidi..

Väärib märkimist, et teised struktuurid, mis võivad olla otseses proovis, nagu leukotsüüdid või punased vererakud, ei tungi läbi.

Nüüd, kui mikroorganismid on surnud, võib tinktuur tungida nendesse, nii et see värvimine on kasulik ka mikroorganismide elujõulisuse hindamiseks..

Tehnika

Materjalid

Nigrosiin

Nigrosiin on oma nimele võlgu mustal värvil. See on sünteetiline aine, mis saadakse orgaaniliste ühendite - nagu nitrobensiin, aniliin ja aniliinvesinikkloriid - segu kuumutamisel, kasutades nimetatud reaktsioonis katalüsaatorit (raud või vask)..

Hiina tint

Hiina tint on aine, mida kasutatakse peamiselt aasialaste kirjutamiseks, kunstiteoste tegemiseks ja monokromaatiliseks maalimiseks. See on Hiina kultuuris väga populaarne.

See saadakse kalmaari tindist, mis on segatud pulbristatud söega, mis on väikeste vaigupuude põletamise toode.

Samuti on võimalik valmistada seda süsivesinike (taimeõlid) põletamise tahmast koos valgu želatiiniga, mis annab sellele õige konsistentsi, et vältida süsinikuosakeste sadestumist..

Proovide võtmise spetsifikatsioonid

- Ei nõua paastumist.

- CSF, röga või steriilse vedeliku proov peab sisaldama vähemalt 1 ml mahtu ja see tuleb laboris kohe üle viia toatemperatuurile..

- CSF ja steriilsed vedelad proovid peaks võtma spetsialist.

- See võib olla ka ülalmainitud patogeenidega seotud kahtlustatava tüve puhas kultuur.

Tehnikat teostatakse otseste proovidega

- Proovid tuleb tsentrifuugida, seejärel supernatant ära visata ja sette võtta.

- Puhtale slaidile asetatakse tilk tsentrifuugitud materjalist (setetest) ja tilk hiina tinti või nigrosiini..

- See tuleb korralikult segada ja katta kaane libisemisega, et tilk saaks levida nagu õhuke kile ilma servade ületamata.

- Seejärel paigaldatakse preparaat mikroskoobi sisse.

- Kui preparaat on liiga tume, võib seda veega lahjendada.

Tehnikat teostatakse kultuuri tüvedega

- Väga väike osa noortest põllukultuuridest võetakse külvinõelaga ja lahustatakse tilkhaaval, mis on eelnevalt asetatud puhtale slaidile.

- Katteplaat asetatakse peal.

- Seda täheldatakse mikroskoobis 10X ja seejärel 40X juures.

Samuti võite lahustada osa kolooniast destilleeritud vees ja sealt võtta tilk ja segada see tindiga. Sel viisil ei pruugi preparaat olla nii paks, mis võimaldaks struktuure vaadelda eraldi; Aglomeraatide korral ei täheldata seda hästi.

Teine metoodika on järgmine:

- Asetage tilgakese tilgakese suspensioonile.

- Asetage tilk nigrosiini samasse otsa ja segage.

- Teise slaidi abil pikendage proovi nii, nagu te teeksite hematoloogilist määret.

- Lasta kuivada ja jälgida mikroskoobi all.

Vaatlus mikroskoobis

Kõigepealt peate keskenduma 10X eesmärgile, et saada väljavaade laiemalt. Seejärel peaksite otsima, kui on selgeid tühikuid; kui on, keskenduge 40X-le, et näha üksikasju.

Eelised

- Seda on lihtne teostada.

- See on majanduslik tehnika.

- See meetod ei nõua, et määret kinnitataks kuumuse või kemikaalidega; seetõttu täheldatakse mikroorganisme ilma moonutusteta.

- Värsket preparaati ei ole vaja kuivatada, nii et seda saab kohe jälgida, tulemuseks on kiiresti tulemused.

Puudused

Pärast kokkupanekut tuleb värskeid preparaate kohe jälgida; Kui neil on lubatud kuivada, ei ole neid enam võimalik jälgida ja uut.

Kudede värvimine India tindiga

Teine funktsioon, mida Hiina tint saab täita, on patoloogia laborites. Seda rakendatakse kasvaja resektsiooni marginaalide tähistamiseks kirurgiliselt eemaldatud koeproovidele.

Märgistatud kude pihustatakse äädikhappega. See toimib mordinaadina ja takistab tindi väljalangemist, kui kude allutatakse biopsiapreparaadi tavapärasele töötlemisele..

Protseduur seisneb kudede ujumises alkoholis ja ksüleenis ning seejärel parafiinvahas. See märgistus juhib patoloogi kudede jälgimisel, näidates ära, kus kirurgilise resektsiooni varu või muu huvipunkt on.

Viited

1. "Nigrosina". Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 11 juuli 2017, 22:46 UTC. 6. jaanuar 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Hiina tint". Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 1. oktoober 2018, 03:08 UTC. 6. jaanuar 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J ja kaasosalised. (2006). Extremadura autonoomse piirkonna tööjõud. Eriprogramm IV köide. Toimetaja MAD. Sevilla-Hispaania, lk 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), Galician Health Service'i (SERGAS) spetsialistlabor. Teema spetsiifiline maht 2. Toimetus MAD. Sevilla – Hispaania, lk 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scotti mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja