Papa dekstroosi vundament, ettevalmistamine ja kasutamine



The papa dekstroosi agar see on tahke, mitteselektiivne toitev keskkond. See võib kasvatada baktereid ja seeni, kuid selle kasutamine on näidustatud eriti filamentseente ja pärmide eraldamiseks. Seda tuntakse ka PDA-söötmena inglise keeles väljendis „Kartuli dekstroosi agar”.

See on eriti kasulik fütopatogeensete seente, st taime mõjutavate seente eraldamiseks. Nakatunud taimedest proovide istutamiseks võib kasutada teisi söötmeid, nagu Sabouraud agar või malta agar, kuid tavapäraseks kasutamiseks on eelistatud suurem kartulite dekstroosi agar..

Seda kasutatakse ka seente kolooniate loendamiseks kosmeetikatoodete, ravimite ja mõnede piimatoodete proovides. Samamoodi on otstarbekas istutada naha kraapimise proove dermatofüütide otsimisel, mis kasvavad selles keskkonnas väga hästi, arendades nende iseloomulikke pigmente.

Kartuli dekstroosikeskkond on laboris väga lihtne ja kergesti valmistatav. Nagu nimigi ütleb, sisaldab see kartuli infusiooni, dekstroosi ja agar-agarit. Lisaks võib bakterite kasvu vältimiseks ja seeneliikide selektiivsuse suurendamiseks lisada täiendavaid inhibeerivaid aineid.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 - papa dekstroosi agari valmistamine kodust (mittekaubanduslik)
    • 2.2 - papa dekstroosi agari kaubanduslik ettevalmistus
  • 3 Kasutamine
    • 3.1 Taimeproovide istutamise protsess kartuli dekstroosi agaril
    • 3.2 Naha, karvade või küünte kaalude istutamise protsess papa dekstroosi agaril
    • 3.3 Identifitseerimismenetlus
    • 3.4 Kolooniate arv
    • 3.5 Seente tüvede säilitamine
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Viited

Sihtasutus

Papa dekstroosi agar on kultiveerimiskeskkond, mis pakub vajalikke toiteelemente kiuliste seente ja pärmide väljatöötamiseks..

Kartuli infusiooni ja glükoosi kombinatsioon tagab täiusliku energiaallikana seente rahuldava kasvu jaoks. Agar on keskkonda järjepidev.

Ainuüksi sööde ei inhibeeri bakterite kasvu, seega on see mitteselektiivne sööde. Selektiivseks muutmiseks on vaja lisada inhibeerivaid aineid, nagu viinhape või antibiootikumid.

Ettevalmistus

-Kartuli dekstroosi agari valmistamine koduselt (mittekaubanduslik)

Petri tassid

See on koostatud järgmiselt:

Esiteks pestakse kartuleid väga hästi, eemaldades nende mustuse. Nad lõigatakse õhukesteks viiludeks kõike ja koorega. 200 g kartuleid kaalutakse ja pannakse keetmiseks pool tundi destilleeritud vees.

Pärast aega filtreeritakse või pingutatakse kogu preparaat läbi marli.

Saadud vedelik täidetakse destilleeritud veega, kuni see jõuab ühe liitrini. Infusioonile lisatakse 20 g agarit ja 20 g dekstroosi, segatakse hästi ja autoklaavitakse 121 ° C juures 15 naela rõhu all 15 minutit.

Laske jahtuda 50 ° C-ni ja serveerige steriilsetes Petri tassides. Valmistatud plaate hoitakse külmkapis.

Kiilud

Võite valmistada ka papa dekstroosi agari kiilusid.

Sellisel juhul pannakse enne autoklaavis steriliseerimist 12 kuni 15 ml keskkonda torudesse, seejärel autoklaavitakse ja lahkudes jäetakse need spetsiaalsetele tugedele, kuni need tahkestuvad. Salvesta külmkapis.

Söötme pH on 5,6 ± 0,2, kuid mõned laborid lisavad 10% viinhapet, et vähendada pH väärtust 3,1 ± 0,1-ni, et inhibeerida bakterite kasvu.

Sama mõttes eelistavad teised laborid lisada antibiootikume, et muuta see seente selektiivseks ja vältida bakterite arengut..

-Kartuli dekstroosi agari kaubanduslik ettevalmistus

Kaalutakse 39 g kaubanduslikult saadavat veetustatud keskkonda ja lahustatakse ühes liitris destilleeritud vees. Jäta puhata 5 minutiks.

Segu kuumutatakse segades sageli kuni täieliku lahustumiseni. Seejärel steriliseeriti autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit.

Plaate või kiile saab valmistada. Jätkake eespool kirjeldatud viisil.

PH jääb 5,6 ± 0,2-ni. Kui soovitakse pH väärtust 3,1, tuleb enne plaatidele manustamist lisada 14 ml 20% steriilset viinhapet..

Valmistamata söötme värvus on beež ja valmistatud kergelt merevaigukollaseks, kergelt hägune või opalestseeruv.

Kasutamine

Protsess taime proovide istutamiseks kartuli dekstroosi agarisse

-Laigudega kohtade jaoks

Lehed lõigatakse tükkideks.

50-protsendilise 50% alkoholi sisaldava klaasiga asetage lehed (peitsitud ja tervislikud tükid) pinna desinfitseerimiseks 20–30 sekundiks. Tõmmake alkohol ja lisage 20% naatriumhüpoklorit 40 kuni 50 sekundiks, kui need on õhukesed lehed, ja suurendage aega 80 sekundini, kui tegemist on koorega ja palgiga.

Tõmmake naatriumhüpoklorit ja võtke desinfitseeritud tükid steriilse klambriga ja asetage söötme pinnale (maksimaalselt 10 tükki). Asetage kuupäev ja inkubeerige 20–30 ° C.

-Puuviljade ja mugulate jaoks

Kui puuviljad on lihavad, avage seene poolt mõjutatud puuviljad ja võtke tükid steriilse skalpelliga, nii haige osa kui ka terve osa ja asetage see agari pinnale..

Kui viljad on tsitrusviljad, näiteks sidrun või apelsin, peaksite oma seemned avama ja külvama.

Kui viljapind on mõjutatud ja spoore täheldatakse, on kõige parem kasutada plaadil riivitud meetodit; see seisneb spooride puudutamises "L" steriliseeritud ja jahutatud spaatliga ning seejärel täidetakse siksak, mis külvatakse 2 kuni 3 korda agarile.

-Terade puhul

Need desinfitseeritakse lehtedel kirjeldatud viisil ja asetatakse seejärel agarile.

-Filiaalide ja varred

Tehakse koore kraapimine ja seejärel võetakse terve ja haigestunud osa tükid ja külvatakse otse agarile..

Külvatud plaate inkubeeritakse aerobiosis temperatuuril 20-30 ° C 72 tundi.

Protsess naha, karvade või küünte kaalude istutamiseks papa dekstroosi agarile

Proov tuleb võtta skalpelliga nr 11, et lõigata kahjustatud juuksed, naha helbed või küüned dermatofüütide otsimisel. Enne proovi võtmist tuleb piirkond desinfitseerida 70% alkoholiga.

-Naha proov

Scaly kahjustuste korral tuleb kahjustuse serva kraapida, sest seen on tõenäolisem.

Eksudatiivsetes kahjustustes võetakse proovi kuiva või märja tampooniga. Külvage kohe kartuli dekstroosi agarile või Sabouraud agarile. Vältige transpordivahendeid.

Teine proovivõtumeetod on Mariat'i ja Adan Campose vaipnurktehnoloogia kaudu. Sellisel juhul hõõrutakse kahjustatud piirkonda viis korda steriilse villaga edasiseks kasvatamiseks.

Proovi võib panna otse söötmesse.

-Juukseproov

Sõltuvalt patoloogiast võib juurte poolt kahjustatud osa lõigata või ära lõigata. Proov asetatakse söötmesse.

-Küüneproov

Saate kraapida või lõigata kahjustatud küünte teatud osa. See sõltub vigastuse liigist.

Proov lõigatakse enne külvi 1 mm tükkideks, et suurendada seente kokkupuute tõenäosust söötmega.

Identifitseerimismenetlus

Plaadil saadud kolooniad isoleeritakse kartulite dekstroosi agarit sisaldavates tuubides, et viia läbi kolooniate makroskoopiline uuring (välimus, värvus, konsistents, arengu aste)..

Mikroskoopilist uuringut (struktuuride ja nende moodustuste vaatlemine) saab teha mikrokultuuride või laminaadi ja lamelli mikroskoobi all otsese vaatluse teel..

Kolooniate arv

Seda söödet võib kasutada ka taime proovide, toidu, kosmeetika või ravimite seente ja pärmide koormuse määramiseks. Selleks kasutatakse papa dekstroosiagarit, millele on lisatud antibiootikume, näiteks: (kloramfenikool, klorotetratsükliin või mõlemad)..

Valage 1 ml proovi - eelistatult lahjendatud - steriilsesse ja tühja Petri tassi, seejärel sulatage kartuli dekstroosi agaripistik ja lastakse jahtuda temperatuurini 45 ° C. Valage petri tassi ja pöörake, kuni see on homogeenitud. Jätke see puhata, kuni see tahkestub.

Inkubeerige aerobiosis temperatuuril 20-25 ° C (vormid) või 30-32 ° C (pärm) 5 kuni 7 päeva või kauem, sõltuvalt soovitud seente tüübist ja proovi tüübist. Mõlema temperatuurivahemiku inkubeerimiseks võib kasutada kahte plaati.

Seente tüvede säilitamine

Elujõuliste seente tüvede säilitamiseks võib mitme aasta jooksul kasutada papa dekstroosi agarit.

Selleks kasvatatakse seeni papa dekstroosi agarkiiludes ja pärast seene kasvatamist kaetakse see mineraalõliga. Õli tuleb steriliseerida autoklaavis 45 minutit ja selle ligikaudne viskoossus on 300 kuni 330 Saybolt. Õli peaks ületama kalduotsiku 1–2 cm võrra.

Kvaliteedikontroll

Igast ettevalmistatud partiist tuleb võtta üks või kaks plaati ja inkubeerida temperatuuril 25 ° C 48 tundi või 20 ° C juures 96 tundi. Hea steriilsuse kontroll on selline, kus kolooniaid ei teki.

Tuntud või sertifitseeritud kontrolltüved nagu:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrofüüdid ATCC 9533. Kõigil juhtudel on oodata head kasvu.

Viited

  1. Laboratooriumid Britania. Papa glükosado agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories Kartuli dekstroosi agar. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
  3. Insumolabi labor Kartuli dekstroosi agar. Saadaval aadressil: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. Üldine mükoloogia. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, raamatukogu väljaanded. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Hinnang mikrobioloogilisele kvaliteedile lauvärvides, kompaktse pulbri tüüp riikliku tootmislabori järgi vastavalt Pharmacopeia Usp võrdlusmeetodile 2005. Lõputöö, et saada farmatseutilise keemiku tiitli. San Carlos de Guatemala ülikool.
  7. Cuétara M. Pinna proovide töötlemine. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; lk. 1-12