Sojaagari tripticaseína vundament, valmistamine ja kasutamine

The trypticasein sojaagar või trüptikaasi sojaagar on tahke, mitteselektiivne ja toitev toitekeskkond. See on tähistatud tähtedega TSA oma akronüümi inglise keeles Trypticase Soy Agar. See koosneb tripteiinist, sojapeptoonist, naatriumkloriidist ja agar-agarist.

Tänu oma kõrge toiteväärtusele on see ideaalne mõõdukalt nõudlike ja nõudlike mikroorganismide kasvatamiseks. Täiendavate lisanditeta söödet ei soovitata primaarsete kultuuride jaoks, kuid see on väga kasulik puhta tüve subkultuurimiseks ja nende elujõulisuse säilitamiseks muuhulgas..

Samuti on see agar alus rikastatud söötme, näiteks vere agari, valmistamiseks, eriti kui see on vajalik hemolüüsi mustrite jälgimiseks ja optoquiini ja batsitratsiini taksonite paigaldamiseks, mida on vaja diagnoosimiseks. Streptococcus pneumoniae ja Streptococcus pyogenes vastavalt.

Teisest küljest on antibiootikumidega kombineerimisel kasulik kombineeritud taimestikuga proovidest isoleerida kliinilist tähtsust omavad fiktiivsed ja ranged anaeroobsed mikroorganismid..

Lõpuks vastab tripticasein sojaagari koostis ja selle toimivus erinevate farmakopöade (Euroopa, Jaapani ja Põhja-Ameerika) nõuetele..

Indeks

• 1 Sihtasutus
• 2 Valmistamine
  • 2.1 Kolmektaasilised sojaagariplaadid
  • 2.2. Kolmetasemelised sojaagariplaadid, millele on lisatud verd
  • 2.3 Kolmektaasilised sojaagariplaadid, millele on lisatud kuumutatud verd
  • 2.4 Tripticaseine sojaagari kiilud
• 3 Kasutamine
• 4 Seeded
• 5 Kvaliteedikontroll
  • 5.1 Steriilsuse kontroll
  • 5.2 Kasvukontroll
  • 5.3 Verega täiendatud tripticasein-sojaagari kasvu ja hemolüüsi mustri kontroll
• 6 Viited

Sihtasutus

Bakterite nõuetekohaseks arenguks on vajalik energiapanuse olemasolu, nagu aminohapped, vitamiinid, puriinalused ja pürimidiidid..

Selles mõttes annavad tripteiin ja sojapeptoon need toitained mikroorganismidele, võimaldades seega nende täielikku arengut. Kuid nõudlike bakterite puhul on vaja seda agarit täiendada defibrineeritud verega või kuumutatud verega, et suurendada selle rikastumist.

Teisest küljest, kui söötmele lisatakse antibiootikume, muutub see selektiivseks söötmeks. Samuti saate lisada 0,6% pärmiekstrakti, et soodustada perekonna Listeria liikide eraldamist, lisades samal ajal tsüstiini telluriidi. ja Lambavere on ideaalne Corynebacterium diphteriae.

Lõpuks annab naatriumkloriid keskkonda osmootse tasakaalu ja agar tagab tahke konsistentsi.

Ettevalmistus

Kolmektaasilised sojaagariplaadid

Trypticasein sojaagari valmistamiseks tuleks kaaluda 40 grammi veetustatud kaubanduslikku söödet digitaalsel skaalal. Lahustub liitri destilleeritud vees.

Segul lastakse seista 5 minutit ja viiakse seejärel soojusallikasse, et aidata söötme lahustumisel. Seda tuleb segada sageli ja lasta keeda 1 või 2 minutit. Seejärel steriliseeritakse sööde autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit.

Lasta jahtuda 50 ° C-ni ja jaotada steriilsetesse Petri tassidesse. Laske tahkuda, pöörata ümber, tellida plaatides ja hoida külmkapis.

Söötme lõplik pH peaks olema 7,3 ± 0,2.

Tuleb arvestada, et veetustatud söötme värvus on kerge beež ja seda tuleb säilitada kuivas kohas vahemikus 10 kuni 35 ° C..

Valmistatud agar on omakorda kerge merevaik. Valmistatud plaate tuleb hoida kuni kasutamiseni külmkapis (2 kuni 8 ° C).

Plaadid peavad enne kasutamist jõudma toatemperatuurini.

Kolmektaasilised sojaagariplaadid, millele on lisatud verd

Vere agar valmistatakse, lisades 5% defibrineeritud verd trypticasein sojaagari jahutamisel temperatuuril 50 ° C. Segu homogeniseeritakse õrnade liigutustega pöörates.

Serveeri steriilsetes Petri tassides. Söötme värv peaks olema kirsi punane.

Kolmektaasilised sojaagariplaadid, millele on lisatud kuumutatud verd

TSA-põhise vere agari valmistamiseks on ülalkirjeldatud protseduurid samad, kuid autoklaavist lahkumisel lastakse sellel seista, kuni söötme temperatuur on ligikaudu 56 kuni 70 ° C. Sel ajal asetatakse veri ja segatakse, kuni sööde muutub pruuniks.

Serveeri steriilsetes Petri tassides. Söötme värv on šokolaadpruun.

Tripticaseine sojaagari kiilud

Agari valmistamise protseduur on sama, mis plaatide jaoks kirjeldatud, erinevalt sellest, et selle asemel, et teenindada söödet Petri tassidel, jaotatakse see enne steriliseerimist 10–12 ml Bakeliidi kaanega katsutites.

Seejärel autoklaavitakse torusid 121 ° C juures 15 minutit. Lahkudes toetuvad nad tuge ja lubavad end tahkestuda.

Valmistatud kiilud külvatakse pinna abil ja nende abil hoitakse teatud aja jooksul teatud nõudlikud elujõulised mikroorganismid.

Kasutamine

Trypticasein sojaagarit kasutatakse järgmistel juhtudel:

-Põhialuseks on klassikalise vere agari valmistamine, mida kasutatakse enamikus laborites.

-Nõudlike bakterite isoleerimine.

-Hemolüüsi struktuuri jälgimine.

-Diagnostiliste testide läbiviimine.

-Eriti vere agarite valmistamise aluseks on Corynebacterium diphteriae, koos telluuri tsüstiiniga ja lambaliha verd.

-Lambavere agari valmistamise aluseks on rohkem kanamütsiini-vankomütsiini anaeroobide kasvuks, eriti Bacteroides sp.

-Mittevajalike tüvede (Bacterioteca) hooldamiseks.

-Mikroobide aeroobne arv mikro-, keskkonna-, toidu- ja kosmeetikatoodete proovide mikrobipiirangu uuringus.

Külvatud

Proove võib külvata otse verd või teisi lisaaineid sisaldava trypticasein sojaagari pinnale. Seda külvatakse kurnatusega.

Mikroobide tüvede (bakterid või pärm) subkultuurimiseks kasutatakse tavaliselt ilma lisanditeta tripticasein sojaagariplaate..

Kvaliteedikontroll

Steriilsuse kontroll

Trypticasein-sojaagariga valmistatud erinevate söötmete steriilsuse kontrollimiseks on soovitatav teha järgmised toimingud: igast valmistatud partiist tuleb inkubeerida üks või kaks plaati või tuubi temperatuuril 37 ° C 24 tundi, et näidata steriilsust. Kõikidel juhtudel peab see jääma ilma kasvuta.

Saastumise korral tuleb kogu partii ära visata.

Kasvu kontroll

Trypticasein sojaagari nõuetekohase toimimise uurimiseks võib kasutada järgmisi bakteritüvesid: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 ja Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Tüved külvatakse ja neid inkubeeritakse aerobiosis temperatuuril 37 ° C 24 tundi.

Kõikidel juhtudel peab kasv olema rahuldav.

Seene saate kasutada ka kompleksina Candida albicans ATCC 10231 ja Aspergillus niger ATCC 16404. Mõlema tüve puhul on oodata head kasvu.

Verega täiendatud tripticasein sojaagari kasvukontroll ja hemolüüsi muster

Selle alusega valmistatud vere agari nõuetekohase toimimise kontrollimiseks võib kasutada järgmisi tüvesid: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ja Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Neid külvatakse ja inkubeeritakse 37 ° C juures microaerophilicuses 24 tundi.

Kõikidel juhtudel peab kasv olema rahuldav, võttes arvesse seda S. pyogenes beeta-hemolüüs (selge halo ümber koloonia) ja mõlemas tüves S. pneumoniae tuleb jälgida alfa-hemolüüsi (kolooniate ümber rohekas halo).

Viited

1. Wikipedia toetajad. Trypticase I on agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. detsember 2018, 15:47 UTC. Saadaval aadressil: https://en.wikipedia.org
2. Laboratooriumid Britania. Tryteiini sojaagar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Sojaoa triptüüh. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja.
5. BD laboratooriumid Trypticase I am Agar. 2014. Saadaval aadressil: .bd.com