Seleniidi puljongi alus, valmistamine ja kasutamine



The seleeni puljong See on selektiivne vedelikukeskkond. Leifson kavandas selle proovide rikastamiseks, kui kahtlustatakse perekonna Salmonella perekonna enteropatogeensete bakterite esinemist..

See meedium vastab Ameerika rahvatervise assotsiatsiooni (APHA) nõuetele ja on seetõttu heaks kiidetud Salmonella esinemise uurimiseks väljaheidete proovides, uriinis, vedelas või tahkes toidus, vees..

Selle keemiline koostis soodustab nende mikroorganismide taastumist ja omakorda pärsib teiste kasvamist. See on peamiselt toksiline enamiku Enterobacteriaceae perekonda kuuluvate bakterite suhtes. Siiski võimaldab see ka Shigella tüvede taastumist ja ei inhibeeri Pseudomonas ja Proteus kasvu..

See koosneb veevabast naatriumvesinikseleniidist, veevabast naatriumfosfaadist, peptoonidest ja laktoosist. Samuti on olemas variant, millele lisatakse tsüstiin, seega selle nimi selenite-tsüstiini puljong.

Praegu on eelistatud seleeni-tsüstiini puljongi kasutamine, kuna saadakse suurem Salmonella taaskasutamise protsent, mis on samaväärne sellega, mida täheldatakse teiste sel eesmärgil kasutatavate selektiivsete söötmetega, nagu näiteks Tetrathionate naatrium puljong..

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 - Selena
    • 2.2. Kaubanduskeskkonna valmistamine
    • 2.3 Seleeni-tsüsteiinipuljongi variant
  • 3 Kasutamine
  • 4 Seeded
  • 5 Kvaliteedikontroll
  • 6 Piirangud
  • 7 Viited

Sihtasutus

Puljongis sisalduvad peptiidid toimivad mikroorganismide nõuetekohaseks arenguks toitainetena. Salmonella tüved kasutavad peptione lämmastiku, vitamiinide ja aminohapete allikana.

Laktoos on fermenteeritav süsivesik, samas kui naatriumseleniit on pärssiv aine, mis aeglustab grampositiivsete bakterite ja enamiku soolestiku, eriti Enterobacteriaceae perekonna bakterite kasvu. Naatriumfosfaat on puhver, mis stabiliseerib söötme pH.

L-tsüstiini sisaldava seleeni puljongi variandi puhul on see täiendav ühend redutseeriv aine, mis minimeerib seleniidi toksilisust, suurendades Salmonella taastumist..

Ettevalmistus

-Seleniidi puljong

Kui teil on segu komponendid, võite kaaluda:

4 g veevaba naatriumvesinikseleniiti.

10 g veevaba naatriumfosfaati.

5 grammi peptoone.

4 g laktoosi.

Lahustage ühendid 1 liitris steriilses destilleeritud vees. Seda võib veidi lahustuda, et täielikult lahustuda.

Mõned laboratooriumid pakuvad 10 minutit steriliseeriva aine aurustamiseks, kuna autoklaavi ei tohi kasutada. Kui sööde on steriliseeritud, võib seda säilitada külmkapis, kuni seda kasutatakse.

Seda võib valmistada ka steriliseerimata ja steriilsetesse katseklaasidesse 10 kuni 15 ml.

Sellisel juhul tuleb see puhata ja kohe ära kasutada. Kuna keskkond ei ole steriilne, ei saa seda hilisemaks kasutamiseks külmkapis hoida.

-Kaubanduskeskkonna valmistamine

Kui kaubanduslik sööt on kättesaadav, kaalutakse 23 g veetustatud söödet ja lahustatakse ühes liitris steriilses destilleeritud vees. Lahustumise lõpetamiseks lühidalt soojendage. Ärge steriliseerige autoklaavis. Serveeri steriilsetes katseklaasides aseptiliselt 10 või 15 ml.

Söötme lõplik pH peaks olema 7,0 ± 0,2.

Tuleb märkida, et veetustatud söötme värvus on beež ja preparaat on selge ja poolläbipaistev merevaik.

Seleeni-tsüstiinipuljongi variant

See sisaldab seleeni puljongi samu ühendeid, kuid lisatakse 10 mg tsüstiini. Ülejäänud protseduur on täpselt sama, nagu eespool kirjeldatud.

Kasutamine

See keskkond on eriline kasutamiseks epidemioloogilistes uuringutes, kui haigus ei ole ägedas staadiumis, asümptomaatilised patsiendid või terved kandjad..

Salmonella perekonna isoleerimine on tavaliselt raske, kuna tavaliselt leitakse, et need saastavad proove vähesel määral. Väikestes kogustes on kergesti kattuv teiste suurema koguse bakterite perekondade kasv.

Teisest küljest on tooraine, millega töödeldud toiduaineid töödeldakse, sageli kuumuse, dehüdratsiooniprotsesside, desinfitseerimisvahendite, kiirguse ja säilitusainete kasutamisega..

Seetõttu on tooraines esinevad salmonellid väärkoheldud, kui toode esitatakse eespool nimetatud tööstusprotsessidele. Samuti võivad sellised kliinilised proovid nagu väljaheited olla nõrgad, kui nad pärinevad antibiootikumidega ravitud patsientidest..

Seetõttu peab iga proov, milles kahtlustatakse salmonelloosi esinemist, eelnevalt rikastatud laktoosipuljongiga ja seejärel rikastatud seleniitpuljongiga, et optimeerida selle taastumist selektiivses keskkonnas, nagu SS-agar, ksüloosi agar, lüsiin-deoksükolaat (XLD). ), muu hulgas enterokeha Hektoen agar (HE) ja roheline helge agar.

Külvatud

Väljaheidete jaoks võetakse 1 g proovi ja suspendeerige 10–15 ml selenitipuljongiga katseklaasis. Kui väljaheide on vedelik, võtke 1 ml ja suspendeerige puljongis. Rektaalsete tampoonide puhul eemaldage tampoonmaterjal puljongisse.

Tahkete toiduainete proovides võtke 1 gr ja peatage seleeni puljong.

Vedelates toitudes segatakse kahekordsel kontsentratsioonil võrdsetes osades seleeni puljong.

Uriiniproovide tsentrifuugimiseks visake supernatant ära, võtke kõik setted ja suspendeerige see seleeni puljongis.

Puljonge inkubeeritakse 37 ° C juures 24 tundi inkubeerimist. Bakterite kasvu tõendab hägusus. 42 ° C juures inkubeerimiseks võib lisada ka proovi kohta täiendava tuubi. Seejärel külvage selenite puljongist selektiivsed tahked kandjad.

Kvaliteedikontroll

Steriilsuse kontrollimiseks inkubeeritakse igast partiist seleeni puljongit inkubeerimata 37 ° C juures 24 tundi. Eeldatakse, et söötmele ei ole hägusust või värvi.

Söötme hea toimimise kontrollimiseks võib kasutada tuntud tüvesid, näiteks:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 ja Proteus mirabilis ATCC 43071.

Oodatavad tulemused on:

  • Kolme esimese bakteritüve puhul peab kasv olema rahuldav.
  • Et Escherichia coli osaline inhibeerimine.
  • Proteuse mõõdukas kasv.

Piirangud

Keskmise seleniidi puljong on inimese nahale mürgine, mistõttu tuleb vältida otsest kontakti.

Viited

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Naatriumseleeni ja naatriumtetrationaadi kultuurisöötme võrdlus, mõlemat inkubeeriti temperatuuril 37 ° C ja 42 ° C juures isoleerimine Salmonella kandjate väljaheide. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratooriumid Britania. Selenito Caldo. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenito puljong Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
  4. González-Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández-Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Salmonella spp. ja molekulaarsed vahendid selle avastamiseks. Tervis, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Saadaval: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.