Heleroheline agari vundament, valmistamine ja kasutamine



The heleroheline agar see on tahke söötme, kõrge selektiivsusega. Seda kasutatakse ainult perekonna Salmonella tüvede eraldamiseks, kuid on ka mõningaid erandeid, nagu tüphi ja paratüüfiliigid, mis ei kasvata selles söötmes.

Salmonella perekonna otsimine toimub sageli väljaheidete, vee või toidu proovides. Selles mõttes võib see meedia olla väga kasulik. See agar loodi 1925. aastal Kristenseni, Lesteri ja Jurgeni poolt, hiljem Kauffmanni poolt.

See koosneb pluripeptonidest, mis pärinevad loomse koe peptiidilisest seedimisest ja kaseiini seedimisest, samuti sisaldab pärmiekstrakti, naatriumkloriidi, laktoosi, sahharoosi, fenoolpunast, helerohelist ja agar-agarit.

Seda iseloomustab see, et see on väga ebameeldiv vahend enamiku bakterite jaoks, soodustades Salmonella kasvu, kuid mõned kolibakterid suudavad selles püsida, arenedes nõrgalt.

Oluline on rõhutada, et sellises keskkonnas ei kasva Shigella perekond ega ka Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Seega, kui soovitakse neid mikroorganisme isoleerida, tuleks kasutada ka teisi vahendeid, nagu näiteks XLD agarit..

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Heleroheline agar
    • 1.2 Helerohelise agari (BGA) variandid
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutamine / rakendused
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Viited

Sihtasutus

Heleroheline agar

Igal kandja moodustavatel komponentidel on spetsiifiline funktsioon, mis määrab agari omadused ja omadused.

Pluripeptonas ja pärmiekstrakt on toitainete allikas, kust mikroorganismid võtavad nende arenguks vajalikud lämmastiku ja mineraalid. Laktoos ja sahharoos on mikroorganismide energiaallikad, mis on võimelised neid fermenteerima.

Heleroheline on pärssiv aine, mis takistab grampositiivsete bakterite ja suure hulga gramnegatiivsete mikroorganismide arengut.

Naatriumkloriid tagab sööde osmootse stabiilsuse. Kui fenoolpunane on pH indikaator, muutub see süsivesikute fermenteerimisel tekkivate hapete tekke tuvastamisel värvi.

Laktoosi ja sahharoosi kääritamata kolooniad kasvavad sellises valge värvi, roosa või läbipaistva söötmega punases taustal. Näiteks bakterid perekonnast Salmonella.

Kuigi selles söötmes kasvavad laktoosiga käärivad bakterid või sahharoosid, võivad nad töötada kollakasrohelisel taustal rohekaskollase või rohekaskollase kolooniaga. Näiteks, Escherichia coli ja Klebsiella pneumoniae.

Helerohelise agari (BGA) variandid

On teisi heleda rohelise agari variante; novobiotsiini roheline agari helge glükoos (NBG) ja novobiotsiini agar heleroheline glütseroollaktoos (NBGL).

Novobiotsiini agari heleroheline glükoos (NBG)

Sisaldab trüptikaasi sojaagarit, raud (II) ammooniumtsitraati, naatriumtiosulfaadi pentahüdraati, fenoolpunast, glükoosi, helerohelist, novobiotsiini ja destilleeritud vett..

Teenib salmonella kolooniate eraldamist väljaheidete proovidest.

Sel juhul on heleroheline ja novobiotsiin inhibeerivad ained, mis takistavad grampositiivsete bakterite ja mõnede gramnegatiivsete mikroorganismide kasvu.

Väävli allikaks on naatriumtiosulfaat ja raua allikas on raudtsitraat, mis on mõlemad vajalikud, et ilmneda vesiniksulfiidi tootmine, moodustades musti raudsulfiidi sadet.

Glükoos on fermenteeritav süsivesik ja fenoolpunane on pH indikaator.

Selles keskkonnas arenevad Salmonella kolooniad suure punase haloga ümbritsetud musta keskusega, millele järgneb selge nähtav ala. Mõned tüved Citrobacter freundii tootma kolooniaid, mis on identsed Salmonella'ga.

Heleroheline novobiotsiini agarglütseroollaktoos (NBGL)

See sööde sisaldab trüptikaasi sojaagarit, raud (II) ammooniumtsitraati, naatriumtiosulfaati, laktoosi, glütserooli, helerohelist, novobiotsiini ja destilleeritud vett..

Selle söötme ja eelmise vahega on see, et glükoos asendatakse laktoosiga ja glütserooli ja fenoolpunast ei kasutata.

Söödet kasutatakse ka Salmonella liikide isoleerimiseks, kolooniad arenevad mustana vesiniksulfiidi tootmisel.

Ainult kolooniad, mis ei tooda glütseroolist või laktoosist hapet, saavutavad H-tootmise2Piisab, sest madal pH mõjutab H teket2S. Selle tulemuseks on värvitu kolooniad enamiku Proteuse ja Citrobacter'i liikide jaoks.

Ettevalmistus

-Kaalutakse 58 grammi kaubanduslikult saadud kuivatatud söödet. Lisage see liitri destilleeritud vees. Segage, lase seista paar minutit ja esitada preparaat soojusallikale, kuni see täielikult lahustub.

-Autoklaav 121 ° C juures 15 minutit, ei ületa steriliseerimisaega.

-Laske steriilsetel Petri tassidel seista ja kuumutada. Lõplik pH peaks olema 6,9 ± 0,2.

-Laske kasutada ja kasutada külmkapis kuni kasutamiseni. Enne istutamist peaksid plaadid olema toatemperatuuril.

-Pulbrikeskkond on roheline ja valmis võtma oranži-pruuni või punakasrohelise värvi, sõltuvalt pH-st ja kommertsmajast. Väga pruun värv näitab, et agar oli ülekuumenenud.

-Kui agar on tahkunud, ei ole soovitatav uuesti sõnastada, kuna sööde halveneb.

Kasutused / rakendused

Seda söödet kasutatakse perekonna Salmonella tüvede otsimiseks väljaheidetest ja piimatoodetest..

Kuna see on üsna ebameeldiv keskkond, on soovitatav istutada rohke inokulaadi, kui kasutatakse otsest proovi. Vastasel juhul tuleb proovide eelpuhastamine ja rikastamine teha enne selles söötmes istutamist.

Kuna mõned Salmonella tüved on pärssitud või kasvavad raskustega, on soovitatav seda söödet kaasata teiste selektiivsete agaritega Salmonella'le..

Kogu iseloomuliku Salmonella kolooniaga tuleb lõplikult identifitseerida biokeemilised testid.

Kvaliteedikontroll

Heleda rohelise agari keskkonna hea toimimise testimiseks võib ATCC tüvesid kasutada selle arengu jälgimiseks..

Kvaliteedikontrolli kõige sagedasemad tüved on järgmised: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Esimesed 3 peavad andma roosad või läbipaistvad valged kolooniad punasel taustal. Hea arenguga salmonella ja harva või regulaarselt kasvav Proteus.

Klebsiella ja Escherichia puhul on oodata kollakasekollaseid kollakaid kollast tausta, sh Shigella ja Staphylococcus'i puhul..

Dehüdreeritud söödet tuleb hoida toatemperatuuril kuivas kohas, sest sööde on väga hügroskoopne.

Viited

  1. Difco Francisco Soria Melguizo laboratoorium S.A. Brilliant Green Agar. 2009
  2. Briti labor Bright Green Agar. 2015.
  3. BD laboratoorium. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. (5. väljaanne). Argentina, Redaktsioon Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scotti mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja