Karbamiidipulbri sihtasutus, valmistamine ja kasutamine

The uurea puljong on vedel kultuurikeskkond, mida kasutatakse ensüümi ureaasi esinemise tõendamiseks teatud mikroorganismides. Ureaas on mikroobne ensüüm, mis on toodetud konstitutiivselt, see tähendab, et see sünteesitakse sõltumata sellest, kas substraat, millel see toimib, on olemas või mitte..

Uraasi funktsioon on seotud orgaaniliste ühendite lagunemisega. Mitte kõik mikroorganismid ei suuda seda ensüümi sünteesida, mistõttu selle määramine laboris võimaldab tuvastada teatud bakteritüvesid ja isegi eristada sama perekonna liike..

Uurea testi on kahte tüüpi: Stuart ja Christensen. Nad erinevad oma koostise ja tundlikkuse poolest. Esimene on eriline, et näidata suurt hulka ureaasi, mis on toodetud perekonna Proteus liikide kaupa.

Teine on tundlikum ja suudab tuvastada väikeseid koguseid ureaasilahust hilinemisega tekitatud teiste bakteriaalsete nagu Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus ja Helicobacter Mycobacterium.

Stuarti karbamiidi pulber koosneb karbamiidist, naatriumkloriidist, dikaliumfosfaadist, monokaliumfosfaadist, pärmiekstraktist, fenoolpunasest ja destilleeritud veest..

Christenseni puljong või agari uurea koosneb peptoonidest, naatriumkloriidist, monokaliumfosfaadist, glükoosist, uureast, fenoolpunasest, destilleeritud veest ja agar-agarist. Viimane ainult siis, kui see on tahke kandja.

Indeks

• 1 Sihtasutus
  • 1.1 Stuarti uurea puljong
  • 1.2 Christenseni puljong või agari uurea
  • 1.3 Mõlema meedia tõlgendamine (Stuart ja Christensen)
• 2 Valmistamine
  • 2.1 Stuarti uurea puljong
  • 2.2 Christenseni puljong või agari uurea
• 3 Kasutamine
• 4 karbamiidi testi külvamine
• 5 Kvaliteedikontroll
• 6 Viited

Sihtasutus

Ensüüm ureaas hüdrolüüsib karbamiidi, moodustades süsinikdioksiidi, vett ja kahte ammoniaagi molekuli. Need ühendid reageerivad lõpp-produkti, mida nimetatakse ammooniumkarbonaadiks, moodustamiseks.

Stuarti uurea puljong

Stuart'i uurea puljong on puhverdatud pH väärtusega 6,8. Seetõttu peab mikroorganism olema võimeline moodustama suurel hulgal ammooniumi, et punaseks muutuda fenooliks. PH peab tõusma üle 8.

Seetõttu on Stuart'i karbamiidi pulber selektiivne Proteus'e liikide suhtes, andes positiivseid tulemusi 24 kuni 48 tunni jooksul pärast inkubeerimist ja ei ole efektiivne bakterite puhul, mis tekitavad ureaasi väikese koguse või aeglaselt karbamiidi hüdrolüüsivad..

Seda seetõttu, et Proteuse liigid on võimelised kasutama uureat lämmastiku allikana. Seevastu vajavad teised ureaasi tootvad bakterid täiendavat allikat.

Kuid Pérez jt. (2002) määrati, et uurea puljongit Stuart oli sama tõhus kui Christenseni karbamiidi agar kindlaksmääramiseks karbamaasi pärmiliinidesse perekondadest Candida, Cryptococcuse, Rhodotorula Trichosporon ja Saccharomyces.

Uuringu autorid väidavad, et nad on saavutanud mõlema söötmega (Stuart ja Christensen) 100% kokkusattumus, inkubeerides 24 ja 48 tundi; tingimusel, et nad võtsid nii positiivsed tüved, mis suutsid muuta meediat tugevaks roosa-fuksia värviks.

See selgitus on vajalik, kuna Lodder (1970) kinnitas, et peaaegu kõik pärmid suudavad paigutada Christenseni ureaagari kalde kahvaturoosa. Seda seetõttu, et nad võivad karbamiidi minimaalsetes kogustes hüdrolüüsida ja amiinide moodustumist pinnal olevate aminohapete oksüdatiivse dekarboksüülimise teel. Seda ei tohiks tõlgendada positiivsena.

Christenseni puljong või uureaagar

Christenseni uurea puljong või agar on vähem puhverdatud, võimaldades avastada väikese koguse ammooniumi. Lisaks on see keskkond rikastatud peptoonide ja glükoosiga. Need ühendid põhjustavad teisi ureaasi tootvaid mikroorganisme, mis ei kasva Stuarti puljongis.

Samamoodi pakub Christenseni uurea-test kiiremaid tulemusi, eriti Proteuse puhul, mis annab minimaalse aja jooksul kuni 30 minuti jooksul maksimaalse aja jooksul tugeva positiivse tulemuse ja maksimaalse aja jooksul kuni 6 tundi..

Ülejäänud ureaasitehnikale tootvate mikroorganismide saavutada värvi poolpööre kergelt 6 tunni pärast ja tugevalt 24, 48, 72 või enam tundi ja isegi mõned tüved võivad anda nõrka reaktsioone pärast 5 või 6 päeva.

Mõlema meedia tõlgendamine (Stuart ja Christensen)

Söötme värvus on algselt kollakasoranž ja positiivne reaktsioon muudab söötme värvi roosa-fuksiaks. Värvi intensiivsus on otseselt proportsionaalne toodetud ammooniumi kogusega.

Negatiivne reaktsioon jätab algse värvi söötme, välja arvatud pärmid, mis võivad anda helepruuni Christenseni karbamiidi agariga..

Ettevalmistus

Stuarti uurea puljong

Kaaluge vajalik gramm vastavalt kaubandusmaja näidustusele. Lahustage eelistatavalt steriilses destilleeritud vees. Ärge kasutage lahustamiseks soojust, sest uurea on kuumuse suhtes tundlik.

Steriliseerimiseks kasutatakse membraanfiltreerimismeetodit. Selleks kasutatakse läbimõõduga 0,45 μm pooridega Millipore'i filtrit. Ärge kasutage autoklaavi. Pärast lahuse filtreerimist jaotatakse see steriilsetes torudes. Usaldusväärsete tulemuste saamiseks tuleb see viia 1,5 ml miinimumkoguseni 3 ml-ni maksimaalse koguse kohta tuubi kohta..

Hoida külmkapis ja enne kasutamist loksutada.

Kui filtreerimismeetod ei ole kättesaadav, tuleks usaldusväärseid tulemusi saada kohe kasutada.

Teine viis uurea Stuarti puljongi valmistamiseks on järgmine:

Mõned kommertsmajad müüvad karbamiidi katse jaoks poole baasi, va karbamiid.

Kaubamaja märgitud summa kaalutakse. See lahustatakse destilleeritud vees ja steriliseeritakse autoklaavis temperatuuril 121 ° C 15 minutit. Laske sellel natuke ja kui sööde on kuum, lisage 100 ml 20% -lise karbamiidi lahust ja steriliseeritakse filtrimisega..

See jaotub steriilsetes torudes, nagu eelnevalt kirjeldatud.

Christenseni puljong või uureaagar

-Uurea lahuse valmistamine

Kaaluge 29 grammi veetustatud uureat ja lahustatakse 100 ml destilleeritud vees. Steriliseerimiseks kasutage filtreerimismeetodit. Ärge autoklaavige.

-Karbamiid-agar

24 g dehüdreeritud baasagarit lahustatakse 950 ml destilleeritud vees. Steriliseerida autoklaavis temperatuuril 121 ° C 15 minutit. Laske seista, kuni see jõuab temperatuurini 50 ° C, ja lisada eelnevalt valmistatud uurea aseptiliselt.

Valage 4–5 ml steriilsetesse torudesse ja kallutage kuni tahkumiseni. Peaks olema pikk flööti tipp.

Seda söödet võib valmistada ka vedelal kujul.

Kasutamine

Uurea-test on äärmiselt tõhus Proteuse perekonna eristamiseks teistest Enterobacteriaceae perekonna perekondadest, arvestades Proteuse kiiret reaktsiooni.

Kui kasutatakse Christenseni koostist, aitab test teha vahet sama perekonna liikide vahel. Näiteks, S. haemolyticus ja S. warneri sedasi Staphylococcus koagulaasi negatiivne ja betahemolüütiline, kuid need erinevad selles S. haemolyticus see on negatiivne uurea ja S. warneri see on positiivne uurea.

Teisest küljest kasutas McNulty edukalt 2% Christenseni uurea puljongit Helicobacter pylori mao limaskestast (antral) võetud biopsiate proovides.

Selle olemasolu H. pylori seda tõendab positiivne uurea test. Tulemuste jälgimise kestus on otseselt proportsionaalne kohalolevate mikroorganismide kogusega.

Nagu näha, on see lihtne diagnoosimise meetod Helicobacter pylori mao biopsias.

Lõpuks on see test kasulik ka perekondade Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus ja Mycobacteria eristamiseks..

Uurea katse külvamine

Need kaks meetodit nõuavad tulemuste optimeerimiseks tugevat mikroobide inokulaati. Bakterite kolooniad võetakse eelistatavalt vere agarist ja Sabouraud agari pärmidest, välja arvatud mõned erandid. Inokulaat emulgeeritakse vedelas keskkonnas.

Stuart urea puljongi inkubeeriti temperatuuril 37 ° C 24 kuni 48 tundi, teades, et otsitakse ainult perekonna Proteus tüvesid, kui tüvi on bakter. Pärmide puhul võib seda inkubeerida temperatuuril 37 ° C või toatemperatuuril 24 kuni 48 tundi inkubeerimist.

Christenseni karbamiidi puhul inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C 24 tundi. Kui test on negatiivne, võib seda inkubeerida kuni 6 päeva. Kui test on positiivne enne 6 tundi, näitab see, et tegemist on perekonna Proteus tüvega.

Christenseni karbamiidi agari puhul on agarikoonus tugevalt inokuleeritud ilma torkekindluseta. Puljongit inkubeeritakse ja tõlgendatakse samal viisil.

Kvaliteedikontroll

Kontrolltüvesid saab kasutada söötme, näiteks, testimiseks Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 ja Salmonella typhimurium.  Kaks esimest peavad andma positiivseid tulemusi ja viimased kaks negatiivset tulemust.

Viited

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Stuart-uurea puljongi kasutamine ureaasitesti jaoks pärmide diagnoosimisel. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Saadaval aadressil: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Biokeemilised testid kliinilise tähtsusega bakterite identifitseerimiseks. 3. ed. Toimetus Panamericana. Buenos Aires Argentina.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
5. Laboratooriumid Britania. Christensen Medio (Urea agari baas) 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com