EÜ puljongi alus, valmistamine ja kasutamine



The EÜ puljong või puljong Escherichia coli See on selektiivne vedelikukeskkond. Seda meediumit soovitavad standardmeetodid kogu- ja fekaalikolobakterite loendamiseks kõige tõenäolisema arvu vee- ja toiduproovide puhul, kus peamine kaasatud aine on Escherichia coli.

EÜ puljong koosneb tripteiinist, laktoosist, sapisooladest, dikaliumfosfaadist, monokaliumfosfaadist, naatriumkloriidist ja veest. Selle valem on strateegiliselt kavandatud selleks, et soodustada kogu- ja fekaalse kolibakterite kasvu ning takistada teiste kaasnevate mikroorganismide arengut.

Bakter Escherichia coli on peamine fekaalse kolibakter, mis on vees ja toiduallikates saasteainena, põhjustades olulisi seedetrakti kahjustusi.

Tuleb märkida, et seal on palju serotüüpe Escherchia coli; nende hulgas võib nimetada enterohemorragilist (EHEC), enteroinvassiivset (EIEC), enteropatogeenset (EPEC), enterotoksigeenset (ETEC) ja enteroaggregatiivi (EAEC).

See tähendab, et neil on võime lubada kõigi nende arengut, kuid ei suuda neid vahet teha. Selleks tuleb läbi viia täiendavad katsed.

Vee ja toidu mikrobioloogiline uuring kõige tõenäolisema arvu (NMP) abil kogu- ja fekaalse kolibakterite otsimiseks on protokoll, mis vastab mitmele faasile; eeldatav faas, kinnitav faas ja lõppfaas. EÜ puljongit kasutatakse kinnitusfaasis.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 EÜ puljong
    • 1.2 EC-puljong, mida on muudetud novobiotsiiniga
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 EÜ puljong
    • 2.2 Novobiosiiniga modifitseeritud EÜ puljong
  • 3 Kasutage
    • 3.1. Kogu ja väljaheite kolibakterite analüüs
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Soovitused
  • 6 Viited

Sihtasutus

EÜ puljong

EÜ sööde põhineb vajalike toitainelementide tagamisel, et optimeerida kogu- ja fekaalikolobaktereid, kus bakter on lisatud. Escherichia coli.

Need toitainelised elemendid on valmistatud tripteiinist, mis on suurepärane peptiidide ja aminohapete allikas. Lisaks sisaldab see ka laktoosi, fermenteeritavat süsivesikut, mis annab energiat ja võimaldab näidata, kas bakterid toodavad gaasi.

Teisest küljest sisaldab sööde sapphappe sooli, mis tagavad selektiivse iseloomu, kuna see pärsib proovis esinevate grampositiivsete mikroorganismide kasvu..

Samamoodi toimivad pH tasakaalustussüsteemina ka kaaliumfosfaat ja monokaliumfosfaat. See süsteem on vajalik, sest puljongis sisalduv laktoos kipub mikroorganismide fermenteerimisel keskkonda hapestama, kuid seda kompenseerivad fosfaatsoolad.

Seetõttu on need elemendid hädavajalikud, sest kontrollimatu happesus võib mõjutada soovitud mikroorganismide nõuetekohast arengut.

Naatriumkloriid stabiliseerib keskkonda osmootiliselt, samal ajal kui vesi on lahustuvate lahustitena ja tagab vedeliku konsistentsi söötmele..

EÜ puljong, mida on modifitseeritud novobiotsiiniga

Okrend ja Rose lõid mitmesuguse EÜ puljongi, mida nimetatakse novobiosiiniga modifitseeritud EÜ puljongiks. Modifikatsioon hõlmas sapphappe soolade kontsentratsiooni vähendamist ja 20 mg / dl novobiotsiini lisamist.

See muudatus soodustab. \ T Escherichia coli enterohemorragiline (O157: H7).

See bakteriaalne serotüüp põhjustab tugevat hemorraagilist koliiti, mis võib põhjustada hemolüütilist ureemilist sündroomi (HUS); mis omakorda võib tekitada ägeda neerupuudulikkuse, kõrge suremuse määraga, mis võib eakatel ulatuda kuni 50% -ni.

Selle bakteri põhjustatud haigestumise ja suremuse tõttu saastunud toidu tarbimise tõttu soovitab Ameerika Ühendriikide põllumajandusministeerium (USDA) seda vahendit laialdaselt kasutada.

Ettevalmistus

EÜ puljong

Kaalutakse 37,4 g veetustatud söödet ja lahustatakse 1 liitris destilleeritud vees. Segu peaks jääma 5 minutiks. Seejärel lahustatakse soojusallikas sageli lahustudes.

Pärast lahustumist jaotatakse see katseklaasidesse, mis on eelnevalt konditsioneeritud Durham-toruga. Steriliseerida autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit.

Söötme pH peaks olema 6,9 ± 0,2. Dehüdreeritud söötme värvus on beež ja valmistatud kergelt merevaigukollaseks.

Veine hoitakse külmkapis, kuni neid kasutatakse. Kasutamise ajal peavad puljongid olema toatemperatuuril.

Teisest küljest võib EÜ puljongit valmistada ka kahekordsel kontsentratsioonil.

EÜ puljong, mida on modifitseeritud novobiotsiiniga

Kaaluge 36,7 g veetustatud keskkonda ja lahustage 1 liitris vees. Ülejäänud preparaat on sama, mis eespool kirjeldatud.

Kasutage

Kokku- ja fekaalikolobakterite analüüs

EÜ puljong sobib ideaalselt kolibakterite uuringu kinnitamiseks NMP meetodil, nii veeproovides kui ka farmaatsiatoodetes ja toiduainetes..

Lazy hägune ja gaasitootmise puljongid, mis on saadud eeldatavas faasis, tuleks uuesti viia 2% helerohelisse sapi ja EÜ puljongisse..

Kolibakterite koguarvu puhul inkubeeritakse EÜ puljonge aerobioosis 24 kuni 48 tundi temperatuuril 37 ° C ja fekaalsete kolibakterite puhul inkubeeritakse neid aerobioosis 24 kuni 48 tundi 44 ° C juures..

Mõlemal juhul tõlgendatakse seda järgmiselt: gaasitootmisega häguseid torusid peetakse positiivseteks. Kui 24 tunni jooksul ei teki gaasi, jätkatakse inkubeerimist kuni 48 tundi.

EÜ positiivsed puljongid läbivad täieliku kinnitusfaasi, mis seisneb selektiivses söötmes nagu Mac Conkey agar, EMB agar või Endo agar..

Kui kasutatav puljong on EÜ modi fi tseeritud novobiotsiiniga, soovitatakse positiivsetel katseklaasidel uuesti asendada Mac Conkey agariga sorbitooliga.

Kvaliteedikontroll

Kvaliteedikontroll tuleb teha iga ettevalmistatud söötme partii kohta. Esiteks tuleb hinnata söötme steriilsust. Selles mõttes inkubeeritakse üks või kaks puljongit aerobioosi inokuleerimata 24 tundi temperatuuril 37 ° C. Oodatav tulemus on läbipaistev puljong, ilma hägususe või värvimuutuseta.

Teiseks tuleb hinnata tuntud tüvede kasvu, mille puhul võib kasutada järgmisi baktereid: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Kõigil juhtudel on oodata rahuldavat mikroobide arengut, jälgides häguse puljongi gaasi tootmiseks E. coli ja ilma gaasita Salmonella jaoks.

Muud tüved, mida võidakse kontrollida, on: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Need tüved peavad olema täielikult inhibeeritud.

Soovitused

-Durham'i torude paigutamine on kolibakterite uurimiseks oluline.

-Enne steriliseerimist jaotage sööde katseklaasidesse, mitte kunagi pärast seda.

-Ärge kasutage, kui söötmel on rohkem kui 3 kuud valmistamist.

-Ärge kasutage, kui kandja tavapärastes omadustes on muutusi.

Viited

  1. Laboratooriumid Britania. EÜ keskmine. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorragiline. Toiduohutuse ja rahvatervise keskus. 2010. Saadaval aadressil: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Keskmine EÜ. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
  4. Neogeen Medium EC on modifitseeritud novobiotsiiniga. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Tuvastamine, eraldamine ja iseloomustamine Escherichia coli Shiga toksiini tootja värskelt jahvatatud veiselihast, mis pärineb Tucumáni provintsi Concepcióni lihatööstustest. Rev Microgol by Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Saadaval aadressil: www.scielo.org.