Soja puljong tripticaseína vundament, valmistamine ja kasutamine

The soja puljong tripticaseína See on vedel kultuurikeskkond, väga toitev ja mitteselektiivne. Tänu oma suurele mitmekülgsusele on see mikrobioloogia laboris üks levinumaid vedelkultuure.

Seda tuntakse ka puljongi tripticasa soja või digereeritud kaseiin-sojana, mille lühend on TSB oma lühendina inglise keeles Tryptic Ma olen Broth või CST oma akronüümi eest hispaania keeles. Selle kasutamine on oma koostise tõttu väga erinev. See koosneb tripteiinist, sojapeptoonist, naatriumkloriidist, dikaliumfosfaadist ja glükoosist.

See on võimeline reprodutseerima kliiniliselt olulisi patogeenseid baktereid, sealhulgas neid, mis on toitumisraskused ja anaeroobsed bakterid. Selles keskkonnas võivad areneda ka mõned oportunistlikud seened ja saasteained.

Oma kõrge toiteväärtuse tõttu on see mikroobse saastumise avastamiseks kõrge tundlikkusega, mistõttu valis USDA loomade ja taimede terviseinspektsiooni vaktsiinide mikrobioloogiliseks analüüsiks..

Samamoodi täidab tripticase soja supp erineva farmakopöa (Euroopa Parlamendi, Jaapani JP ja Põhja-Ameerika USP) nõudeid tööstuslikul tasandil toodetud toodete, nagu kosmeetika ja toidu mikrobioloogiliseks uurimiseks..

Teisest küljest väärib märkimist, et hoolimata selle suurest kasulikkusest on see vahend suhteliselt odav, seega on see taskukohane enamikule mikrobioloogia laboritele. Samuti on väga lihtne valmistada.

Indeks

• 1 Sihtasutus
• 2 Valmistamine
  • 2.1. Trypticamine sojauba
  • 2.2 - Tripticasein soja puljongid
• 3 Kasutage
• 4 Seeded
• 5 Kvaliteedikontroll
• 6 Piirangud
• 7 Viited

Sihtasutus

Tripteína, peptoon ja glükoos annavad talle olulised toitainelised omadused, et muuta see ideaalseks vahendiks kiireks mikroobide arenguks..

Enamikus mikroorganismides võib juba näha umbes 6 kuni 8 tundi inkubatsiooni. Siiski on aeglaselt kasvavaid tüvesid, mis võivad kasvada päevi.

Naatriumkloriid ja dikaliumfosfaat toimivad vastavalt osmootse tasakaalu ja pH regulaatorina. Kasvu olemasolu tõendab hägususe ilmumine söötmes; kui kasv puudub, jääb keskkond läbipaistvaks.

Tänu oma heledale värvile on võimalik jälgida pigmentide tootmist, nagu see, mis on kujutatud toote alguses oleval pildil, mis vastab pigmendile, mida toodab Pseudomonas aeruginosa. 

Ettevalmistus

-Trüptiline sojapuljong

Triptilase soja puljongi valmistamiseks kaalutakse 30 grammi dehüdreeritud kaubanduslikku söödet digitaalsel skaalal. Seejärel lahustub see liitris fiolil sisalduval destilleeritud vees.

Segul lastakse seista 5 minutit ja viiakse seejärel soojusallikasse, et aidata söötme lahustumisel. Seda tuleb 1 minuti jooksul keemise ajal sageli loksutada.

Pärast lahustamist jaotatakse see vastavalt vajadusele sobiva suurusega torudesse. Kasutada võib vatitõkkega või bakeliidikorgiga torusid. Seejärel steriliseeritakse tuubid autoklaavis olevas söötmes 121 ° C juures 15 minutit.

Söötme pH peaks olema 7,3 ± 0,2

Tuleb arvestada, et veetustatud söötme värvus on kerge beež ja seda tuleb hoida kuivas kohas 10 kuni 35 ° C juures. Valmistatud puljong on kerge merevaik ja seda tuleb hoida külmkapis (2–8 ° C)..

-Tripticasein soja puljongi variatsioonid

Trypticamine modifitseeritud soja puljongit saab valmistada sapphappe soolade ja novobiotsiini lisamisega, et muuta see selektiivseks. E. coli. Teine võimalus samal eesmärgil on valmistada vankomütsiini, tsefiksiimi ja telluriidiga (2,5 µg / ml) täiendatud tripticase soja puljongit..

Teisest küljest võib trüptikaasiini soja puljongile lisada rohkem glükoosi (0,25%), kui eesmärgiks on stimuleerida biokile moodustumist..

Kasutage

See on piisavalt toitev, et võimaldada kasvavate nõudlike või tüütu bakterite nagu Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp ja Brucella sp, ei ole vaja verd või seerumit täiendada.

Samamoodi võivad sellesse puljongisse areneda mõned seened, näiteks Candida albicans'i kompleks, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Lisaks on see söötme anaeroobsetes tingimustes ideaalne Clostridium perekonda kuuluvate bakterite, samuti kliiniliselt oluliste anaeroobsete mitteporteerunud bakterite taastamiseks..

Kui on lisatud 6,5% naatriumkloriidi, võib Enterococcus'i ja teiste rühma D streptokokkide kasvuks kasutada.

Uurimistasandil on see olnud väga kasulik mitmes protokollis, eriti biofilme või biofilme moodustavate bakterite uurimisel. Seda kasutatakse ka bakterite suspensiooni valmistamiseks 0,5% Mac Farlandist, mis on vajalik selleks, et teostada antibiootogrammi Kirby ja Baueri meetodil..

Sel juhul võetakse 3-5 kolooniat, millel on sarnane välimus, ja emulgeeritakse 4-5 ml trüptikaseiini soja puljongis. Seejärel inkubeeritakse seda 2 kuni 6 tundi temperatuuril 35-37 ° C ja seejärel reguleeritakse soovitud kontsentratsioonini steriilset soolalahust. Tryptikaasi soja puljongit ei tohi kasutada 18 kuni 24 tundi inkubeerimisel.

Külvatud

Proovi võib külvata otse või subkultuureeritud puhtaid kolooniaid, mis on võetud selektiivsest söötmest. Inokulaat peaks olema väike, et keskkond enne inkubeerimist pilvata.

Tavaliselt inkubeeritakse 24 tundi aerobioosi 37 ° C juures, kuid need tingimused võivad varieeruda sõltuvalt soovitud mikroorganismist. Samuti võib seda vajadusel inkubeerida anaeroobsetes tingimustes 37 ° C juures mitu päeva. Näiteks võib nõudlikes või aeglaselt kasvavates mikroorganismides inkubeerida kuni 7 päeva.

Farmatseutiliste ainete mikrobioloogilises analüüsis - nagu vaktsiinid - on protokollid rangemad. Sellistel juhtudel ei visata kasvata puljongit enne, kui see jõuab 14 päeva pidevasse inkubeerimisse.

Kvaliteedikontroll

Iga valmistatud partii puhul tuleb steriilsuse tõendamiseks inkubeerida 1 või 2 katseklaasi. See peab jääma muutmata.

Samuti saate teadaolevaid tüvesid oma käitumise hindamiseks istutada. Kasutatavate tüvede hulgas on:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 või 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Kõikidel juhtudel peab kasv olema rahuldav atmosfääri ja temperatuuri tingimustes, mis sobivad igale mikroorganismile.

Piirangud

-Glükoosi käärimine põhjustab keskkonda pH vähenemise hapete tootmisel. See võib olla ebasoodne mõnedele happesuse suhtes tundlike mikroorganismide ellujäämisele.

-See ei ole soovitatav tüvede säilitamiseks, sest lisaks happelisusele kaovad bakterid mõne päeva pärast toitainet koos sellest tuleneva mürgiste ainete kogunemisega, mis muudavad keskkonna ebameeldivaks.

-Tuleb hoolitseda kõigi steriilsuse protokollide eest, kuna puljongid on kergesti saastunud.

-Pärast tripticasein'i valmistamist ei püüa soja puljongid puljongit teisele steriilsele katseklaasile üle viia, sest seda tüüpi manöövrid on saastumise suhtes väga haavatavad..

Viited

1. Cona E. Hea tundlikkuse uuringu tingimused agari difusioonikatse abil. Rev. infektool 2002; 19 (2): 77-81. Saadaval aadressil: scielo.org
2. Briti labor Tryteine ​​soja puljong. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
3. MCD labor. Trytica soja puljong. Saadaval aadressil: electronic-systems.com
4. Neogeenlabor. Soja puljongi triptüüh. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Magnetilise immunoseparatsiooni tehnika hindamine Escherichia coli O157: H7 piimakreemides. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Saadaval aadressil: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmide moodustumine isoleeritud Staphylococcus aureus vastavalt mikroobivastasele tundlikkusele ja kliinilisele päritolule. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Saadaval aadressil: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Escherichia coli O157: H7 kahekordse eesmärgiga veiste kariloomade proovidest Miranda vallast, Zulia osariik, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Saadaval aadressil: scielo.org