Agari soola ja manitooli alus, valmistamine ja kasutamine



The soola agar ja mannitool või soolane mannitool on tahke, selektiivne ja diferentsiaalne kultiveerimiskeskkond. Selle on loonud Chapman patogeensete grampositiivsete kookide eraldamiseks Staphylococcus aureus.

Siiski on kasulik isoleerida Staphylococcus epidermidis, mis võib mõnikord esineda oportunistliku patogeenina ja Staphylococcus saprophyticus, teiste liikide hulgas tunnustatud uriini patogeen.

Mõned Enterococcus on võimelised kasvama selles söötmes, samuti teatud Gram-positiivsete spooride moodustavate batsillidega.

See keskkond on väga kasulik kliiniliste proovide analüüsimisel, kuid seda kasutatakse ka toiduainete mikrobioloogilises uuringus ja tööstustoodete, nagu kosmeetika, ravimite kvaliteedikontrollis..

Soolatud mannitooli agar koosneb veiseliha, tripteiini, mannitooli, naatriumkloriidi, fenoolpunase ja agari ekstraktidest ja peptoonidest..

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutamine
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Lõplikud kaalutlused
  • 6 Viited

Sihtasutus

Mannitooli agar on selektiivne tänu suurele soolasisaldusele. Soolsus toimib inhibeeriva ainena ja takistab gramnegatiivsete bakterite kasvu.

Samuti on see diferentseeritud mannitooli süsivesikute ja fenoolpunase pH indikaatori tõttu. Sellest tulenevalt toodavad mannitooli fermenteerivad bakterid happeid, hapestavad keskkonda, pöörates kolooniad ja keskmise kollase.

Teisest küljest kasvavad mannitooli kääritamata kolooniad söögikeskkonnas, võttes arvesse liha ja tripteína ekstraktide ja peptoonide poolt pakutavaid toitaineid. Sealt ekstraheerivad bakterid nende kasvuks vajalikku süsinikku, lämmastikku, vitamiine ja mineraalaineid.

Sellisel juhul võivad kolooniad olla nõrgad või tugevad roosad ja söötme värvus või fukseesia muutused on samad.

Agar on aine, mis tagab söötme konsistentsi.

Ettevalmistus

Ühe liitri soolatud mannitooli agari valmistamiseks kaalutakse 111 g kaubandusliku eelistatud maja dehüdreeritud söödet ja lahustatakse 1000 ml destilleeritud vees, kasutades fiola..

Soojust rakendatakse, eemaldades sageli söötme, et parandada lahustumisprotsessi. Lase sel keetada üks minut.

Asetage fiola autoklaavis 121 ° C juures 15 minutiks.

Aja möödudes võetakse fiola autoklaavist välja, lastakse seista ja serveeritakse 15–20 ml steriilsetel Petri tassidel, kui temperatuur on umbes 50–55 ° C..

Lubatud on tahkestuda, tellida ümberpööratud kujul plaqueros ja hoida külmkapis kuni selle kasutamiseni. Enne proovi istutamist peate ootama, kuni plaat võtab keskkonna temperatuuri.

Plaate külvatakse karjaga või külvatakse pinnale drigalski spaatliga. Valmistatud söötme lõplik pH peaks olema 7,4 ± 0,2

Dehüdreeritud söötme värvus on kerge beež ja ettevalmistatud söötme värvus on oranžpunane.

Kasutamine

Tänu oma suurele selektiivsusele sobib see keskkond segatud taimestikuga proovide istutamiseks, kus tahetakse otsida Staphylococcus aureus, selle perekonna peamise patogeenina.

Selles mõttes on üks kõige sagedasemaid kasutusviise neelu eksudaatide proovide ja ninaerituse mikrobioloogilisel analüüsil, eriti asümptomaatiliste kandjate tuvastamiseks. S. aureus.

Mõned riigid on selle analüüsi rakendanud kohustusliku nõudena inimestele, kes soovivad töötada toidutarnijatena.

See kontroll takistab inimeste kandmist S. aureus, seega vältida massilist toidumürgitust, stafülokokk-enterotoksiiniga saastunud toiduainete tarbimise tõttu.

Seda võib lisada ka haavainfektsioonide, verekultuuride, CSF-i, bronhokalveolaarse loputamise külvisse..

Soolatud mannitooli agar on kasulik uriinikultuuride kolooniate uuesti eraldamiseks CLED-agarist või vere agarist, mille gramm on avastanud klastrites grampositiivsed kookid.

See kehtib ka toidu, joogivee, pinnase ja muude rakenduste mikrobioloogilisel analüüsil.

Kvaliteedikontroll

Kui valmistatakse soola mannitooli agariga plaatide partii, on soovitatav viia läbi kvaliteedikontroll. Kontrolltüved külvatakse, et näidata, kas kasv on või mitte.

Positiivse kontrollina on teada tuntud tüved Staphylococcus aureus. See peab kasvama rahuldavalt kollaste kolooniate väljaarendamise teel ning söötmest saab ka sama värvi.

Samuti on mugav lisada tuntud tüvi Staphylococcus epidermidis. See peab kasvama rahuldavalt roosade kolooniate väljaarendamisega ja söötme värvus jääb tugevamaks või tugevamaks roosaks tumeneb.

Negatiivse kontrollina kasutatakse tüvesid, mis ei tohiks selles söötmes kasvada. Näiteks võite istutada teadaoleva tüve Escherichia coli või Klebsiella pneumoniae. Oodatav tulemus on täielik inhibeerimine, see tähendab, et see pole kasv.

Lisaks tuleb inkubeerimata plaati inkubeerida. Selles ei tohiks olla kasvu, värvimuutust.

Oluline on, et plaati ei kasutataks, kui on märke halvenemise kohta, nagu näiteks saastumine, dehüdratsioon, värvimuutus..

Lõplikud kaalutlused

Soolatud mannitooli agari kasutamisel tuleb arvesse võtta mõningaid olulisi aspekte:

-Kollaste kolooniate kasvu saamine ei viita sellele, et see on Staphylococcus aureus. Tuleb meeles pidada, et mõned Enterococcus'e tüved on võimelised kasvama selles söötmes ja fermenteerima mannitooli, samuti teatud Gram-positiivseid spooride moodustavaid baktereid..

Seetõttu on oluline teha Gram kolooniale ja katalaasi test.

-Teisest küljest tuleb arvestada, et muud Staphylococcus'i liigid erinevad aureus Samuti on nad võimelised mannitooli fermenteerima. Seetõttu on oluline, et koloonia subkultiveeritakse toitaine puljongiks, mis sealt ära võetakse ja koagulaasikatse läbi viia.

Mannitooli kääritamise jaoks kliiniliselt oluliste Staphylococcus'i liikide hulgas on: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, muu hulgas.

Teised võivad anda muutuva reaktsiooni, mis on mõnikord positiivne ja mõnikord negatiivne. Mõned on S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, muu hulgas.

-Koagulaasikatse tegemiseks ei ole soovitatav kolooniaid otse mannitooli agarist võtta, kuna söötme suur soolasisaldus võib mõjutada tulemust.

-Lõpuks soovitatakse soolatud mannitooliga külvatud plaate inkubeerida kuni 48 tundi, kuna mõned tüved S. aureus Nad võivad mannitooli aeglaselt kääritada, kuigi see ei ole väga sagedane.

Viited

  1. Laboratooriumid Britania. Mannitooli soolane agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  2. "Soolatud mannitooli agar". Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 31. oktoober 2018, 19:08 UTC. 17. jaanuar 2019, 20:55, saadaval aadressil: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. (5. väljaanne). Argentina, Redaktsioon Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja
  5. BD laboratooriumid BD Mannitol Salt Agar. 2013. Saadaval aadressil: bd.com.