Spore värvimise vundament, tehnikad ja kasutused



The spoorivärvimine on meetod, mida kasutatakse resistentsusstruktuuride värvimiseks, mis moodustavad mõned bakteriaalsed perekonnad, kui need on ebasoodsates tingimustes; need struktuurid vastavad ellujäämise viisile.

On palju perekondi, mis moodustavad eosed; peamised neist on aga Bacillus ja Clostridium. Neid perekondi peetakse olulisemaks, kuna neil on inimestele patogeensed liigid.

Iga batsill võib tekitada spoori. Preparaadi värvimise ajal võib spoori leida bacilluse sees (endospoor) või väljaspool seda (exospore). Tavapäraste bakterite värvimise meetoditega, nagu Grami värvimine, jäävad spoorid värvitu.

Praegu on mitmeid värvimismeetodeid, mis on võimelised läbima spoori paksu struktuuri selle värvimiseks. Need meetodid on väga erinevad; nende hulgas võib nimetada Dorneri tehnikat, Möelleri plekki ja Shaeffer-Fultoni metoodikat, mida tuntakse ka Wirtz-Conklini nime all..

Kõigist mainitud tehnikatest kasutatakse Shaeffer-Fultoni metoodikat kõige tavalisemates laborites. Selle nimi on kaks mikrobioloogi, kes lõid 1930. aastal värvi: Alicia Shaeffer ja MacDonald Fulton. Kuid mõnikord nimetatakse seda tehnikat Wirtz-Conkliniks kaheksateistkümnendate bakterioloogide auks.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Spore värvimismeetodid
    • 2.1 Dorneri tehnika
    • 2.2 Muudetud Dorneri tehnika
    • 2.3 Shaeffer-Fultoni või Wirtz-Conklini tehnika
    • 2.4 Möelleri tehnika
    • 2.5 Modifitseeritud Möeller tehnika ilma soojustamata
  • 3 Kasutamine
    • 3.1 Näited
  • 4 Viited

Sihtasutus

Spoorid ei värvi tavapäraste värvidega, sest neil on väga paks sein. Spooride keeruline koostis takistab enamiku värvide sisenemist.

Kui eoseid uuritakse väljastpoolt seestpoolt, jälgitakse järgmisi kihte: esiteks exosporium, mis on peenem välimine kiht, mille moodustavad glükoproteiinid..

Siis tuleb küünenaha, mis tagab resistentsuse kõrgetele temperatuuridele, millele järgneb peptiidoglükaanist koosnev koor. Siis on baasi sein, mis kaitseb protoplastit.

Spoor on veetustatud struktuur, mis sisaldab 15% kaltsiumi ja dipikoliinhapet. Seetõttu põhinevad enamik spoorivärvimistehnikad soojuse rakendamisest, nii et värv võib tungida paksusse struktuuri.

Kui spoor on värvitud, ei saa see värvi kõrvaldada. Shaeffer-Fultoni meetodil siseneb malahhiit roheline vegetatiivsetesse rakkudesse ja soojuse rakendamisel tungib endospoor ja ka eksosporid..

Veega pesemisel eemaldatakse värvained vegetatiivsest rakust. See on tingitud sellest, et roheline malahhiidvärv on veidi aluseline, seega seob see nõrgalt vegetatiivse rakuga.

Teisest küljest ei saa see spoorist välja tulla ja lõpuks on kontrastne safraniiniga batsill. See vundament kehtib ülejäänud tehnikate kohta, kus juhtub midagi sarnast.

Spore värvimismeetodid

Spooride tekitamiseks peab teil olema kahtlaste tüvede puhas kultuur, mida soovite õppida.

Kultuuri allutatakse 24 tunni jooksul äärmuslikele temperatuuridele, et stimuleerida mikroorganismi sporuleerumist. Selleks võib kultuuri paigutada ahju 44 ° C juures või külmkapis (8 ° C) 24 või 48 tunni jooksul.

Kui nimetatud temperatuuridele jääb liiga palju aega, siis täheldatakse ainult eksospore, kuna kõik endosporid on batsillist lahkunud.

Aja lõpus tuleb paar tilka steriilset füsioloogilist lahust asetada puhtale slaidile. Siis võetakse väike osa põllukultuurist ja peenestatakse. 

Pärast seda jäetakse see kuivama, see kinnitatakse soojusele ja värvitakse mõningate järgnevalt kirjeldatud meetoditega:

Dorneri tehnika

1- Valmistatakse katseklaasis sporaaditud mikroorganismi kontsentreeritud suspensioon destilleeritud vees ja lisatakse võrdne maht filtreeritud kinyouni fenoolse fuksiiniga.

2 Asetage toru keeva veega vannisse 5 kuni 10 minutiks.

3- Puhas slaidis segage tilk eelmist suspensiooni 10% nigrosiini vesilahusega, keedetud ja filtreeritud.

4- Pikendage ja kuivatage kerge soojusega kiiresti.

5- 100X eesmärgiga uurimine (sukeldumine).

Spoorid värvuvad punaseks ja bakterirakud on tumeda halli taustaga peaaegu värvitud.

Muudetud Dorneri tehnika

1- Sporuleeritud mikroorganismi suspensioon laotatakse slaidile ja kinnitatakse kuumuse külge.

2 - Näidis kaetakse filterpaberi ribaga, millele lisatakse fenüülhappe fuksiin. Värvi kuumutatakse Bunsen-põleti leegiga 5 kuni 7 minutit, kuni tekib aurude vabanemine. Seejärel eemaldatakse paber.

3 - Peske preparaat veega ja kuivatage seejärel absorbeeriva paberiga.

4. Katke määrdeainega 10% nigrosiini õhuke kile, kasutades nigrosiini või nõela levitamiseks teist slaidi..

Spooride ja bakterite värvus on sama, mis on kirjeldatud tehnika tasemest.

Shaeffer-Fultoni või Wirtz-Conklini tehnika

1 - Paigaldage õhukese laotusega sporuleeritud mikroorganismi suspensioon slaidile ja fikseerige see kuumutamiseks.

2 - Katke klapp 5% malahiidi rohelise vesilahusega (lehele võib asetada filterpaber).

3 Kuumutage Bunsen-põleti leeki, et aur vabaneks ja leek eemaldataks. Korrake toimingut 6 kuni 10 minutit. Kui protseduuri käigus aurustub malahhiidiroheline lahus liiga palju, võib lisada veel.

4- Eemaldage filterpaber (kui see oli paigaldatud) ja peske veega.

5 - Lükake slaid 30 sekundiks 0,5% safraniini vesilahusega (mõned tehnikavariandid kasutavad 0,1% safraniini vesilahust ja jäetakse 3 minutiks alles).

Selle tehnikaga on eosed rohelised ja bakterid on punased.

Selle puuduseks on see, et noorte kultuuride endosporid ei värvi hästi, kuna need näevad välja väga selged või värvitu. Selle vältimiseks on soovitatav kasutada 48-tunnise inkubeerimise kultuure.

Möeller tehnika

1 - Katke määrdeaine kloroformiga 2 minutit.

2- Kloroformis visake ära.

3 - Kaetud 5% kroomhappega 5 minutit.

4- Pesta destilleeritud veega

5- Leht on kaetud fuksiin-fenoolse karpkalaga ja puutub Bunsen-põleti leegiga kuni aurude eraldumiseni; siis eemaldatakse see leekist mõne minuti jooksul. Toimingut korratakse kuni 10 minutini.

6- Pesta veega.

7 - Kasutage hapestatud etanooli (vesinikkloriidalkoholi) värvitustamiseks. See jääb 20 või 30 sekundiks.

8 - Pesta destilleeritud veega.

9 - Leeki katmine metüleensinisega 5 minutit.

10 - Pesta destilleeritud veega.

11- See jäetakse kuivama ja proov võetakse mikroskoobi all.

Sporad on punased ja sinised batsillid. Oluline on mitte aurud sisse hingata, sest nad on mürgised ja pikemas perspektiivis võivad need olla kantserogeensed.

Modifitseeritud Möeller tehnika ilma soojustamata

2007. aastal lõid Hayama ja tema kaastöötajad Möelleri tehnika muutmise. Nad eemaldasid värvi kuumutamisetapi ja asendasid selle 2 tilka Tergitol 7 pindaktiivse ainega iga 10 ml fuksiin-fenoolse karboolilahuse lisamisega. Sama tulemused saadi.

Kasutamine

Spooride värvimine annab väga väärtusliku ja kasuliku informatsiooni patogeeni identifitseerimiseks, kuna sama, selle kuju, paiknemine batsillis ja võime deformeerida vegetatiivset rakku on andmed, mis võivad liigi suunata. kaasatud teatud soole.

Selles kontekstis väärib märkimist, et eosed võivad olla ümmargused või ovaalsed, need võivad asuda keskel või ka paratsentraalses, subterminaalses või terminalis..

Näited

- Clostridium difficile moodustab terminaalses asendis ovaalse eose, mis deformeerib batsilli.

- Spoori Clostridium tertium See on ovaalne, ei deformeeri bacillust ja asub terminali tasandil.

- Endospoor Clostridium tetani see on terminaalne ja deformeerib bacilluse, andes trumlilehe väljanägemise.

- Spoorid Clostridium botulinum, C. histolyticum, C. novy ja C. septicum nad on ümmargused või subterminaalsed ovaalsed ja deformeerivad batsilli.

- Endospoor Clostridium sordelli see asub keskasendis, kerge deformatsiooniga.

Viited

  1. Hayama M, Oana K, Kozakai T, Umeda S, Fujimoto J, Ota H, Kawakami Y. Ettepanek lihtsustatud meetodi kohta bakteriaalsete spooride värvimiseks ilma Moelleri meetodi soojust edukalt modifitseerimata. Eur J Med Res. 2007; 16 12 (8): 356-9.
  2. Wikipedia toetajad. Moeller määrib. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 3. november 2018, 03:28 UTC. Saadaval aadressil: en.wikipedia.org
  3. Pérez R, Juárez M, Rodríguez (2011). Mikrobioloogiliste tehnikate käsiraamat. Põhiteaduste osakond Mikrobioloogia akadeemia. Riiklik polütehniline instituut.
  4. "Endospora." Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 25. veebruar 2018, 10:20 UTC. 10. jaanuar 2019, 02:42: en.wikipedia.org
  5. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J ja kaasosalised. (2006). Extremadura autonoomse piirkonna tööjõud. Eriprogramm IV köide. Toimetaja MAD. Sevilla-Hispaania, lk 211-212.
  6. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), Galician Health Service'i (SERGAS) spetsialistlabor. Teema spetsiifiline maht 2. Toimetus MAD. Sevilla – Hispaania, lk 79-80.
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. (5. väljaanne). Argentina, Redaktsioon Panamericana S.A..
  8. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scotti mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja