Kinyouni värvimise vundament ja tehnikad



The Kinyouni värvimine See on värvimismeetod, mida kasutatakse happega kiirete bakterite ja happeliste parasiitide värvimiseks. See sündis Ziehl-Neelseni värvuse muutmisest; Mõlemat tehnikat tõlgendatakse samal viisil, kuid need erinevad kahes elemendis: põhireagendi valmistamisel ja selles, et Kinyouni meetod ei kasuta soojust.

Sel põhjusel tuntakse seda ka kui külma modifitseeritud Ziehl-Neelseni või Kinyouni külma värvimist. See on näidatud värvimiseks Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atüüpilised mükobakterid, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ja Cyclosporas cayetanensis.

Väärib märkimist, et Nocardias värvib selle tehnikaga nõrgalt, kuna need on osaliselt happekindel alkohol, seega on selle žanri puhul metoodika muutmine..

Kinyouni külma tehnikat kombineeriti omakorda Didieri poolt koktsidia avastamiseks modifitseeritud trihhomeetodiga (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) ja mikrosporiidide eosed (Enterocytozoon bieneusi ja Encephalitozoon intestinalis).

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Tehnika
    • 2.1 Materjalid
    • 2.2 Kinyouni fenitseeritud fukssiini valmistamine
    • 2.3 Alkoholhappe valmistamine
    • 2.4 Metüleensinise kontrasti värvi valmistamine
    • 2.5 Kinyouni peitsitehnika
    • 2.6 Eriline Kinyouni meetod Nocardiasele
    • 2.7 Didieri poolt modifitseeritud fenoolse ja trihhroomse fuksiini kombineeritud tehnika
    • 2.8 Kvaliteedikontroll
  • 3 Kinyouni tehnika võrreldes Ziehli tehnikaga -Neelsen
  • 4 Viide

Sihtasutus

Peamine värvimisreagendiks on karboolfuksiin või fuksiin fenicada, mis omab omadust, et see seondub vahakujulises seinas olevate karboolhapetega, mis on rikas mükobakterite ja teatud parasiitide lipiidide (mükoolhapete) poolest..

Seda ühendit ei neutraliseeri happevärvimine; seetõttu määratletakse mikroorganismid happekindla alkoholina.

Erinevalt Ziehl-Neelseni tehnikast, mis fikseerib värvi kuumuse kaudu, ei ole Kinyouni meetodis see etapp vajalik, kuna selle meetodi jaoks valmistatud fenoolne fuksiini lahus sisaldab suurt fenoolikontsentratsiooni..

Fenool lahustab rakuseina lipiidse materjali, mis võimaldab sisestada karbooli fukssiini värvi. Pärast värvi tungimist jääb see fikseerituks, hoolimata alkoholi happe pesemisest.

Sel viisil võtavad happekindlad mikroorganismid iseloomuliku punase värvi, samas kui kõik, mis ei ole happekindel alkohol, muutub värvituks ja värvub sinisena..

Tehnika

Materjalid

- Modifitseeritud fenoolne fuksiin.

- Alkoholhape.

- Metüleensinine.

Kinyouni fikseeritud fukssiini valmistamine

- Põhifuksiin: 4 gr.

- Fenool: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilleeritud vesi: 100 ml.

Aluseline fukssiin alkoholis tuleb aeglaselt lahustada, pidevalt segades. Seejärel sulatatakse kristallitud fenool veevannis temperatuuril 56 ° C. Pärast lahustamist lisada 8 ml eespool valmistatud fuksiinilahusele.

Alkoholhappe valmistamine

- Kontsentreeritud vesinikkloriidhape: 3 ml.

- Etanool (95%): 97 ml.

Seda tuleb mõõta, ühendada ja segada.

Metüleensinise kontrastvärvi valmistamine

- Metüleensinine: 0,3 g.

- Destilleeritud vesi: 100 ml.

See kaalutakse ja lahustatakse.

Kinyouni värvi tehnikat

1 - Valmistage otseselt proovist proov, mis võib olla muu hulgas röga, kopsuvedelik, uriini setted, tserebrospinaalvedelik või väljaheited; või mikroorganismide suspensioonist, mis on saadud puhastest kolooniatest, mis on välja töötatud primaarses söötmes.

2 - Kinnitage mustus soojusega.

3 - Asetage määrdeain värvainel ja katke Kinyouni fenoolse fuksiini reagendiga. Laske sel istuda 3 või 5 minutit.

4- Pesta destilleeritud veega.

5 - Pleegige happe alkoholiga 3 minutit ja peske uuesti destilleeritud veega.

6 - Pleegige uuesti happe alkoholiga 1 või 2 minutit, kuni värvi enam ei tõmmata.

7- Peske destilleeritud veega ja laske äravool, asetades slaidi püstises asendis.

8- Katke preparaat metüleensinisega ja jäta 4 minutiks.

9- Peske destilleeritud veega ja laske õhul kuivada.

10 - Kontrollige 40X ja seejärel 100X juures.

Kui soovite happeliste mikroorganismide värvimist parandada ja kiirendada, lisage 1 tilk niisutavat ainet (nagu tergitool nr 7) 30 või 40 ml Kinyouni fenoolse fuksiiniga..

Mõned laborid muudavad metüleensinise kontrastvärvi erkrohelise või pikrihappega; esimene annab taustale rohelise värvi ja teine ​​kollane värv.

Ninardiale eriline kinyouni tehnika

Nocardia bakterite värvimise parandamiseks kasutatakse Kinyouni värvimist. Meetod on järgmine:

1 - Katke määrdeain Kinyouni fikseeritud fuksiiniga 3 minutit.

2 - Peske destilleeritud veega.

3 - Lühidalt valgendage 3% valmistatud happe alkoholiga, kuni värvainet enam ei lisata.

4- Pesta uuesti destilleeritud veega.

5- Katke preparaat metüleensinisega ja jäta 30 sekundiks.

6- Pesta destilleeritud veega ja laske õhul kuivada.

Didieri poolt modifitseeritud fenoolse ja trihhroomse fuksiini kombineeritud tehnika

Seda tehnikat soovitatakse analüüsida väljaheite proove koktsidiate ja spooride otsimisel Microsporidium sp samal ajal Järgnev menetlus on järgmine:

1 - Katke mustri Kinyouni fenoolse fuksiiniga 10 minutit.

2- Eemaldage värv ja peske destilleeritud veega.

3 - Pleegige 30 sekundit alkoholi soolhappega.

4- Pesta uuesti destilleeritud veega.

5 - Katke määrdeain trikroomilahusega 30 minutit temperatuuril 37 ° C.

6 - Pesta destilleeritud veega.

7 - Värvus 10 sekundit alkoholi äädikhappega.

8 - Peske määrdeainet 30 sekundi jooksul 95% etanooliga.

Kvaliteedikontroll

Positiivse kontrollina valmistatakse määrdeained tüvedega Mycobacterium tuberculosis ja värvitud ettevalmistatud reagentidega, et veenduda, et bakterid võtavad õige värvi (punane-fuksia).

Negatiivseid kontrolle võib samuti kasutada, kui valmistatakse määrdumisi mis tahes tüvega, mis ei ole happekindel alkohol, kontrollides seega, et kogu proov võtab kontrastse värvi..

Kinyouni tehnika võrreldes Ziehli tehnikaga -Neelsen

Kinyouni tehnika on lihtsam, sest see kõrvaldab soojendamise sammu, kuid selle peamiseks eeliseks on see, et see takistab väga mürgiste ja pikaajaliselt vähki põhjustavate aurude eraldumist. Seetõttu on Kinyouni värvimine personali värvimiseks ohutum.

Oluline on arvestada, et on vaja hoolitseda selle eest, et reaktiivid ei puutuks otseselt nahaga kokku, kuna need on söövitavad ja valgendaja on tuleohtlik.

Puuduste osas ei tähenda negatiivne määrdumine tingimata, et mikroorganism puudub. Lisaks võib raku detriidi olemasolu põhjustada valepositiivseid tulemusi, mis tekitab diagnoosimisel segadust.

Viide

  1. Rakenduslik kliiniline keemia (2016). BK Kinyoun Kit, saadaval aadressil: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyouni plekk ja kaks Coccidiat HIV-is. Meditsiiniajakiri MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. (5. väljaanne). Argentina, Redaktsioon Panamericana S.A..
  5. Wikipedia toetajad. "Kinyouni plekk." Wikipedia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8. veebruar 2018. Veeb. 5. jaanuar 2019.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Värvimistehnika rakendamine Coccidia ja Microsporidia samaaegseks diagnoosimiseks. Vabariigi Ülikooli hügieeniinstituut. Montevideo. Uruguay Saadaval aadressil: higiene.edu.uy