Agar Thayeri Martini vundament, ettevalmistamine ja kasutamine



The Thayer Martin agar See on väga toitev ja selektiivne tahke söötme isoleerimiseks Neisseria meningitidis ja Neisseria gonorrhoeae; mõlemad on tuntud kui patogeensed või kliiniliselt olulised Neisseria.

Thayer Martin agari üks tähtsamaid omadusi on toidulisandite kõrge sisaldus. See omadus on hädavajalik, sest Neisserias on toitumise seisukohast väga nõudlikud mikroorganismid ja seetõttu ei kasva ühises meedias.

Teisest küljest, kuna neid mikroorganisme tavaliselt leidub mittesteriilsetes piirkondades, on vajalik kaasataoleva taimestiku kasvu takistavate inhibiitorite lisamine, ilma et see mõjutaks perekonna Neisseria arengut..

See agar koosneb GC alusagarist, hemoglobiinist, täiendavatest toidulisanditest ja inhibeerivate ainete kompleksist (antibiootikumid ja seenevastased ravimid). Äripinnad müüvad iga lisa eraldi.

Sellesse söötmesse istutatav proov sõltub otsitavast mikroorganismist. Et Neisseria gonorrhoeae Ideaalsed proovid on tupe ja kusiti eritised. Samal ajal Neisseria meningitidis kõige sagedamini kasutatavad proovid on CSF, neelu- ja nina-näärmeerakud.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1,1 GC alusagar
    • 1.2 Hemoglobiin
    • 1.3 Rikastamise lisand
    • 1.4 Inhibiitorid
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 Algne Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin muudetud
  • 3 Kasutage
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Piirangud
  • 6 Viited

Sihtasutus

Neisseriad on mikroorganismid, mis on klassifitseeritud tüütuid ja seetõttu on nende isoleerimine raske. Sel põhjusel on Thayer Martín keeruline vahend ja iga selle komponent täidab funktsiooni, mida on selgitatud allpool:

GC tuumaagar

GC agar sisaldab proteoosi peptooni, maisitärklist, naatriumkloriidi, dikaliumfosfaati, monokaliumfosfaati ja agar-agarit. Selle koostisosad tagavad mikroobse arengu põhilised toitained, neutraliseerivad mürgised rasvhapped, aitavad säilitada osmootset tasakaalu, määratlevad pH ja tagavad tahke konsistentsi keskkonnale.

Hemoglobiin

Hemoglobiin sisaldab tegureid V ja X (nikotiinamiidadeniini dinukleotiid NAD ja hemin). Seetõttu kasvavad selles keskkonnas ka Haemophiluse liigid. Hemoglobiini võib saada kaubanduslikult veetustatud kujul või söötmele võib lisada värsket defibrineeritud veise verd..

Rikastamise täiendus

Teisest küljest tuleb Thayer-Martin söötmele lisada rikastuslisand, kuna baasagaris sisalduvad toitained ei ole piisavad Neisseria perekonna nõuetele..

Kõige sagedamini kasutatavat rikastamislisandit nimetatakse isovitalex. See sisaldab glutamiini, adeniini, NAD-i, kokarboksülaasi, guaniini, raudnitraati, p-aminobensoehapet, B12-vitamiini, tiamiini ja glükoosi. Kõik need ühendid on vajalikud patogeensete Neisseria väljatöötamiseks.

Inhibiitorid

Kuna see on väga toitev keskkond, tuleb inhibiitoreid kasutada selleks, et vältida mikroorganismide kasvu tavapärase piirkonna taimestikus ja soodustada seega perekonna Neisseria eraldamist..

Inhibiitorikompleks koosneb vankomütsiinist, kolistiinist ja nüstatiinist. Vankomütsiin inhibeerib grampositiivsete bakterite kasvu, kolistiin takistab gramnegatiivsete bakterite nagu Pseudomonas ja mõnede saprofüütiliste Neisseria arengut ning nüstatiin toimib pärmidele Candida albicans.

Siiski muudeti Thayer Martin agarit; muutused koosnesid trimetoprimi lisamisest, agari koguse suurenemisest ja täiendava glükoosi lisamisest. Need muutused paranesid oluliselt liikide taastumist Neisseria gonorrhoeae.

Tuleb märkida, et trimetoprim inhibeerib Proteus perekonna kasvu ja sellest tulenevat sülemuse teket. Selles mõttes annavad antibiootikumid keskkonda Thayer Martinile selektiivset iseloomu.

Ettevalmistus

Algne Thayer Martin Agar

-GC Agar

Kaalutakse 8,2 g veetustatud GC söödet ja suspendeerige 100 ml. Segage ja keedetakse 1 minuti jooksul, segades seda täielikult. Steriliseerige segu autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit.

-2% hemoglobiin

Ühtlase segu saamiseks moodustatakse 2 g veetustatud hemoglobiini 2 või 3 ml kuumas destilleeritud vees. Lisage vähehaaval rohkem vett, et täita 100 ml maht. Suspensioon peab enne steriliseerimist olema homogeenne.

Steriliseerige autoklaavis 15 minutit.

-Rikastamise täiendus

Kaubavedu rekonstitueeritakse sama kaubandusmaja pakutava lahjendiga. Segage hästi. Kasutatava lahjendi kogus täpsustatakse komplekti juhendis..

-Inhibitsioonilisand V.C.N (vankomütsiin, kolistiin, nüstatiin)

Lahustage viaal kaubandusmaja pakutava lahjendiga. Segage hästi. Kasutatava lahjendi kogus täpsustatakse komplekti juhendis..

-Valmistatud

Iga 100 ml GC agari kohta toimitakse järgmiselt:

Kui GC agar lahkub autoklaavist, lastakse jahtuda umbes 50 ° C-ni ja lisage 2 ml ettevalmistatud hemoglobiinilahust, 2 ml rikastuslisandit (isobitalex või britalex) ja 2 ml inhibeerimislisandit. Segage ja serveerige steriilsetes Petri tassides.

Laske kasutada ja kasutada külmkapis kuni kasutamiseni.

Valmistatud söötme värvus on kirsi punane. Söötme lõplik pH on 7,2 ± 0,2

Muudetud Thayer Martin Agar

Kaalutakse 8,2 g veetustatud GC söödet ja suspendeerige 100 ml. Lisage 1 g agarit ja lisage 0,3 g glükoosi. Segage ja keedetakse 1 minuti jooksul, segades seda täielikult. Steriliseerige segu autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit.

Valmistage hemoglobiini ja rikastamise lisandit eespool kirjeldatud viisil.

Kasutatav inhibeerimislisand on V.C.N.T (vankomütsiin, kolistiin, nüstatiin, trimetoprim).

-Valmistatud

Jätkake nii, nagu on kirjeldatud algse Thayer Martin agari puhul.

Kasutage

Thayer Martin agarit tuleb enne proovide külvamist karastada. Tavaliselt kasutatavad proovid on neelu eksudaadid, ninaeraldised, vaginaalne, kusiti ja / või rektaalne sekretsioon ja CSF..

Kasutage värskelt võetud proove ja tehke agaril tugev inokulaat. Proovid külvatakse otse materjali väljavoolu abil ja seejärel tõmmatakse pinnale kahanemine.

Plaate inkubeeritakse 35-37 ° C juures 24 kuni 48 tundi mikroaerofiilses purki (5% CO2). Inkubatsiooniperioodi lõpus uuritakse plaate väikeste, hallide ja mõnikord limaskestade sarnaste kolooniate suhtes..

Tehke grammatilisi ja kinnitavaid biokeemilisi teste kahtlastele kolooniatele.

Kvaliteedikontroll

Thayer Martin agari kvaliteedikontrolli teostamiseks võib kasutada järgmisi mikroobseid tüvesid.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ja Neisseria meningitidis ATCC 13090; mõlemas tüves on oodata rahuldavat arengut.

Lisada tuleks ka järgmised tüved: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ja Candida albicans ATCC 10231. Kõigis neis on oodata täielikku või osalist inhibeerimist selles keskkonnas.

Piirangud

-Tuleb meeles pidada, et kasutatavate inhibiitorite suhtes resistentsed bakterid võivad kasvada söötmes..

-On tüvesid Neisseria gonorrhoeae mis võivad olla tundlikud kasutatud vankomütsiini kontsentratsiooni suhtes. Sel põhjusel on soovitatav paralleelselt kasutada isovitalexiga täiendatud šokolaadiagarit, kuid ilma inhibiitoriteta.

-On olemas pärmide tüved, mis on resistentsed nüstatiini suhtes, mis võivad selles söötmes kasvada ja häirida patogeensete Neisseria, eriti gonokokkide isoleerimist..

Viited

  1. Valteki diagnostika laborid. Agar Thayer-Martin.2016. Saadaval: com
  2. Laboratooriumid Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Saadaval aadressil: britanialab.com
  3. Wikipedia toetajad. Thayer-Martin agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 26. oktoober 2017, 16:33 UTC. Saadaval aadressil: wikipedia.org4. Juurdepääs 28. veebruarini 2019.
  4. Laboratooriumid Britania. GC agar. 2010. Saadaval aadressil: britanialab.com.
  5. Laboratooriumid BBL ™ keskmise rikastusega tugevad mikroorganismid. 1999. Saadaval: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.