Värvima maikuu Grünwald-Giemsa vundament, tehnika ja kasutusalad



The Mai Grünwald-Giemsa plekk o Pappenheim on diferentseeriv värvimistehnika, mis segab Giemsa ja May Grünwaldi reaktiive. Seda kasutatakse normaalsete ja ebanormaalsete vererakkude diferentseerimiseks perifeerse vere ja luuüdi määrdudes, samuti histoloogiliste sektsioonide ja tsütoloogiliste proovide värvimiseks..

Mõlemad reagendid - Gemsa ja May Grünwald - on saadud Romanowsky-tüüpi värvimisest, mis põhineb happeliste ja aluseliste värvainete kombinatsioonil..

Giemsa parandas tehnikat, stabiliseerides eosiini, metüleensinise ja selle derivaatide segu glütserooliga. Seevastu kasutab Grünwald eosiini ja metüleensinist, kasutades lahustina metanooli. See strateegiline kombinatsioon on andnud suurepäraseid tulemusi.

Kuigi rakumorfoloogia vaatluse poolest toimib see sarnaselt Giemsa ja Wrighti värviga, parandab see tehnika varasemaid malaaria, Chagase tõve, leishmaniasise ja trikomoneesiat põhjustavate parasiitide värvuse häälestamisega.

Lisaks on see osutunud sperma vedeliku tsütoloogilise uuringu jaoks väga kasulikuks tehnikaks. See on esile tõstetud mitte ainult sperma morfoloogiliste omaduste näitamise kaudu, vaid võimaldab eristada ka suure efektiivsusega leukotsüüte, epiteelirakke ja spermatogeneesi rakke..

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Värvide värvus
  • 2 Tehnika
    • 2.1 Materjalid
    • 2.2 Kontsentreeritud värvilahus May Grünwald
    • 2.3 Kontsentreeritud Giemsa värv
    • 2.4 Puhverlahuse valmistamine pH 7,2 juures
    • 2.5 Vere määrimine või luuüdi värvimine
    • 2.6 Sperma vedeliku laiendatud värvimistehnika
    • 2.7 Olulised spetsifikatsioonid
  • 3 Kasutamine
    • 3.1 Vaginaalne tsütoloogia
    • 3.2 Spermiproov
  • 4 Viited

Sihtasutus

See meetod järgib Romanowsky plekke, kus happelistel värvainetel on selektiivne afiinsus rakuliste põhikomponentide suhtes ja happelised komponendid meelitavad põhilisi värve.

Teisel viisil selgitatud, nii raku struktuuridel kui värvidel on positiivsed või negatiivsed elektrilaengud; võrdsed tasud tõrjuvad ja erinevad tasud meelitatakse.

Näiteks, aluselised värvained, nagu metüleensinine, on positiivselt laetud ja neid tõmbavad negatiivselt laetud struktuurid. Sellepärast peitub see värv värvata DNA-d ja RNA-d sisaldavaid tuumaid, millel on negatiivselt laetud fosfaatrühmad.

RNA-d sisaldavate mononukleaarsete valgevereliblede segmenteeritud basofiilide ja tsütoplasmade graanulid on samuti värvitud.

Samamoodi kannab happevärv negatiivset laengut, mistõttu see ühendab positiivselt laetud struktuure, nagu erütrotsüüdid ja segmenteeritud eosinofiilide graanulid. Segmenteeritud neutrofiilide graanulite puhul kinnitavad need mõlemad värvid.

Värvainete valik

Selles meetodis eksisteerivad samaaegselt ortokromaatiliste värvainete ja metakromatikumide vahelised reaktsioonid. Ortochromatics (eosiin ja metüleensinine) seostuvad raku struktuuriga, millega nad on seotud, ja annavad stabiilse värvi, mis ei erine.

Teisest küljest, metakromaatika (metüleensinise taeva A ja aure B derivaadid) varieeruvad oma algvärviga, kui nad on seotud konkreetse struktuuriga, ja võib olla isegi erinevaid toone..

Lõpuks nõuab May Grünwaldi lahendus veega, sest ilma selleta tungib värvus struktuuridesse, kuid seda ei kinnitata. Selleks, et see toimuks, peab värv muutuma polaarseks või ioniseerituks ja seega olema võimeline sadestuma ja seonduma sellega seotud struktuuridega.

Tehnika

Materjalid

- Slaidide slaidid.

- Sildade värvimine.

- May-Grünwaldi lahendus.

- Giemsa plekk.

- Destilleeritud vesi.

Kontsentreeritud värvilahus May Grünwald

Me peame kaaluma 0,25 g eosiin-metüleensinist (värvi vastavalt May Grünwaldile) ja lahustama 100 ml metanoolis. Seejärel segatakse segu 1 tund ja jäetakse 24 tunniks seisma. Lõpetas aja, see filtreerib.

Meetodi rakendamiseks tuleb May Grünwaldi värvi lahjendada järgmiselt: 200 ml lahjendatud värvaine kohta mõõdetakse 30 ml kontsentreeritud lahust, lisatakse 20 ml puhverlahust ja 150 ml destilleeritud vett, mis on reguleeritud tasemele 7,2-7,3. . Seejärel segatakse ja filtreeritakse.

Kontsentreeritud Giemsa värv

Kaalutakse 0,5 g asur-eosiin-metüleensinist (värvainet Giemsa järgi), lahustatakse 50 ml metanoolis ja asetage 50 ml glütseriini segusse.

Meetodi teostamiseks lahjendage 1:10 puhverlahusega ja laske sellel puhata 10 minutit. Seda saab vajadusel filtreerida.

Puhverlahuse valmistamine pH 7,2 juures

Neid tuleb kaaluda:

- 40 mg kaaliumdivesinikfosfaati (KH2PO4).

- 151 mg di-naatriumvesinikfosfaadi 12-hüdraati (Na2HPO4).

Mõlemad ühendid lahustatakse 100 ml vees.

Vere määrimine või luuüdi värvimine

On kaks võimalust: klassikaline ja kiire.

Klassikaline režiim

  1. Katke määrdeained 2 või 3 minutit lahjendatud May-Grünwaldi lahusega.
  2. Eelmise lahuse kõrvaldamiseks peske puhverdatud destilleeritud veega.
  3. Katke sama puhverlahusega ja jäta 1 minut. Idee seisneb selles, et eelmine värv on kinnitatud struktuuridele ja samal ajal on rakud hüdreeritud.
  4. Lisage puhverdatud veele 12 tilka lahjendatud Giemsa tinktuuri ja löök segama ja homogeniseerima. Laske seista 15 või 20 minutit.
  5. Peske määrdeained puhverdatud destilleeritud veega ja asetage see õhu käes kuivaks.
  6. Fookuse ja jälgige optilises mikroskoobis, et vererakud värvitakse 40X eesmärgi abil. Vajadusel saab kasutada 100X.

Kiire režiim

  1. Katke määrdeainega May Grünwaldi värvainega, mis on lahjendatud 1 minutiks.
  2. Peske puhverdatud destilleeritud veega.
  3. Katta puhverdatud veega ja lasta seista 1 minut.
  4. Lahjendatud Giemsa värvi pannakse 5 minutiks.
  5. Peske puhverdatud destilleeritud veega ja lastakse õhu käes kuivada.

Siin kirjeldatud meetodid on juhised, kuid tuleb arvesse võtta, et protseduurid ja värvimisajad varieeruvad vastavalt reaktiivi tarnivale kommertsmajale. Soovitatav on järgida iga kommertsmaja poolt täpselt määratud samme.

Sperma vedeliku laiendatud värvimistehnika

1 - Katke levik õhukese May Grünwaldi lahusega 4 minutit.

2- Eemaldage värv ja peske destilleeritud veega.

3 Asetage lahjendatud Giemsa (1: 10) kiht 15 minutiks destilleeritud vette.

4- Eemaldage värv ja peske destilleeritud veega.

5- Lasta kuivada ja jälgida mikroskoobi all.

Olulised spetsifikatsioonid

Meetod nõuab, et reaktiivid ja pesulahused oleksid reguleeritud väärtusele 7,2-7,3, nii et rakkude struktuuride värvainete afiinsus ei moonuta ega muuda lõplikku värvi..

Kasutamine

Seda meetodit kasutavad kliinilised laborid perifeerse vere ja luuüdi, koesektsioonide ja tsütoloogiate määrimiseks.

Hematoloogilises valdkonnas on see meetod rakkude kõrvalekallete uurimisel kuju, suuruse ja arvu seisukohast äärmiselt oluline. See on väga väärtuslik vahend teatud haiguste, näiteks leukeemia ja aneemia diagnoosimiseks.

Lisaks sellele on see hematoloogilistes väljades parasiitide otsimisel suurepärane kasulikkus.Plasmodium sp ja Trypanosoma cruzi) või histoloogiline (Leishmanias sp).

Vaginaalne tsütoloogia

Mis puudutab vaginaalset tsütoloogiat, siis on see meetod eriti kasulik Trichomonas vaginalis. See on oluline järeldus, kuna selle esinemine simuleerib kartsinoomi pilte in situ mis siis kaob parasiidi kõrvaldamisel.

Sperma proov

See on olnud ideaalne vahend sperma proovide uurimiseks, kuna see annab väärtuslikku teavet sperma kvaliteedi kohta.

Andmed, mida nad pakuvad, peavad toimuma peamiselt koos arvu ja morfoloogiaga, samuti kaasnevate rakkudega, mis võivad esineda ja mis on elulise tähtsusega, nagu idurakud, leukotsüüdid ja epiteelirakud.

Selle analüüsiga on võimalik kirjeldada pea, kaela, keskosa ja põhiosa sperma täheldatud kõrvalekaldeid..

Lisaks võivad nad aidata näidata hemospermia juhtumeid (sperma punaste vereliblede olemasolu) ja leukospermiat või püospermiat (leukotsüütide arvu suurenemine spermas)..

Viited

  1. Costamagna S, Prado M. Värske testi, May Grünwald-Giemsa ja Grami värvide ja kultuurimaterjalide kinnitamine Trichomonas vaginalis. Parasitool. 2001; 25 (1-2): 60-64. Saadaval: scielo.
  2. Merck KGaA labor. Mai mikroskoopiaks võib Grünwald eosiin metüleensinine.
  3. "Mai-Grünwald-Giemsa plekk." Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 15. november 2018, 14:37 UTC. 8. jaanuar 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratoorsed klaasikemikaalid. Reagendid histoloogiliste meetodite, hematoloogia ja mikrobioloogia jaoks. Saadaval aadressil: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Soovitus verevärvide värvimiseks vereanalüüsi lugemiseks. Riiklik ja biomeditsiiniline labor. Tšiili rahvatervise instituut.
  6. Sarabia L. Spermiogramm vastavalt WHO kriteeriumidele. Arengu anatoomia ja bioloogia programm. Arstiteaduskond Tšiili ülikool Saadaval aadressil: pp.centramerica.com