Tetratsionaadi puljongi alus, valmistamine ja kasutamine



The tetrationaat puljong või TT puljong on selektiivne vedel kultuurikeskkond Salmonella tüvede rikastamiseks ja taastamiseks. Selle on loonud Müeller ja hiljem Kauffmanni poolt muudetud, seetõttu on neid, kes seda nimetavad Müeller-Kauffmanni puljongiks.

Algne keskkond sisaldas proteoosi peptoone, kaltsiumkarbonaati ja naatriumtiosulfaati. Kauffmann lisas sapphappe soolad ja lõi erilise rohelise värvusega teise mooduse. Need ained pärsivad kolibakterite kasvu, jättes vaba sööde patogeensete bakterite tekkeks, antud juhul Salmonella..

Muudatus oli väga edukas, kuna see suurendas oluliselt söötme tundlikkust. Seetõttu on see praegu kasulik Salmonellade otsimiseks mis tahes tüüpi proovides, kuid eriti tahkete või vedelate väljaheidete ja toidu puhul..

Selle valmistamine koosneb kahest faasist; kaubanduslik söötmeks on alus tetrationaadi puljongi valmistamiseks ja seejärel moodustuva tetrationaadi valmistamiseks, lisatakse söötme täielikuks jooditud joodilahus..

Ameerika rahvatervise assotsiatsioon (APHA) soovitab salmonelloosi otsimisel proovide rikastamiseks kasutada tetrionaadi puljongit, millele on lisatud erkrohelist, sest see on selektiivsem kui tetratioonhappe pulber ja seleeni puljong.

Üldiselt on tetrationaadi puljong ideaalne, kui kahtlustatakse väikestes kogustes Salmonella perekonda kuuluvaid baktereid või kui neid kuritarvitatakse inhibeerivate ainetega või tööstuslike protsessidega, mis vähendavad nende elujõulisust.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 - Tetrationaat
    • 2.2. Tetratsionaadi puljong, roheline
  • 3 Kasutage
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Soovitused
  • 6 Viited

Sihtasutus

Käesolevad peptoonid vastavad kaseiini pankrease lagundamisele ja loomsete kudede peptilisele seedimisele. Need annavad bakterite kasvu jaoks üldiselt süsiniku, lämmastiku ja toitainete allika.

Naatriumtiosulfaat reageerib jooditud lahusega omalt poolt tetrationaadi moodustamiseks. See pärsib kolibakterite kasvu ja soodustab bakterite teket, mis sisaldavad tetratioonhappe reduktaasi ensüümi, nende hulgas on ka Salmonella perekond, aga ka Proteus..

Sapphappe soolad toimivad ka enamiku grampositiivsete bakterite ja mõnede gramnegatiivsete bakterite (kolibakterite) inhibeeriva ainena..

Kaltsiumkarbonaat neelab tetrationaadi lagunemisel tekkinud toksilised ained, mis moodustavad väävelhappe. Selles mõttes neutraliseerib kaltsiumkarbonaat happesuse, säilitades stabiilse keskkonna pH.

Hele rohelise mooduse puhul suurendab see aine tetrationaadi puljongi selektiivset võimsust, inhibeerides teisi mikroorganisme peale perekonna Salmonella..

Ettevalmistus

-Tetrationate puljong

Joodi joodi lahus

Kaaluge:

  • 6 g joodi.
  • 5 g kaaliumjodiidi.

Kaaliumjodiid lahustatakse ligikaudu 5 ml steriilses destilleeritud vees, seejärel lisatakse segule veidi kuumutamisel joodi. Pärast selle täielikku lahustumist täidetakse see steriilse destilleeritud veega, kuni selle lõppmaht on 20 ml.

Pool baas tetratioonhappe puljongile

Kaaluge 46 grammi veetustatud söödet ja suspendeerige 1 liitris steriilses destilleeritud vees. Segu segatakse ja kuumutatakse, kuni see on täielikult lahustunud. Ärge steriliseerige autoklaavis. Söötme alusel lastakse jahtuda umbes 45 ° C-ni ja sel ajal lisatakse 20 ml jooditud lahust..

Pärast lahuse lisamist tuleb iodurada söötmele kohe ära kasutada. Kui te ei soovi kogu segu kasutada, toimige järgmiselt.

10 ml baassöödet jaotatakse tuubidesse ja ainult 0,2 ml jooditud lahust lisatakse proovidega inokuleeritavatele lahustele..

Neid, keda ei kavatseta kasutada, võib endiselt hoida külmkapis, kuid kuna söödet ei steriliseerita, on ideaaliks valmistada täpne vajalik kogus..

Söötme värvus enne jooditud joodi lahuse lisamist on piimvalge, valge sademe ja pärast lisamist on see pruuni tiheda sademega. Täheldatud sade on normaalne ja vastab kaltsiumkarbonaadile, mis ei lahustu. Söötme lõplik pH on 8,4 ± 0,2.

-Tetratsionaadi puljongivärv, roheline

Tetratioonhappe puljongi valmistamiseks erkrohelisega viiakse läbi kõik ülalkirjeldatud etapid, kuid lisaks lisatakse segule 10 ml 0,1% juures valmistatud helerohelist lahust..

Heleroheline

See lahendus valmistatakse järgmiselt:

Kaalutakse 0,1 g helerohelist ja suspendeerige 100 ml destilleeritud vees. Kuumutada kuni keemistemperatuurini, et saavutada täielik lahustumine. Salvesta kollasesse pudelisse.

Kasutage

Väljaheiteproovide (väljaheite kultuur) puhul on protokoll järgmine:

Inokuleerige katseklaasis 1 g tahket väljaheidet või 1 ml vedelat väljaheidet 10 ml kasutusvalmis tetratioonhappe puljongiga. Loksutatakse tugevalt ja inkubeeritakse aerobiosis temperatuuril 43 ° C 6-24 tundi.

Seejärel võetakse alikvoot 10-20 μl puljongist ja kultiveeritakse see salmonella suhtes selektiivsesse söötmesse, nagu SS agar, XLD agar, heleroheline agar, Hektoeni enteraalne agar..

Paralleelselt tuleks salmonelloosi selektiivne sööde inokuleerida otsese prooviga (roojaga) ilma rikastamiseta. Rektaalsete tampooniproovide puhul laadige torusse kogutud materjal alla ja jätkake ülalkirjeldatud viisil.

Toidu proovide puhul kaalutakse 10 g tahket toitu või 10 ml vedelat toitu ja inokuleerige pudel 100 ml kasutusvalmis tetratioonhappe puljongiga. Jätkake eespool kirjeldatud viisil, kuid inkubeerige temperatuuril 37 ° C.

Nagu näha, on proovi ja puljongi vaheline suhe alati 1:10.

Kvaliteedikontroll

Kultuurisöötme testimiseks võib kasutada tuntud kontrolltüvesid. Kõige sagedamini kasutatakse ATCC sertifitseeritud tüvesid.

Kasutatavad tüved on Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Salmonella tüvede puhul on oodata head arengut Escherichia coli võib olla nõrk või regulaarne areng ning grampositiivsed tüved (Enterococcus ja Staphylococcus) on osaliselt või täielikult \ t.

Soovitused

-Kuna see sööt ei inhibeeri Proteuse kasvu, kasutavad mõned laborid selle mikroobse tüve tekkimise vältimiseks 40 mg / l novobiotsiini. Antibiootikum tuleb lisada enne jooditud joodilahust.

-Pärast söötme, mis sisaldab jooditud joodilahust, valmistamist ei tohiks pärast inokuleerimist olla rohkem kui 2 tundi.

-Söötme jaotamisel katseklaasis tuleb segu pidevalt homogeenida moodustunud sade resuspendeerimiseks.

-Vähem saastunud proovides inkubeeritakse tetrationaadi puljongit temperatuuril 35-37 ° C ja väga saastunud proovides soovitatakse inkubeerida 43 ° C juures..

Viited

  1. Conda Pronadisa laboratoorium. 2010. Tetrationaadi puljongi alus vastavalt Müeller-Kauffmannile. Saadaval:
  2. BD laboratooriumid 2003. Tetratsionaadi puljongi alus. Saadaval:
  3. Laboratooriumid Britania. 2015. Tetionaadi puljongi alus. Saadaval:
  4. Meedia BBL. 2005. Torutooted Salmonella liikide kasvatamiseks.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Naatriumseleeni ja naatriumtetrationaadi kultuurisöötme võrdlus, mõlemat inkubeeriti temperatuuril 37 ° C ja 42 ° C juures isoleerimine Salmonella spp kandja väljaheide. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220