Agari KTK rajamine, ettevalmistamine ja kasutamine



The TSI agar või raua kolmekordse suhkru agar on tahke kultiveerimiskeskkond, mis toimib gram-negatiivsete batsillide esialgse identifitseerimise biokeemilise testina. See põhineb olemasolevate suhkrute kääritamise tõendamisel ning vesiniksulfiidi ja gaasi tootmisel.

Selle koostis ja vundament on väga sarnased Kligleri rauaproovile, kusjuures erinevus sisaldab ainult glükoosi ja laktoosi. Selle asemel, nagu nimigi ütleb, sisaldab kolmekordne raud raud kolm fermenteeritavat süsivesikut: glükoosi, laktoosi ja sahharoosi..

Lisaks on KTK-söötmel neli valgu derivaati, mis muudavad selle väga toitevaks agariks: pärmiekstrakt, lihaekstrakt, peptoon ja proteoosi peptoon. Samuti sisaldab see raua ammooniumsulfaati, naatriumtiosulfaati, naatriumkloriidi, fenoolpunast ja agarit.

Mikroorganismi võimetus fermentatsioonis sisalduva glükoosi kääritamiseks välistada kohe, et see ei kuulu Enterobacteriaceae perekonda. Seega on see test oluline selleks, et otsustada, millist identifitseerimisviisi tuleks kasutada perekonna ja liigi määramiseks.

Iga labor otsustab, kas see töötab TSI agari või Kligleri agariga.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Naatriumkloriid ja agar
    • 1.2 pH indikaator (fenoolpunane)
    • 1.3. Valgu derivaadid (pärmiekstrakt, lihaekstrakt, peptoon ja proteoosi peptoon)
    • 1.4 Süsivesikute (glükoos, laktoos ja sahharoos) fermentatsioon
    • 1.5 Gaasi tootmine
    • 1.6 Naatriumtiosulfaat ja raud (II) ammooniumsulfaat (vesiniksulfiidi tootmine) \ t
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutamine
  • 4 Seeded
  • 5 Piirangud
  • 6 Viited

Sihtasutus

Iga üks ühenditest täidab funktsiooni söötmes.

Naatriumkloriid ja agar

Naatriumkloriid on vajalik sööde osmootse tasakaalu säilitamiseks. Kui agar annab tahke konsistentsi.

PH indikaator (fenoolpunane)

Valmistatud söötme pH on tasakaalustatud väärtusega 7,3 ja pH indikaator (fenoolpunane) muutub kollaseks allpool 6.8. See tähendab, et suhkrute kääritamisel tekkiv väike kogus hapet muudab söötme punastoranžilt kollaseks.

Kui käärimine ei toimu, leevendatakse söödet leeliseliste peptiinide abil, muutes punane-oranž kuni tugev punane.

Valgu derivaadid (pärmiekstrakt, lihaekstrakt, peptoon ja proteosepeptoon)

Kui bakterid metaboliseerivad TSI agaris olevad valgud, toodetakse amiinid, mis leelistavad keskkonda (peamiselt kaldtasandil), sest reaktsioon vajab hapnikku. Amiinid lülitavad raamile tugeva punase.

Kuid see sõltub bakterite võimest käärida süsivesikuid või mitte.

Süsivesikute (glükoos, laktoos ja sahharoos) fermentatsioon

Suhkrute kääritamise uuring võib anda mitmeid pilte ja iga neist tõlgendatakse erinevalt. Katse tõlgendus jagab mikroorganismid kolme kategooriasse: mitte-glükoosi fermentorid, mitte-laktoos fermentorid ja laktoosi / sahharoosi fermenterid.

Tuleb märkida, et glükoosi kogus söötmes on piiratud, samas kui laktoosi ja sahharoosi kontsentratsioon on 10 korda suurem.

Enterobacteriaceae perekonna bakterid ja teised glükoosi käärivad mikroorganismid hakkavad seda suhkrut fermenteerima, sest see on energia jaoks kõige lihtsam süsivesik..

Teisest küljest on laktoos ja sahharoos keerulised süsivesikud, mis tuleb lagundada ja muundada glükoosiks, et nad saaksid siseneda Embden-Meyerhofi tsüklisse.

-Kääritamata glükoosi mikroorganismid

Kui inokuleeritud mikroorganism ei ole võimeline glükoosi fermenteerima, võib palju vähem süsivesikuid kääritada. Seetõttu ei moodustu siin happeid, kuid peptiidide kasutamise tõttu on kaldes amiini moodustumine.

Sel juhul pöörab kaldenurk tugevamale punasele ja toru põhja jääb muutumatuks või võib ka leelistada, jättes kogu punase toru välja.

Tõlgendamine: K / K tähendab leeliselist või leeliselist või neutraalset tausta

Artikli alguses olevas pildis vaata toru D kujutist.

See tulemus näitab, et mikroorganism ei kuulu Enterobacteriaceae perekonda.

-Laktoosi / sahharoosi kääritamata mikroorganismid

Kui bakterid on võimelised fermenteerima glükoosi, kuid mitte laktoosi või sahharoosi, juhtub järgmine:

Bakter tarbib kogu glükoosi, mis esineb umbes 6 kuni 8 tunni pärast, nii et see suudab hapestada nii kaldu kui ka taco; see tähendab, et agar on täielikult kollane. Kuid kui glükoos on ammendunud ja laktoosi ja sahharoosi kasutamata jätmine, hakkavad bakterid valkude ainevahetust alustama.

See reaktsioon vajab hapnikku, seega esineb pinna pinna lagunemine pinnal (kaldus). Toodud amiinid leelistavad raamiga kollase kuni punase. See reaktsioon ilmneb 18 kuni 24 tundi inkubeerimisel.

Tõlgendamine: K / A on leeliseline ja happe taco.

Artikli alguses olevas pildis vaata toru B kujutist.

-Laktoos / sahharoosi käärivad mikroorganismid

Loomulikult võivad laktoosi ja sahharoosi kääritamiseks võimelised mikroorganismid glükoosi kääritada. Pärast seda, kui söötmes sisalduv glükoosi minimaalne kogus on ammendunud, hakkab moodustunud püruvaat metaboliseeruma, moodustades Krebsi aeroobse tsükli kaudu happeid ning ajavahemikus 8 kuni 12 tundi on kogu söötme kollane..

Kui bakterid on võimelised lõhustama laktoosi või sahharoosi, tekivad happed jätkuvalt ja 18 kuni 24 tunni pärast jääb kogu toru - nokk ja taco - kollaseks.

Tuleb märkida, et glükoosi kasutamine toimub kahel viisil: üks aeroobses vormis toru torus ja teine ​​anaeroobselt tuubi põhjas.

Tõlgendamine: A / A tähendab happe kalde / happe põhja. See võib esitada gaasi või mitte.

Artikli alguses olevas pildis vaata toru A kujutist.

Gaasi tootmine

Mõned mikroorganismid on võimelised suhkru kääritamise ajal gaasi tootma. Gaas tõestatakse torus rõhuga, mida see avaldab agari sees. Rõhk põhjustab mullide teket või agari nihkumist. Mõnikord võib gaasi teke sööda murda.

Oluline on, et TSI söötme külvamise ajal tekitaks punktsioon puhtalt agari keskel, kuni see jõuab põhjani. Kui punktsioon suunatakse toru seintele, võib see gaasi tootmisel põhjustada valepositiivseid tulemusi, kuna see pääseb läbi valesti moodustatud kanali.

Gaasi tootmine, aga ka agari kalde korral esinevad reaktsioonid vajavad hapnikku, mistõttu on soovitatav, et toru kaetakse puuvillaga, ja kui kasutatakse bakeliitkate, ei tohiks seda täielikult reguleerida.

Gaasi tootmine on positiivne (+) või negatiivne (-).

Naatriumtiosulfaat ja raua ammooniumsulfaat (vesiniksulfiidi tootmine) \ t

Bakterid, mis on võimelised tootma vesiniksulfiidi (värvitu gaas), võtavad söötmes sisalduva naatriumtiosulfaadi väävli. Kui H on moodustunud2S reageerib raua ammooniumsulfaadiga, saades raudsulfiidi (must sade selgelt nähtav).

H2S on positiivne (+) või negatiivne (-).

Artikli alguses olevas pildis vaata toru C kujutist.

Ettevalmistus

Kaalutakse 62,5 g veetustatud kolmekordse suhkru suhkru (TSI) agarit ja lahustatakse ühes liitris destilleeritud vees..

Kuumutage, kuni agar on täielikult lahustunud. Keeda mõnda minutit segades. Jaotage 4 ml söödet 13/100 katseklaasis puuvillase kaanega.

Steriliseerida autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit. Eemaldage autoklaavist ja laske libisema kaldu. Tuleb olla ettevaatlik, et nii alus kui ka raam on sama kaugusel.

Hoida külmkapis 2-8 ° C. Laske enne bakteritüve istutamist tuimastada.

Dehüdreeritud söötme värvus on kerge beež ja valmistatud sööde on punane-oranž

Valmistatud söötme lõplik pH on 7,3 ± 0,2.

Kasutamine

KTK testi kasutatakse laialdaselt mikrobioloogia laboris. See katse on hädavajalik, et juhtida perekonna ja liigi kindlakstegemiseks vajalike katsete tüüpi. Selle hea teostamine ja tõlgendamine võib säästa materjali ja tööd.

Kui tulemuseks on KSI K / K ja tsütokroomi oksüdaasi test on positiivne, siis on teada, et teiste perekondade seas tuleks katseid kasutada kääritamata gramnegatiivsete batsillide, nagu Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia identifitseerimiseks. Kui see on negatiivne oksüdaas, on see orienteeritud perekondadele Acinetobacter, Stenotrophomonas jne..

Teisest küljest, kui saadakse TSI A / A või K / A ja tsütokroomi oksüdaasi test on negatiivne, seda rohkem nitraate vähendatakse nitrititeks, on meil kindel, et tegemist on Enterobacteriaceae perekonda kuuluva mikroorganismiga. Sellisel juhul suunatakse identifitseerimisviis selle bakterirühma konkreetsetele testidele.

Teisest küljest, kui saadakse K / A või A / A pilt ja tsütokroomi oksüdaasi test on positiivne, suunatakse paigaldatavad täiendavad katsed Enterobacteriaceae perekonda mittekuuluvate käärivate tüvede identifitseerimisse, näiteks: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio ja Pasteurella.

Vesiniksulfiidiga negatiivne oksüdaas TSI suunab järgmiste Enterobacteriaceae perekonna perekondade identifitseerimist: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella või Salmonella.

Tüüpilise või mõõduka vesiniksulfiidiga leeliselise põhjaga leeliselise ja positiivse oksüdaasiga KTK juhib G-negatiivsete, fermenteerimata batsillide tootmiseks vajalike testide kasutamist.2S, näiteks Shewanella putrefaciens.

Lõpuks võib KTK-d kasutada vesiniksulfiidi tootmise uurimiseks grampositiivsetes batsillides, eriti kui seda kahtlustatakse. Erysipelotrix rhusiopathiae.

Külvatud

KTK sööde tuleb inokuleerida puhta kolooniaga, mis on isoleeritud primaarsetes või selektiivsetes kultuurides. Kui koloonia võetakse selektiivsest söötmest, mis on külvatud segatud taimestikuga proovidega, tuleb võtta ainult pind, sest koloonia alumisel osas võib selles söötmes olla elujõulised tüved..

Seetõttu ei tohiks silmus selektiivses keskkonnas kunagi jahutada, et koloonia võtta ja KTK sööde inokuleerida.

Istutamine toimub sirge silmusega või nõelaga. Punkti tehakse, hoolitsedes selle eest, et see oleks läbi keset keskosa kuni põhjani jõudmiseni ja siis istutamine lõpetab pinna siksakiga. Ärge tehke kahte torket.

Inkubeerige aerobiosis temperatuuril 37 ° C 18-24 tundi. Tõlgi sel ajal, mitte enne ega pärast.

Piirangud

KTK katse tuleb lugeda vahemikus 18–24 tundi inkubatsiooni. Enne seda aega lugemine võib anda vale positiivse fermentatsiooni A / A. Arvestades, et lugemine pärast seda aega võib tekitada vale negatiivse pildi mitte-fermentorist, mis on tingitud sööde leeliseliste peptoonide tarbimisest.

Viited

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokeemilised testid kliinilise tähtsusega bakterite identifitseerimiseks. 3. ed. Toimetus Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI agar." Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 10. juuli 2018, 08:09 UTC. 10. veebruar 2019, 03:33 Saadaval aadressil: en.wikipedia.org
  5. Laboratooriumid Britania. TSI Agar (kolmekordne suhkru rauagar). 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  6. BD laboratooriumid Kolmekordne raua agar (TSI Agar). 2003. Saadaval: bd.com