Sihtasutus laktosado puljong, valmistamine ja kasutamine



The laktoosipuljong on vedel, mitteselektiivne söötmik, mida kasutatakse peamiselt rikastamisvahendina Salmonella tüvede eraldamisel töödeldud toitude, piimatoodete või vee mikrobioloogilisest analüüsist. Seda soovitab toiduainete mikrobioloogiliste spetsifikatsioonide rahvusvaheline komisjon (ICMPF)..

Sööde sisaldab želatiini, lihaekstrakti ja laktoosi ensümaatilist lagundamist, mis on bakterite kasvuks vajalikud ained. Lisaks on laktoos kääritatav süsivesik, nii et mõned kolibakterid on võimelised seda jaotama gaasitootmisega.

Sel põhjusel soovitab Ameerika rahvatervise ühing (APHA) laktoosipuljongit kogu- ja fekaalse kolibakteri bakterite eeldatavaks uurimiseks, kvalifitseerides selle suurepärase alternatiivina laurüülsulfaadi triptoosi puljongi asendamiseks kõige tõenäolisema numbri (NMP) standardtehnikaga. ), mida kasutatakse toidu, piima ja pinnavee, maa-aluste, puhke-, kodu- ja tööstusjäätmete proovide mikrobioloogiliseks analüüsiks.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutamine
    • 3.1 Rikastamine eel
    • 3.2. Kogu- ja fekaalikolobakterite analüüs
  • 4 Kandja kvaliteedikontroll
  • 5 Viited

Sihtasutus

Mõnede proovide mikrobioloogiliseks analüüsiks on eelpuhastamise etapp oluline selleks, et taastada konkreetne mikroorganism, mis võib olla väga väikeses koguses või ebasoodsates tingimustes, mis rikuvad või minimeerivad selle elujõulisust.

Selline on ka kuivade ja töödeldud toiduainete puhul, mis võivad olla saastunud Salmonellas sp. Nendel juhtudel on bakterite olemasolu korral nende tootmisprotsessi käigus füüsiliselt ja keemiliselt väärkoheldud..

Niisugusel viisil, et mikroorganismid puutuvad kokku muude kahjulike teguritega, nagu dehüdratsioon, inhibeerivate või toksiliste produktidega kokkupuutumine, ja teiste bakterite esinemisest suuremal määral kattuvale kattumisele..

Selles mõttes omab laktoosipuljong parandavat mõju mikroorganismi kahjustatud struktuuridele, põhjustades selle taastumise ja paljunemise sellisel viisil, et seda on võimalik tuvastada..

Samamoodi on laktoosipuljongil võime lahjendada inhibeerivaid aineid, mis võivad mõjutada selle elujõulisust, võimaldades selle arengut. Lisaks on laktoosipuljongi toiteväärtuslik koostis strateegilise tähtsusega Salmonella sp teiste mikroorganismide kohal.

Lõpliku identifitseerimise eesmärgil tuleb seda kasvatada muude lõplike kultuuride abil.

Teisest küljest võimaldab söötme kompositsioon avastada ka gaasi tootvaid laktoosiga kääritavaid mikroorganisme.

Ettevalmistus

Ühe liitri laktoosipuljongi valmistamiseks kaalutakse 13 grammi veetustatud söödet ja lahustatakse 1000 ml destilleeritud vees..

Keskkonna lahustamiseks vees saate lahuse veidi soojendada, kuid mitte liiga palju..

Pärast homogeenset valmistamist valmistatakse lahus järgmiselt: kui puljongit kasutatakse kolibakterite otsimiseks, valmistatakse katseklaasidega riiul ja Durham'i kääritamistoru asetatakse tagurpidi.

Durhami toru on väga oluline detail, sest see võimaldab tuvastada gaasi moodustumist, väärtuslikke andmeid kolibakterite otsimisel.

Kui torud on valmis, jaotatakse nendesse 10 ml laktoosipuljongit, mis peab olema piisav kogu Durhami toru katmiseks..

Kui laktoosipuljongit kasutatakse rikastamise eelpuhvrina, ei ole vaja Durham'i fermentatsioonitoru panna. Sel juhul on vajalik suurem kogus söödet (225 ml), mida serveeritakse 500 ml pudelites, laia suuga ja termokindla kruvikorgiga..

Seejärel viiakse torud või kolvid autoklaavile 121 ° C juures 15 minutit.

Sööde peaks jääma 25 ° C juures lõpliku pH tasemeni 6,9 ± 0,2.

Veine hoitakse külmkapis, kuni neid kasutatakse.

Enne kasutamist tuleb puljongid toatemperatuuril karastada.

Teisest küljest võib laktoosipuljongi valmistada ka kahekordsel kontsentratsioonil.

Mõned laborid lisavad laktoosipuljongile bromokresooli lilla pH-indikaatorina, et näidata, milliseid torusid on värvimuutuse tõttu laktoosikääritamisel. Sel juhul võtab puljong lilla värvi ja kui fermentatsioon muutub kollaseks.

Kasutamine

Mikrobioloogia laborites kasutatakse laktoosipuljongi laialdaselt suhteliselt odavaks vahendiks, mis pakub usaldusväärseid ja kiireid tulemusi (24-48 tundi).

Seda võib kasutada kogu ja fekaalide kolibakterite analüüsimiseks vees ja toidus või salmonelloosi eelpuhastusvahendina.

Eelnev rikastamine

Eelvõimendus on samm enne proovi rikastamist, mis parandab oluliselt Salmonella perekonna bakterite taaskasutamist töödeldud toidus..

Selleks külvatakse tahke toidu (25 grammi) või vedeliku (25 ml) proovi 225 ml laktoosipuljongi ja inkubeeritakse 24 kuni 48 tundi. Järgnevalt kasvatatakse seleeni tsüstiini puljongit või tetrationaadi puljongit rikastatud söötmes. Siis läheb see selektiivsele meediale XLD ja SS.

Kokku- ja fekaalikolobakterite analüüs

See on suurepärane vahend fekaalse saastumise näitajana.

Seetõttu on laktoosipuljong ideaalne kolibakterite uuringu eeldatava faasi jaoks kõige tõenäolisema arvu meetodiga.

Proovide puhul, kus kahtlustatakse suurt hulka kolibaktereid, inokuleeritakse väiksem kogus kolibaktereid (1 ml), samas kui proovide puhul, kus kahtlustatakse väiksemat kolibakterite kogust, inokuleeritakse rohkem proove (10 ml)..

Analüüsiks tehakse 10 lahjendust-1, 10-2, 10-3, iga kasutatava kontsentratsiooni jaoks 3-5 toru patarei moodustamine.

Igast lahjendusest külvatakse sama mahuga laktoosipuljongid.

Torusid inkubeeritakse 24 tundi. Negatiivsed puljongid inkubeeritakse veel 24 tundi.

Tulemuste tõlgendamisel järgitakse kahte omadust: esimene on hägususe olemasolu või puudumine ja kuna see keskkond ei sisalda pH-indikaatorit, ei muutu värvi..

Teine on gaasi tootmine või mitte. Gaas on kergesti demonstreeritav Durhami tuubis ühe või mitme õhumulliga.

Positiivseks peetakse, kui täheldatakse mõlemat omadust, st hägusust gaasi tootmisel. Positiivsed torud tuleks uuesti kinnitada kinnitavas keskkonnas (puljong Brilliant Green 2% Bile ja EC puljong).

Kandja kvaliteedikontroll

- Söötme valmistamisel on oluline mitte unustada Durhams'i torusid, kui selle eesmärk on kolibakterite uurimine..

- Enne steriliseerimist ärge sööde üle kuumutage.

- Jaotage katseklaasid enne steriliseerimist, mitte kunagi pärast seda.

- Ärge kasutage, kui söötmel on rohkem kui 3 kuud valmistamist.

- Ärge kasutage, kui märkate mingeid muutusi söötme tavapärastes omadustes.

- Laktoosipuljongi partii valmistamisel kontrollige selle kvaliteeti istutatavatel tüvedel Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii ja Klebsiella pneumoniae. Nad kasvavad väga hästi, gaasi tootmine (positiivne kontroll).

- See võib sisaldada ka Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, hästi kasvav, kuid ilma gaasitootmiseta (negatiivne kontroll).

- Tuleb märkida, et veetustatud söötme algvärv on beež ja väga selge ja läbipaistev kollane. Värvi või välimuse muutumise korral võib see halveneda.

Viited

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Bioloogia ja keskkonna mikrobioloogia. (2013) 1. väljaanne. Cartagenasi ülikool, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. (2009). Toidu mikrobioloogilise analüüsi meetodid. 2nd ed. Keemiainstituut, UNAM. Mehhiko.
  3. Laborid Conda Pronadisa. 2017. Laktoosipuljong kahekordne kontsentratsioon (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Koliformsete bakterite Xochimilco järve setetest ekstraheerimise meetodite võrdlus Mehhikos. Rev. argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. Saadaval aadressil: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Kesk-, Cordillera ja pealinna omavalitsuse osakondade arteeskaevude vee mikrobioloogilise kvaliteedi määramine. Mem. Inst. Investig. Cienc. Tervis 2013; 11 (1): 5-14. Saadaval: scielo.iics.