Wrighti peitsialus, materjalid, tehnika ja kasutusalad



The Wrigthi plekk on värvimismeetod, mille lõi ameerika patoloog James Homer Wright 1902. aastal Romanowski plekist. Nagu Romanowsky plekk oli ebastabiilne, sisestas Wrigth lahustina metanooli ja fikseeriva aine.

See värvus on polükromaatiline, mis tähendab, et see tekitab erinevaid värve sõltuvalt värvist imenduvast struktuurist. Seda värvimistehnikat kasutatakse laialdaselt valgete vererakkude diferentseerimiseks ja punaste vereliblede, trombotsüütide ja leukotsüütide morfoloogia uurimiseks perifeerses veres ja luuüdis..

Selle kasutamine on väga oluline, kuna vere erinevates rakuliinides võib esineda kõrvalekaldeid, mis hõlbustavad selliste haiguste nagu leukeemia või bakteriaalsete või parasiitide infektsioonide diagnoosimist..

Võib-olla on need kõige tavalisemad rakendused, milles seda tehnikat kasutatakse, kuid need ei ole ainsad. See on kasulik ka muudes proovides kui veri ja luuüdi, näiteks nina väljavoolu proovid, fekaalse lima, röga, naha..

Indeks

  • 1 Wrighti pleki fond
  • 2 Materjalid
    • 2.1 Valmistamine
    • 2.2 Puhverlahus
    • 2.3 Värvimiseks vajalikud lisamaterjalid
  • 3 Wrighti värvi komponendid
    • 3.1 Metanool
    • 3.2 Amortisaator
    • 3.3 Eosiin (Y)
    • 3.4 Metüleensinine
  • 4 Tehnika
  • 5 Utiliit
    • 5.1 Hematoloogia
    • 5.2 Ninasekretsioon
    • 5.3 Parasiitoloogia
    • 5.4 Hingamisteede nakkused
    • 5.5 Bakterioloogia
    • 5.6 Mükoloogia
  • 6 Kuidas on Wrighti plekiga täheldatud vereproovi struktuure??
  • 7 Soovitused hea värvimise kohta
  • 8 Tavapärased vead värvimises
    • 8.1 Väga kahvatu värvimine
    • 8.2 Värvaine sademed
    • 8.3 Kärpimine, millel on väga punakas või sinine värvus
  • 9 Salvestusrežiim
  • 10 Viited

Wrighti plekk

Wrighti plekk sündis Romanowsky plekist, mis koosneb metüülalkoholi lahusest happevärvist (eosiin Y) ja aluselisest (metüleensinine) ja selle oksüdatsiooniproduktidest.

Wrighti plekis kasutatavate värvainete segu põhjustab Romanowsky nime all tuntud efekti, see tähendab, et see annab ilusa lilla värvuse leukotsüütide tuumadele ja neutrofiilsetele graanulitele, samas kui punased verelibled on värvitud roosaks..

Wrighti peitsile tüüpilise värvivahemiku andmise eest vastutavad komponendid on sinine B ja eosiin Y. Täheldatud efekt sõltub värvainete seondumisest keemilise struktuuri ja sinise B ja eosiini Y interaktsioonidega..

Happelised struktuurid, nagu näiteks nukleiinhapped, tuumaproteiinid ja mõnede rakutüüpide reaktiivne ebaküps tsütoplasm, kinnitavad sinise B (põhivärv).

Kuigi põhistruktuurid nagu hemoglobiin, fikseerivad segmenteeritud eosinofiilide graanulid teiste rakustruktuuride seas eosiin Y (happevärv).

Värvimise tulemust võivad mõjutada erinevad tegurid, nagu Wrighti värvi pH, puhver ja pesulahus; samuti värvimise ja fikseerimise aja.

Seetõttu on iga reaktiivide valmistamise etapp ülioluline ja seda tuleb teha iga detaili eest hoolitsedes.

Materjalid

Wrighti värvimine. 100 ml puhul on vajalik:

Kaaluge 0,3 g Wrighti värvi, mõõdetakse 97 ml metanooli ja 3 ml glütserooli.

Ettevalmistus

Mördis asetage raske kogus Wrighti värvi ja lisage aeglaselt glütserool, kuni pulber on täielikult lahustunud..

Seejärel lisatakse metanool, segatakse ja valatakse merevaigukollasesse pudelisse.

Enne lahuse kasutamist tuleb loksutada õrnade liigutuste ja filtriga.

Puhverdatud puhver

Liitris destilleeritud vees on 3,76 g dinaatriumhüdrofosfaati (Na2HPO4   2H20) pluss 2,1 g kaaliumdivesinikfosfaati (KH)2PO4).

Segage väga hästi, kuni kõik lisatud reagendid on lahustunud. PH reguleeritakse väärtusele 7,2. Vala klaaspurki ja hoida toatemperatuuril.

Värvimiseks vajalikud lisamaterjalid

Värvimistehnika teostamiseks on vaja ka teisi materjale, milleks on: esemeid kandvad või esemeid katvad lehed, värvuse sild, veega või pesupuhvriga pisikesed, stopper, värvimisaja võtmiseks ja mõned kuivatusmaterjalid (absorbeeriv paber, marli või puuvill).

Wrighti peitskomponendid

Metanool

Alkohol (metanool) toimib slaidi vere määrdeainena.

Põhimõtteliselt on see redutseeriv reagent, dehüdraator ja koagulandi fiksaator. Seetõttu on selle funktsiooniks valkude koaguleerimine ja nende lahustumatus, kuid ilma denatureerimiseta.

Metanool on kõige laialdasemalt kasutatav reaktiiv, mis määrab kõikides laborites määrdeained, sest see annab paremaid tulemusi kui etanooliga saadud. Ideaalne kontsentratsioon on 99%.

Amortisaator

Puhvril (puhverdatud lahusel) on värvi pH reguleerimine või säilitamine, kuna pH on reguleeritud väärtusele 7,2, mis on rakkude struktuuri jaoks oluline värvide nõuetekohaseks absorbeerimiseks..

Teisest küljest, metanooli fikseerimise läbimine dehüdreerib rakud ja puhver aitab neid hüdraatida.

Eosiin (Y)

Eosiinil on afiinsus põhikomponentide suhtes, sest see on happevärv. Kaks eosiini tüüpi on üksteisega väga sarnased, seega võib kasutada ühte neist kahest, saades sama tulemuse.

Üks neist on eosiin Y, kollane eosiin või tetrabromofluorestsiin ja teine ​​eosiin B, sinakas erütrosiin B või dibromodinitrofluorestsiin. Siiski on kõige sagedamini kasutatav eosiin Y.

Selle värvi kõige olulisem omadus on selle negatiivne polaarsus, mis muudab selle positiivse laenguga rakuliste struktuuride meelitamiseks.

Metüleensinine

See on põhivärv. Selle peamine omadus on metakromasia, st mitte kõik struktuurid ei värvi sama värvi, see sõltub struktuuride keemilisest koostisest, mida see värvib.

Mõned pöörduvad heledaks või tumedateks ja teised tumepunaks või heledaks lilla.

Tehnika

1 - Viige proovi levik nii, et õhuke kile jääks kas slaidile või katteplaadile.

2-Laske õhul kuivada umbes 2 tundi.

3-Asetage kuiv määrdeaine värvimissildale või värvimiskandjale, kui proov on levinud ülespoole.

4 - Katke leht Wrighti värviga tilkhaaval, kuni see katab kogu pinna. Jäta 5 - 8 minutit.

5-Värv peaks klapi täielikult katma, ilma servadeta. Kui värvimise ajal hakkab aurustuma, tuleb paigutada täiendavad tilgad.

6-Seejärel lisage võrdne kogus amortisaatorit, puhuge veidi, kuni ilmub iseloomulik metallist sära. Võtke 10 kuni 15 minutit.

7 - Peske kraaniveega, asetades pehme joa, kuni leht on roosa.

8 - Alkoholiga immutatud marli abil eemaldage klapi tagaküljele kinnitatud värv.

9 - Laske mustusel kuivada väga hästi, enne kui asetate immutusõli mikroskoobis nähtavaks.

Utility

Hematoloogia

See sobib ideaalselt perifeerse vere määrimiseks, paksude vere proovide uurimiseks ja luuüdi proovide rakkude uurimiseks.

Selle värvainete kombinatsiooni keemiliste omaduste tõttu on raku struktuurid kergesti äratuntavad, kuna nad on võimelised eristama eri tüüpi rakke.

Nina sekretsioon

See meetod on väga kasulik nina sekretsiooni rakkude (epiteelirakkude, segmenteeritud eosinofiilide, polümorfokleaarsete) tuvastamiseks allergilise riniidi diagnoosimisel..

Parasiitoloogia

Selles mõttes on see olnud kasulik Leishmania sp nahahaavandite subkutaanse raku histiotsüütides. Samuti kasutatakse seda leukotsüütide väljaselgitamiseks väljaheidete proovides (fekaalse leukogramm).

Sellisel juhul on arstil huvi teada, kas väljaheites esinev leukotsütoos on polümorfonukleaarne või mononukleaarne. See leid väljaheites, kui see on vastavalt bakteriaalne või viirusinfektsioon.

Teisest küljest võib veres ringlevaid parasiite leida erütrotsüüdi sees või plasmas vabalt. Soovitud parasiidid on Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii ja veterinaarias on see kasulik otsimisel Theileria equi ja Babesia kaballi, väikelaste, eriti hobuste puhul.

Wright ja Giemsa plekk võivad diferentseerida hemoparasiite normaalsetest rakukomponentidest. Selleks saate kasutada kahte tüüpi levikuid:

Peened venib

Veri laotatakse slaidile nagu õhuke kile. Värvitud Wrighti plekiga, paljastades tuuma ja tsütoplasma omadused.

Paks langus

Seda metoodikat kasutatakse parasiitide esinemise uurimiseks suuremas koguses veres.

Selleks asetatakse slaidile suur tilk verd. Kui seal on, siis peaksite defibrineerima, muutes suuremad ja suuremad ringid keskelt väljapoole, kasutades teise slaidi serva.

Lõpuks, selleks, et jälgida parasiite paksus määrdeaines, tuleb erütrotsüüdid lüüsida veega.

Hingamisteede infektsioonid

Hingamisteede tasemel on see tehnika kasulik ka seetõttu, et röga proovides esinevad rakud, bronhide või bronhokalveolaarsed loputused on diagnoosi kindlakstegemiseks olulised..

Samuti võib siin eristada polümorfseid tuumarakke ja mononukleaarseid rakke.

Bakterioloogia

Selle meetodi kasutamine bakterioloogias on piiratud, sest see ei ole bakterite värvimiseks hea, mistõttu kasutatakse nende värvimiseks teisi spetsialiseerunud värvaineid..

Siiski on seda kasutatud epiteelirakkude otsimiseks, mis sisaldavad Chlamydia trachomatis ureetraalse või endotservikaalse limaskesta määrdumistes, kuigi tuleb tunnistada, et see ei ole selle jaoks parim \ t.

Samuti on võimalik jälgida spiraalset tüüpi baktereid punaste vereliblede hulgas Borrelia burgdorferi nakatunud patsientidel, aga ka morulaaridel või inklusiivsetel kehadel Ehrlichia sp lümfotsüütide, monotsüütide või neutrofiilide tsütoplasmas.

Mükoloogia

The Histoplasma capsulatum on patogeensed seened, mida diagnoositakse sageli mitmesuguste koeproovide mikroskoopilise vaatluse teel, värvitud Wrighti plekiga.

Kuidas on Wrighti plekiga täheldatud vereproovi struktuure?

Soovitused hea värvimise kohta

Vereproovide pikendused tuleb õhu käes kuivatada spontaanselt. Värvid peavad olema võimalikult õhukesed, et saada värvi parem kinnitus ja vältida liigseid kogunemisi.

Kvaliteetseks värvimiseks on soovitav värvimine läbi kahe tunni jooksul pärast mustri valmistamist. Teiselt poolt on ideaalne näide kapillaarverest, ilma antikoagulandita.

Venoosse vere kasutamise korral tuleks seda kasutada EDTA antikoagulandina, mitte hepariinina, kuna viimane võib deformeerida rakustruktuure..

Vältimaks valmistamise halvenemist, tuleb valmis värvainet säilitada kuivades kohtades.

Pesuprotsessi ajal on soovitatav kasutada neutraalse pH-ga reguleeritud vett.

Lõpuks on soovitav katsetada värvimismeetodeid, mida laboris iga kord kasutatakse.

Seda tehakse proovide või laiendatud mustrite värvimisel kvaliteedikontrollina. See etapp on oluline, kuna see tagab, et värvimine on korralikult ette valmistatud ja värvusajad on hästi standarditud.

Kui mustri leht on halvasti värvitud, siis on probleeme, mis tuleb lahendada.

Tavapärased vead värvimises

Väga kahvatu värvimine

Väga kahvatu määrdumine, mis on tavaliselt tingitud väga lühikesest värvimisajast või väga liialdatud pesust. Seda korrigeeritakse kontakti aja pikendamisega või pesemisaja vähendamisega.

Värv sadestub

Värvipuhastite esinemine määrdeainel võib põhjustada mitmeid põhjuseid, kuid kõige sagedasemad põhjused on: filtreerimata värvi kasutamine, värvimine ebaühtlastel sildadel, tolmu või rasvaga määrdunud lehed, mitte head pesemist Lõpeta värvimine.

Eriti punakas või sinine värvus

Puhver on vastutav värvaine pH eest. Värvid, mille pH on alla näidatud (happe), põhjustavad väga punaseid määrdumisi.

Kui värvi pH on kõrgem (leeliseline), saadakse äärmiselt sinakas määrdumine.

Salvestusrežiim

Reaktiivi tuleb hoida toatemperatuuril.

Viited

  1. Gutiérrez V. Võrdlusuuring Wrighti värvimismeetodi ja Elisa testi kohta Ehrlichiosis canina diagnoosimiseks San Pedro Sula linnas Hondurases. 2008. Lõputöö, et taotleda veterinaararsti nimetust. San Carlos de Guatemala ülikool.
  2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Põhiline värvimine mikrobioloogia laboris. Puudega seotud uuringud. 2014; 3 (1): 10-18.
  3. "Wrighti plekk." Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 18. mai 2018, 12:05 UTC. 8. detsember 2018, 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Sagedus Babesia spp. Montería, Córdoba (Colombia) hobustel. Rev. udcaactual divulg cient.  2013; 16 (2): 451-458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja.
  6. Retamales E, Mazo V. Tšiili rahvatervise instituut. Soovitused verevärvide värvimiseks vereanalüüsi lugemiseks.