Agari TCBS vundament, ettevalmistamine ja kasutamine



The TCBS agar on väga selektiivne ja diferentsiaalne tahke kultiveerimiskeskkond, mida kasutatakse eriti Vibrio bakterite eraldamiseks ja kultiveerimiseks Vibrio cholerae, V. vulnificus ja V. parahaemolyticus selle perekonna peamiste patogeenidena.

Akronüüm TCBS tähendab tiosulfaatsitraadi sapi sahharoosi. Seda agarit tuntakse ka Vibriose selektiivse keskkonnana. Algne valem loodi Nakanishi poolt ja hiljem Kobayashi poolt.

See koosneb pärmiekstraktist, liha-peptoonist, tripteiinist, naatriumtsitraadist, naatriumtiosulfaadist, oksi sapist, sahharoosist, naatriumkloriidist, ferriitsitraadist, bromotümoolsinisest, tümoolsinisest ja agarist..

See kompositsioon võimaldab Vibrio liikide piisavat arengut veest, roojast ja toiduainetest; välja arvatud Vibrio hollisae, mis ei kasva selles keskkonnas. Lisaks on TCBS-söötmel võimalik inhibeerida teiste kaasnevate bakterite, eriti kolibakterite kasvu.

Raskete seedetrakti ja soolestiku probleemide tõttu, mida mõned Vibrio perekonna liigid toodavad, on nende diagnoos väga oluline. Inimene on nakatunud peamiselt toores või alatoidetud mereande või saastunud vee tarbimisega, aga ka haavade nakatamisega.

Seetõttu peaksid kliinilised laborid vedelate väljaheiteproovide väljaheite kultuuridesse uurima TCBS agarit, eriti riisivee välimusega. Eriti siis, kui patsiendil on olnud kokkupuude merevees või tarbinud mereande või kala.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutage
  • 4 Seeded
  • 5 Piirangud
  • 6 Kvaliteedikontroll
  • 7 Viited

Sihtasutus

Pärmiekstrakt, liha peptoonid ja tripteiin on selle söötme toiteallikas. Kuid TCBS agar on enamiku bakterite jaoks ebameeldiv vahend.

Selle kõrge selektiivsus on tingitud naatriumtsitraadi ja härg-sapi lisamisest; mõlemad on inhibeerivad ained, mis tagavad ka sööde leeliselise pH, piirates kaasneva taimestiku kasvu ja soodustades kasvamist. V. cholerae, teiste liikide hulgas. Tuleb märkida, et Vibrio cholerae on väga tundlik kõrvetiste suhtes.

Omalt poolt tasakaalustab naatriumkloriidi osmootne söötmega. Lisaks, kuna selle kontsentratsioon on kõrge, toimib see ka inhibeeriva ainena, soodustades halofiilsete bakterite kasvu.

Sahharoos on kääritatav suhkur, mis koos bromümümooli ja tümooli sinise pH-indikaatoritega annab söötmele erinevuse. Sel põhjusel on võimalik eristada sahharoosi kääritavaid tüvesid mitte-kääritavatest tüvedest.

Sahharoosi käärivate tüvede kolooniad moodustavad kollase värvuse ja muudavad happe tootmise tõttu söödet rohelisest kollaseks. Mitte-fermentorid kasvavad poolläbipaistvaks ja keskkond jääb algseks (roheline).

Samamoodi sisaldab see söötmes naatriumtiosulfaati väävli ja ferriitsitraadi allikana. Mõlemad näitavad baktereid, mis on võimelised tootma vesiniksulfiidi (värvitu gaas). H2S on moodustatud tiosulfaadist ja hiljem reageeritakse ferriitsitraadiga nähtava musta sademe moodustumisega.

Lõpuks agar on see, mis annab söötmele tahke konsistentsi.

Ettevalmistus

Kaaluge 89 g veetustatud söödet ja lahustage 1 liitris destilleeritud vees. Abi lahustumine kuumutamise ja sagedase segamisega. Segu võib keeta 2 minutit.

See keskkond ei autoklaavi. Pärast lahustumist serveeritakse see otse steriilsetel plaatidel. Tahkestamisel paigutatakse need naastu tegijate ümberpööratud viisil ja hoitakse külmkapis (2–8 ° C) kuni nende kasutamiseni.

Pärast valmistamist peaks söötme pH olema 8,6 ± 0,2.

Dehüdraaditud söötme värvus on kerge beež või rohekas-beež ning söötme värv on metsa roheline või sinakasroheline.

Enne proovide külvamist tuleb plaadid karastuda.

Kasutage

Kõige tavalisem näide Vibriose isoleerimiseks on kõhulahtisus.

Kui proove ei saa kohe selektiivsöötmele külvata, tuleb need välja transportida Cary Blairi keskel..

Kultuuri tundlikkuse suurendamiseks saab väljaheite 8 tunni jooksul maksimaalselt 8 tunni jooksul läbi rikastava söötme peptioonveega läbi viia, sealt kultiveeritakse see TCBS-söötmesse..

Samuti tuleb meeles pidada, et mõned Vibriose tüved võivad immunosupressiooniga patsientidel põhjustada septitseemiat, nii et neid saab eraldada verekultuuridest. Samamoodi saab analüüsida veest ja merest pärinevat toitu, kui esineb epideemilisi koolera-haiguspuhanguid..

Külvatud

Uuritava proovi inokulaat peab olema silmapaistev, külvamine toimub väljatõmbamise teel. Plaate inkubeeritakse 37 ° C juures 24 tundi aerobiosis.

Eeldatavad kolooniad Vibrio cholerae Nad on keskmise suurusega, siledad, läbipaistmatud, õhukesed servad ja kollased, sest need käärivad sahharoosi..

Samamoodi, liikide V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii ja mõned V. vulnificus. Teised Vibriose liigid on kliiniliselt olulised V. parahaemolyticus ei fermenteeri sahharoosi, mis on arenenud oliivrohelise kolooniana.

Teisest küljest peame meeles pidama, et mõned Aeromonas'i ja Plesiomonas'e tüved, mis on oksüdaas (+), võivad kasvada selles keskkonnas, arendades kollaseid kolooniaid, mis võivad arstiga segi ajada. Kuigi mõned Pseudomonas'e tüved ka oksüdaas (+) kasvavad nii roheliste kolooniatena kui ka V. parahaemolyticus.

Piirangud

Perekonna Vibrio suhtes positiivset oksüdaasi testi ei tohiks kunagi teha TCBS agarist saadud kolooniatest, kuna saadud tulemus on vale-negatiivne. Söötmes olevad ühendid segavad selles testis tugevalt. Seetõttu tuleb seda teha subkultuuridest veri agaril.

Kvaliteedikontroll

Et tõendada, et keskkond on heas seisukorras, on soovitav istutada tuntud või sertifitseeritud kontrolltüvesid ja jälgida, kas kasv vastab eeldatavatele omadustele..

Selleks:

-Vibrio cholerae - Rahuldav kasv (kollased kolooniad, läbipaistev piir).

-Vibrio parahaemolyticus - Rahuldav kasv (koloonia rohelise keskme ja läbipaistva piiriga).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - rahuldav kasv (kollooniad, kus koloonia ümber on sama värvi halosid).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - täielik või osaline inhibeerimine (väikesed kollased või poolläbipaistvad kolooniad).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - osaline või täielik inhibeerimine (sinised kolooniad).

-Escherichia coli ATCC 25922 - täielikult blokeeritud.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - täielik või osaline inhibeerimine. (Väikeste kolooniate keskosa roheline poolläbipaistev serv).

Inokuleerimata söötme inkubeerimine ei tohiks muutuda.

Viited

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Saadaval aadressil: f-soria.es
  2. BD laboratoorium. BD. TCBS Agar 2003. Saadaval: bd.com
  3. Laboratooriumid Britania. TCBS keskmine. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.