Vogel-Johnsoni Agari vundament, valmistamine ja kasutamine



The Vogel-Johnsoni agar on tahke, selektiivne ja diferentsiaalne kultiveerimiskeskkond, mis on spetsiaalselt valmistatud isoleerimiseks Staphylococcus aureus. Selle keskkonna loodi Vogel ja Johnson 1960. aastal Zebovitzi, Evani ja Niveni poolt 1955. aastal koostatud glütsiin-telluri agari modifikatsioonist..

Modifikatsioon seisnes söötmes sisalduva mannitooli kontsentratsiooni suurendamises ja pH indikaatori lisamises. Praegune valem koosneb tripteiinist, pärmiekstraktist, mannitoolist, dikaliumfosfaadist, liitiumkloriidist, glütsiinist, fenoolpunasest, agarist, 1% kaaliumtelluriidi lahusest ja veest..

Tuleb märkida, et on ka teisi vahendeid, mis sarnaselt Vogel-Johnsoni agariga on selektiivsed S. aureus, nagu soolatud mannitooli agar ja Baird Parkeri agar. Selles mõttes võib öelda, et Vogel-Johnsoni agari vundament on segu soolase mannitooli agari ja Baird Parkeri agari vahel..

Esimeses. \ T S. aureus Neid eristatakse mannitooli kääritamisega ja pH indikaatori muutmisega kollaseks. Teisest küljest on teises S. aureus seda iseloomustab telluriidi vähendamine telluuriks ja hallide kuni mustade kolooniate moodustamine. Mõlemaid omadusi täheldatakse Vogel-Johnsoni agaris.

See meedium, nagu tema kolleegid, on kasulik Staphylococcus aureus toiduainete proovides, tööstustoodete sanitaarkontrollis ja kliinilistes proovides.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Toitainete panus
    • 1.2 Valikuline võimsus
    • 1.3 Diferentsiaalvõimsus
    • 1.4 Osmootse tasakaalu ja tahkestamise aine
  • 2 Valmistamine
    • 2,1 1% w / v kaaliumtelluriidi lahus
    • 2.2 Vogel-Johnsoni agarialus
  • 3 Kasutage
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Viited

Sihtasutus

Toitainete panus

Vogel-Johnsoni sööde sisaldab tripteiini ja pärmi ekstrakti; mõlemad ained tagavad pika ahelaga aminohapped, mis toimivad bakterite kasvuks vajalike süsiniku- ja lämmastikuallikana. Selles keskkonnas kasvavad bakterid võtavad nende ainete toitained.

Selektiivne võimsus

Vogel-Johnsoni agar on võimeline pärssima gramnegatiivsete bakterite ja isegi mõnede grampositiivsete bakterite kasvu, soodustades koagulaas-positiivsete stafülokokkide arengut. Inhibeerivad ained on kaaliumtelluriit, liitiumkloriid ja glütsiin.

Diferentsiaalvõimsus

Aineid, mis muudavad selle diferentseeruva keskkonna, on mannitool ja kaaliumtelluriit. Mannitool on süsivesik ja kääritamisel tekivad happed, mis muudavad sööde punast kollaseks, mis toimub tänu fenoolpunasele pH-indikaatorile..

Kui värvitu telluur metalli vabaks telluriidiks langeb, on see tumehall kuni must värv.

The Staphylococcus aureus mannitooli ja vähendab telluriiti telluuriks. Sellepärast on tüüpilised kolooniad S. aureus selles keskkonnas on nad hallid või mustad, ümbritsetud kollase söötmega.

Selles söötmes kasvavad bakterid, mis ei vähenda telluriiti või fermenteerima mannitooli, moodustavad peptiidide kasutamisega keskkonda leeliselisuse tõttu läbipaistvaid kolooniaid, mida ümbritseb punane sööde, veelgi intensiivsem kui algne värv..

Teisest küljest kasvavad telluriiti vähendavad bakterid, mis ei fermenteeri mannitooli, halli või musta kolooniaga, mida ümbritseb sügavpunane värvus..

Kui sööde valmistati ilma kaaliumtelliti lisamiseta, siis kolooniad S. aureus nad arenevad kollaste kolooniatena, mida ümbritsevad kollased söötmed, nagu soolane mannitooli agar.

Osmootne tasakaal ja tahkestav aine

Dikaliumfosfaat säilitab sööde osmootse tasakaalu ja reguleerib pH neutraalsusele. 7.2. Kuigi agar annab kultuurisöötmele tahke konsistentsi.

Ettevalmistus

1% kaalium-telluuri lahus w / v

See lahus ei sisaldu veetustatud söötmes, kuna seda ei saa steriliseerida autoklaavis. Seetõttu valmistatakse see eraldi ja lisatakse steriliseeritud söötmele.

Mõned kommertsmajad müüvad kasutusvalmis 1% kaaliumtelluriidi lahust. Kui soovite laboris valmistuda, toimige järgmiselt.

Kaalutakse 1,0 g kaalium-telluriiti ja mõõdetakse 100 ml destilleeritud vett. Kaaliumi telluur lahustatakse vees ja seejärel täidetakse vee kogus 100 ml-ni. Lahus steriliseeritakse filtreerimismeetodil.

Vogel-Johnsoni agarialus

Kaalutakse 60 g veetustatud söödet ja lahustatakse 1 liitris destilleeritud vees. Segu kuumutatakse keemistemperatuurini, et see saaks täielikult lahustuda. Lahustamisprotsessi ajal segatakse sööde sageli.

Steriliseerige autoklaavis 15 naela rõhu ja 121 ° C juures 15 minutit. Eemaldage autoklaavist ja lastakse seista, kuni keskkond jõuab temperatuurini ligikaudu 45 kuni 50 ° C. Lisage 20% eelnevalt valmistatud kaalium-telluuri lahust 1% -ni.

Segatakse ja valatakse steriilsetesse Petri tassidesse. Laske tahkuda ja tellida ümberpööratud, et neid hiljem kasutada külmkapis.

Valmistatud söötme lõplik pH peaks olema 7,2 ± 0,2.

Enne proovi istutamist oodake, kuni plaat võtab ümbritseva õhu temperatuuri.

Valmistatud söötme värvus on punane.

Kasutage

Kuigi seda saab kasutada isoleerimiseks S. aureus mis tahes tüüpi proovides kasutatakse seda peamiselt farmaatsiatoodete, kosmeetika ja toidu mikrobioloogiliseks analüüsiks.

Soovitatav on inokulaat tihe. Külvamist võib läbi viia plaatina käepidemega või pinnaga Drigalski spaatliga.

Plaate inkubeeritakse aerobioosis 24 kuni 48 tundi temperatuuril 35-37 ° C.

Kvaliteedikontroll

Vogel-Johnsoni söötme kvaliteedikontrolli teostamiseks võib kasutada järgmisi kontrolltüvesid:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 või Proteus mirabilis ATCC 43071.

Oodatav tulemus on järgmine:. \ T S. aureus Rahuldav kasv mustade kolooniatega, mida ümbritseb kollane keskkond. Et S. epidermidis korrapärane kasv poolläbipaistva või musta kolooniaga, mida ümbritseb punane sööde.

Samamoodi E. coli on oodata täielikku pärssimist ja Proteus mirabilis osaline või täielik inhibeerimine; kui see kasvab, teeb see seda säästlikult ja kolooniad on mustad, mida ümbritseb keskmine punane värv.

Viited

  1. BD laboratooriumid. VJ (Vogel ja Johnson Agar). 2006. Saadaval aadressil: bd.com
  2. Laboratooriumid Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  3. Laboratooriumid Britania. Kaalium-telluur. 2015. Saadaval aadressil: britania.com
  4. Himedia Laboratory. Vogel-Johnsoni Agari keskmine. 2018. Saadaval aadressil: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel-Johnsoni Agari baas. Mercki mikrobioloogia käsiraamat. 12. väljaanne, lk 502-503. Saadaval: Kasutajad / Meeskond / Allalaadimised
  6. Wikipédia toetajad, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia entsüklopeedilisele elule,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venezuela standard Covenin 1292-89. (1989). Toit Isoleerimine ja loendamine Staphylococcus aureus. Saadaval:sencamer.gob.ve