Agar Salmonella-Shigella vundament, valmistamine ja kasutamine



The Salmonella-Shigella agar SS-agar on ka mõõdukalt selektiivne ja diferentsiaalne keskkond, mis on spetsiaalselt ette nähtud perekondade Salmonella ja Shigella enteropatogeensete bakterite eraldamiseks nii keskkonna- kui ka kliinilistest proovidest..

SS-agaril on kompleksne koostis; See koosneb lihaekstraktist, peptoonist, laktoosist, sapphappe sooladest, naatriumtsitraadist, naatriumtiosulfaadist, raudtsitraadist, agarist, neutraalsest punast, helerohelisest ja destilleeritud veest. Arvestades selle suurt selektiivsust, on võimalik külvata rikkaliku segatud taimestikuga proove.

Mikrobioloogia laborites kasutatakse Salmonella-Shigella söödet laialdaselt Salmonella ja Shigella esinemise uurimiseks kõhulahtisuse väljaheite, reovee, joogivee ja toidu proovides..

Mõnikord on Salmonella tüvede taastamiseks vaja kasutada rikastamiseelset puljongit (laktoosipuljong) ja rikastamist (selenit-tsüstiini puljong)..

Need sammud on vajalikud, kui kahtlustatakse salmonella olemasolu väga väikeses koguses või kui tüve võib tööstuslikule tootmisele, peamiselt töödeldud toitudele, halvasti kohelda. Samuti on soovitatav rikastada antibiootikumidega ravitud patsientide väljaheidete proove.

Seejärel võib rikastatud puljongi külvata Salmonella-Shigella agarile ja muule sarnasele söötmele, nagu ksüloosi agarile, deoksüsiloksaan lüsiinile (XLD) ja enteerilisele Hektoen agarile (HE)..

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Toiteväärtus
    • 1.2 Järjepidevus
    • 1.3 Valikuline
    • 1.4 Diferentsiaal
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutage
  • 4 Piirangud
  • 5 Kvaliteedikontroll
  • 6 Viited

Sihtasutus

Igal Salmonella-Shigella kultiveerimiskeskkonna komponendil on spetsiifiline funktsioon ja segu tervikuna annab sellele omadused, mis seda iseloomustavad.

Toitev jõud

Lihaekstrakt ja peptoon (lagundatud kaseiin ja loomsed koed) pakuvad vajalikke toitaineid (nitrogeenid, süsinik ja vitamiinid) mikroorganismide arendamiseks, mis suudavad taluda ülejäänud komponente.

Järjepidevus

Agar-agar vastutab söötme tahke konsistentsi eest.

Selektiivne

See keskkond on väga selektiivne, kuna sisaldab sapphappe sooli, naatriumtsitraati ja erkrohelist. Seetõttu pärsib see kõigi grampositiivsete bakterite ja enamiku gramnegatiivsete bakterite kasvu, kaasa arvatud mõned kolibakterid.

Kuigi bakterid perekonnast Salmonella ja mõned Shigella tüved toetavad neid ühendeid.

Peamiselt Salmonella perekond on sapphappe soolade suhtes väga vastupidav, nii et nad suudavad elada mõningate kandjapatsientide sapipõies, kes bakterid väljaheidete kaudu pidevalt välja heidavad.

Diferentsiaal

Laktoos on kääritatav süsivesik, mis aitab eristada laktoosit fermenteerivaid tüvesid kääritamatutest tüvedest. Seda omadust tõendab pH indikaator, mis selles keskkonnas on fenoolpunane.

Laktoosi käärivad tüved annavad punased kolooniad, samas kui kääritamata tüved on värvitu. See omadus on oluline, kuna Salmonella ja Shigella ei fermenteeri laktoosi.

Teisest küljest sisaldab see keskkond väävli ja raudsitraadi allikana naatriumtiosulfaati. Mõlemad ühendid on võimelised diferentseerima baktereid, mis on võimelised tootma vesiniksulfiidi. Need reageerivad, moodustades musta lahustumatu ja nähtava ferriumsulfiidi.

Sellel omadusel on mõned perekonna Salmonella tüved. Tavaliselt on nende kolooniad värvitu korter, mille keskel on must punkt. Ülejäänud Salmonellad ei tooda H2S ja arenevad värvitu kolooniatena.

Teisest küljest on perekonna Shigella kolooniad värvitu, ilma mustamiseta.

Ettevalmistus

See on väga lihtne valmistada.

Kaalutakse 63 g dehüdreeritud kaubanduslikku söödet ja lahustatakse ühe liitri destilleeritud vees. Kuumutage lahust ja segage. Segu võib kesta kuni minuti jooksul.

See kandja ei tohiks autoklaavida. Pärast lahustumist serveeritakse see otse ühe- või kahekordselt steriilsetel plaatidel.

Tahkestamisel paigutatakse need naastu tegijate ümberpööratud viisil ja hoitakse külmkapis (2–8 ° C) kuni nende kasutamiseni.

Pärast valmistamist peaks söötme pH olema 7,2 ± 0,2 ja oranž punane.

Oluline on lubada plaatide karastamist enne proovide külvi. Saate algse proovi otse külvata, materjali tühjendada agari osale ja seejärel sealt ammendumise teel.

Rikastatud puljongite kasutamisel läbige osa seleeni puljongist ja külvage drigalski spaatliga..

Inkubeerige aerobioosil 24 tundi temperatuuril 37 ° C.

Pidage meeles, et kaalutud grammide kogus ja söötme lõplik pH võib kommertsmajas erineda. Söötme alusplaat viib alati selle valmistamise näidud.

Kasutage

Seda kasutatakse sageli väljaheite kultuuride analüüsimisel ja jääkvee proovide, joogivee ja toidu mikrobioloogilises uuringus.

Sageli valmistatakse kahekordseid plaate, ühel küljel asetatakse Salmonella-Shigella agar ja teisel küljel XLD agar..

Piirangud

-Mõned Shigella tüved selles kasvukeskkonnas ei kasva. Seetõttu ei soovitata seda selle perekonna esmaseks isoleerimiseks.

-Salmonellale ei viita mitte iga selge mustanahalise keskusega koloonia; korrektseks identifitseerimiseks tuleb teha biokeemilisi teste, kuna mõnede Proteus'e tüvede kolooniad ei ole Salmonella omadest eristatavad..

-Dehüdreeritud söötme keskkond peab olema ettevaatlik, kuna see on väga hügroskoopne. Seetõttu tuleb seda hoida kuivas ja hästi suletud keskkonnas. Avatud väga lühikese aja jooksul.

-Aja jooksul võivad sappisoolad söötmes sadestuda, moodustades agari sees mattiga sarnase pildi, kuid see ei mõjuta tulemusi.

-Mõned Shigella tüved võivad aeglaselt laktoosi kääritada.

Kvaliteedikontroll

Et tõestada, et keskkond töötab õigesti, on soovitav istutada tuntud või sertifitseeritud kontrolltüve ja jälgida, kas kasv vastab eeldatavatele omadustele..

Selleks on vaja E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis.

Oodatavad tulemused on:

Escherichia coli --roosad kumerad kolooniad.

Enterobacter ja Klebsiella- suured kolooniad ja punane või roosa limaskesta.

Shigella flexneri --läbipaistvad või värvitu lamedad kolooniad.

Salmonella typhimurium - värvitu kolooniad musta keskmega.

Enterococcus faecalis-- täielik inhibeerimine.

Viited

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009. Saadaval aadressil: f-soria.es
  2. BD laboratoorium. BD Salmonella-Shigella agar. 2013. Saadaval aadressil: bd.com
  3. Laboratooriumid Britania. Salmonella-Shigella agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  4. Valteki diagnostika. Salmonella-shigella agar (SS Agar) .2010. Saadaval aadressil: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.