Agar Sabouraud vundament, ettevalmistamine ja kasutamine

The Sabouraudi agar, Tuntud ka Sabouraudi dekstroosiagarina, see on tahke kultuurikeskkond, eriti rikastatud seente, näiteks pärmide, hallitusseente ja dermatofüütide eraldamiseks ja arendamiseks..

Seega, see keskmise ei saa jätta oma mikrobioloogia labor esinevate patogeensete või oportunistlikud seened, kas kliinilistes proovides või kliinikutes. Samamoodi on ka ideaalne kasvu niitjad bakterid nagu Streptomyces ja Nocardias. Selle kasutamine on väga lai, seda saab kasutada inimese mükoloogia, loomse, taimse ja tööstus.

See keskkond loodi 1896. aastal tuntud dermatoloog Raimond Sabouraudi poolt, kellest sai maailma tuntud peanaha häirete spetsialist, peamiselt dermatofüütide poolt..

Selle loomine oli nii oluline, et seda on sellest ajast kasutatud ja see jätkub täna, kuigi mõningate muudatustega.

Ehkki see on seente jaoks eriline, võivad selles keskkonnas kasvada bakterid, mistõttu segatud taimestikuga proovide puhul tuleb antibiootikume nende valmistamisse kaasata ja seeläbi pärssida bakteriaalse taimestiku kasvu..

Antibiootikumide valik tuleb teha ettevaatlikult ja võttes arvesse seene tüüpi, mida soovite taastada, kuna mõned on inhibeeritud teatud ainete juuresolekul..

Indeks

• 1 Sihtasutus
  • 1.1 Kõige sagedamini kasutatavad Sabouraud'i dekstroosiagari kombinatsioonid antibiootikumidega
• 2 Valmistamine
  • 2.1 Dekstroosi Sabouraud agar 
  • 2.2 Sabouraud dekstroosiagar (muutuste muutmine)
  • 2.3 Sabouraudi dekstroosi agar (muutus Emmons) kloramfenikooliga
  • 2.4 Dekstroosi Sabouraud Emmoni agar tsükloheksimiidiga
  • 2.5 Dekstroos Sabouraud Agar (Emmons) kloramfenikooli ja tsükloheksimiidiga
  • 2.6 Muud antibiootikumid, mida saab lisada
• 3 Erilised kaalutlused
• 4 Kvaliteedikontroll
• 5 Kasutamine
  • 5.1 Esmane kasvatamine
  • 5.2 Sporulatsioon
  • 5.3 Kaitse
  • 5.4 Mikrokultuurid
  • 5.5 Inimese mükoloogias
  • 5.6 Loomade mükoloogia
  • 5.7 Keskkonnamikoloogia
  • 5.8 Tööstuslik mükoloogia
  • 5.9 Taimse mükoloogia
• 6 Viited

Sihtasutus

SabouraudM glükoostoiteagar keskkonnaks on algsest määratlusest on nõrgalt selektiivse tänu oma happelise pH 5,6 ± 0,2, kuid siiski bakterid võivad kasvada, eriti pikaajalisel inkubeerimised.

Sööde sisaldab kaseiini peptooni ja pankrease lagundatavat loomset kude, mis pakuvad süsiniku ja lämmastiku allikat mikroorganismide arendamiseks..

See sisaldab ka suurt glükoosi kontsentratsiooni, mis toimib energiaallikana, soodustades seente kasvu bakterite vastu. Kõik segatakse agar-agariga, mis tagab õige konsistentsi.

Teisest küljest võib Sabouraudi dekstroosiagar olla antibiootikumide lisamisel selektiivne.

Antibiootikumide puhul on see eriti kasulik haavaproovides, avatud haavandites või mis tahes proovis, milles kahtlustatakse suurt bakteriaalset saastumist.

Sabouraudi dekstroosiagari ja antibiootikumide kõige enam kasutatud kombinatsioonid

-Sabouraud-agar kloramfenikooliga: ideaalne pärmide ja niitide taastamiseks.

-Sabouraud gentamütsiiniga ja klooramfenikooli: sel viisil kasvatada kõige niitjad seened ja pärmid ja pärsib suur hulk baktereid, sealhulgas enterobakterite, Pseudomonas ja Staphylococcus.

-SabouraudM tsükloheksimiidiga: Eriti kasulik on proove naha või hingamisteede kaudu, niikaua kahtlustus dimorfsetesse seen.

Tsükloheksimiidi tuleb kasutada ettevaatusega; Kuigi seda kasutatakse proovis sisalduvate mittepatogeensete või keskkonnaseente ja pärmide kasvu pärssimiseks, inhibeerib see ka mõnede seente, nagu Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp ja muud oportunistlikud seened.

-Sabouraud agar kloramfenikooli ja tsükloheksimiidiga: kasutatakse peamiselt dimorfsete dermatofüütide ja seente eraldamiseks. Selle puuduseks on see, et see pärsib mõningaid oportunistlike seente liike nagu Candida ei albicans, Aspergillus, Zygomycetes või C. neoformans.

-SabouraudM agarit klooramfenikooli, penitsilliini G ja tsükloheksimiidile: sobib väga proovid saastunud bakterite ja saprofüütsete seened, kuid selle puuduseks pärsib nende kasvu Actinomyces ja Nocardias, lisaks eespool nimetatud oportunistlikele seentele.

Ettevalmistus

Kui teil on koostisosad eraldi, saate seda valmistada järgmisel viisil:

Dekstroosi agar Sabouraud 

Kaaluge:

- 40 g dekstroosi

- 10 g peptooni

- 15 g agar-agarit

- Mõõdetakse 1000 ml destilleeritud vett

kõik koostisosad on segunenud, pH reguleeriti 5,6. Seal on lahustatud aineid keetes, 20 ml söödet jaotub torudest 25 x 150 mm, ilma ääriku ja kaas eelistatavalt puuvilla.

Kasutada võib ka muid toru suurusi.

Neid autoklaavitakse 10 minutit rõhu atmosfääris (121 ° C). Ärge ületage autoklaavimise aega. Autoklaavist lahkudes kallutatakse torusid toega, kuni need tahkestuvad flöödis..

Teine võimalus on lahustada koostisosad kuumutamisega, kuni see keeb. Samas autoklaavis 10 minutit ja seejärel 20 ml Petri tassidesse.

Kui teil on SabouraudM glükoostoiteagar keskmise, mis sisaldab juba kõik koostisosad, astume vaatamata määratud summat kauplemise maja ühe liitri vee kohta. Ülejäänud etapid on samad, mis eespool kirjeldatud.

Dekstroosiagar Sabouraud (Emmonide muutmine)

Kaaluge:

-  20 g dekstroosi

- 10 g peptooni

-  17 g agar-agarit

-  Mõõdetakse 1000 ml destilleeritud vett

Kõik koostisosad segatakse, pH reguleeritakse väärtusele 6,9. Jätkake samamoodi nagu eelmisel juhul.

On kommertsmaju, mis pakuvad keskkonda koos kõigi koostisosadega. Sellisel juhul kaalutakse ja valmistage ette nii, nagu on kirjeldatud sisetükis.

Sabouraudi dekstroosiagar (Emmonsi muutmine) kloramfenikooliga

Kloramfenikooli põhilahus

- Kaalutakse 500 mg kloramfenikooli alust

- Mõõdetakse 100 ml 95% etanooli

- Segage

Sabouraudi dekstroosi agari söötmega (Emmons) valmistatakse ülalkirjeldatud viisil ja lisaks lisatakse iga autoklaavi kohta 10 ml kloramfenikoolilahust enne autoklaavimist..

Dekstroosiagar Sabouraud Emmons tsükloheksimiidiga

Tsükloheksimiidi põhilahus

- Kaaluge 5 g tsükloheksimiidi

- Mõõdetakse 100 ml atsetooni

- Segage

Sabouraudi dekstroosi agarikeskkond (Emmons) valmistatakse nii, nagu on kirjeldatud eespool, ja täiendavalt iga liitri kohta lisatakse 10 ml tsükloheksimiidi põhilahust enne autoklaavimist..

Sabouraudi dekstroosiagar (Emmons) kloramfenikooli ja tsükloheksimiidiga

SabouraudM glükoostoiteagar keskkonnas (Emmonsi) valmistati nagu juba kirjeldatud ja edasi liitri lahuse kohta lisatakse 10 ml klooramfenikooli alglahust ja 10 ml tsükloheksimiidile alglahust enne autoklaavimist.

Muud antibiootikumid, mida saab lisada

20 000 kuni 60 000 ühikut penitsilliini ühe liitri kohta.

30 mg streptomütsiini ühe liitri kohta.

Mõlemad tuleb lisada pärast keskkonda autoklaavimist, kergelt jahutatud (50-55 ° C).

0,04 g neomütsiini ühe liitri kohta.

0,04 g gentamütsiini ühe liitri kohta.

Erilised kaalutlused

Ohutuse on eelistatud taime SabouraudM glükoostoiteagar in kiilukujulise torud (kallutatud flööt piik) asemel Petri tassides, et vältida dispersiooni ja sissehingamine spooride.

On oluline, et Sabouraud agariga torud oleksid kaetud puuvillaga ja mitte kruvikorkiga, kuna on näidatud, et semianaerobsed seisundid pärsivad spooride moodustumist teatud tüvedes. Coccidioides immitis. Lisaks on enamik seeni aeroobsed.

Kruvikorki kasutamisel ärge sulgege tihedalt.

Kvaliteedikontroll

Ettevalmistatud meedia peab olema kvaliteedikontroll, et kontrollida nende nõuetekohast toimimist. Selleks külvatakse teatavad kontrolltüved.

Sabouraudi puhul võib kasutada kloramfenikooli ATCC tüvesid sisaldavat dekstroosi agarit. Candida albicans, mis peab olema väga hea. Teine plaat nakatatakse tüvedega Escherichia coli kohta, peab olema täielikult blokeeritud.

Inkubeerimata plaati inkubeeritakse, milles mikroorganismid ei tohiks kasvada.

Kasutada võib kloramfenikooli ja tsükloheksimiidi sisaldavat Sabouraudi dekstroosiagarit  Trichophyton mentagrofüüdid, peab hästi arenema. Teine plaat nakatatakse tüvega Aspergillus flavus, kus peab olema vähe kasvu või mitte kasvu. Lisaks inkubeeritakse inokuleerimata plaati, et näidata selle steriilsust.

Sabouraudi dekstroosi agarile tsükloheksimiidiga. \ T Candida albicans, Trichophyton rubrum  o Microsporum canis, mis peaks näitama head kasvu.

Samamoodi on tüvi Aspergillus flavus, vähest kasvu või kasvu puudumist. Lõpuks inkubeeritakse steriilsuse kontrollimiseks nakatamata plaati.

Kasutamine

Esmane kasvatamine

SabouraudM glükoostoiteagar klassikaline sisaldab 4 g glükoosi ja on suurepärase esmase isoleerimise keskmise näitab see esineb morfoloogiliselt iga seene.

Samuti on hea näidata pigmentide tootmist. Siiski ei ole see kõige sobivam vahend sporulatsiooni jälgimiseks.

Samuti ei ole soovitatav kasvada Blastomyces dermatitidis, mida inhibeerib kõrge glükoosi kontsentratsioon.

Teisest küljest tuleb kasvatamisel arvestada teatud kaalutlustega.

Mõned seened arenevad paremini toatemperatuuril, näiteks vormid, teised arenevad edukalt 37 ° C juures, nagu mõned pärmid, ja teised võivad areneda mõlemal temperatuuril (dimorfsed seened).

Sel põhjusel on mõnikord vaja sama proovi jaoks kasutada mitmeid Sabouraudi agariplaate, kuna neid istutatakse sageli kahes eksemplaris, et inkubeerida üks plaat toatemperatuuril ja teine ​​plaat temperatuuril 37 ° C..

Näiteks, Sporothrix schenckii see külvatakse kahele plaadile; ühte inkubeeritakse toatemperatuuril, et saada vormi faas ja teist inkubeeritakse 37 ° C juures pärmitaolise faasi saamiseks, kuid viimases on vaja lisada 5% verd söötmele.

Muudel juhtudel, nagu müketoomide proovides, külvatakse kaks Sabouraud agari plaati, üks kloramfenikooliga ja teine ​​tsükloheksimiidiga. Esimene võimaldab kasvajaid seenhaiguse (Eumicetoma) müketoomide ja bakteriaalse mütsoomi teise põhjusliku agensi, näiteks aktinomütsetoomide kasvu..

Sporulatsioon

Emmonsi modifitseeritud dekstroosi Sabouraud agar sisaldab 2 grammi dekstroosi ja seda kasutatakse mitte ainult isoleerimiseks, vaid ka seente sporulatsiooni ja säilitamise jaoks..

Selles söötmes, kui saad taastuda tüved Blastomyces dermatitidis.

Kaitse

Seenkultuuride säilitamiseks võib neid hoida külmkapis (2-8 ° C). Säilitamisaeg võib varieeruda 2-8 nädalat. Pärast seda tuleb neid protsessi alamkultuureerida.

Mõned seened on parimad toatemperatuuril, näiteks Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum ja Microsporum audounii.

Tüve säilitamist võib pikendada, et vältida pleomorfismi, kui dekstroos on agarist täielikult eemaldatud ja kui agari kogus söötmes väheneb kuivuse vältimiseks..

Mikrokultuurid

Mõnede kiudude seente identifitseerimiseks on vaja läbi viia mikrokultuure, kasutades Sabouraud agarit või teisi erivahendeid seksuaalse ja ebatavalise paljunemise struktuuride jälgimiseks..

Inimese mükoloogias

Seda kasutatakse peamiselt seenhaiguste, eriti nahale ja selle kinnitusvahenditele (juuksed ja küüned) mõjutavate haiguste diagnoosimiseks..

Proovid võivad olla sekretsioonid, eksudaadid, nahk, juuksed, küüned, röga, CSF või uriin. Tavaliselt isoleeritud patogeenid on dermatofüüdid, seened, mis põhjustavad subkutaanseid ja süsteemseid seeninfektsioone.

Loomade mükoloogia

Loomi mõjutavad sageli seeninfektsioonid, mistõttu Sabouraud agar on sama kasulik loomadel kui inimese mükoloogias..

Näiteks võivad dermatofüüdid sageli mõjutada loomi. Selline on nii Microsporum canis var distortum, sageli nakatab koerad, kassid, hobused, sead ja ahvid. Samuti, Microsporum gypseum nakatab koerad, kassid ja veised.

Linnud, nagu kanad, kuked ja kanad, on mõjutatud Microsporum gallinae.

Muud seened, nagu Zymonema farciminosum, nad on ka loomade, peamiselt hobuste, muulide ja eeslite haiguste põhjuseks, mis põhjustavad lümfisoonide olulist põletikku..

Sporothrix schenkii ja Histoplasma capsulatum mõjutada kodu- ja inimloomi.

Keskkonna mükoloogia

Paljudel patogeensetel või oportunistlikel seentel on võimalik keskkonda igal ajal kontsentreerida, eriti kliinilistes ja haiglate intensiivraviüksustes ja intensiivraviüksustes. Seetõttu on vaja neid kontrollida.

Muud haavatavad ruumid on raamatukogud ja vanad hooned, mida võivad mõjutada keskkonnaseente kontsentratsioon.

Keskkonnauuringutes kasutatakse seente eraldamiseks Sabouraudi dekstroosiagarit.

Tööstuslik mükoloogia

Kosmeetikatoodete, toiduainete, jookide, naha, tekstiiltoodete tootmises esinevate seente saasteainete uurimisel ei saa puududa Sabouraudi dekstroosiagarit..

Taimse mükoloogia

Taimed kannatavad ka seente põhjustatud haiguste pärast, mis mõjutavad taime erinevaid osi, mis võivad isegi saagi lõpetada, põhjustades põllumajanduses suuri kahjusid..

Viited

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mükooside mikrobioloogiline diagnoos ja seentevastaste ainete tundlikkuse uuringud. Hispaania nakkushaiguste ja kliinilise mikrobioloogia ühingu soovitused. Saadaval aadressil: coesant-seimc.org
2. ValteK labor. (2009). Sabouraudi dekstroosiagar tsükloheksimiidiga. Saadaval aadressil: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinaarmikoloogia. Riiklik põllumajanduslik ülikool. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scotti mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja
5. Casas-Rincon G. Üldine mükoloogia. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, raamatukogu väljaanded. Venezuela, Caracas.