Agar Müeller Hintoni vundament, valmistamine ja kasutamine



The Müeller Hintoni agar See on tahke, mitteselektiivne toitekeskkond, mis koosneb liha infusioonist, kaseiinhappepeptoonist, tärklisest, agarist ja destilleeritud veest. See keskkond võimaldab suurepäraselt mikroobset arengut kõige kiiremini kasvavatel bakteritel.

Algselt loodi John Howard Müeller ja Jane Hinton toitumisvajalike bakterite, nagu Neisseria gonorrhoeae ja Neisseria meningitidis. Kuid selle omaduste tõttu osutus see ideaalseks antibiootikumidele vastuvõtlikkuse uurimiseks, pakkudes usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi.

Sel põhjusel on Müeller Hintoni agar kliinilise ja laboratoorsete standardite instituudi (CLSI) ja Euroopa antimikroobse tundlikkuse testimise komitee poolt heaks kiidetud söötme antimikroobse tundlikkuse testi läbiviimiseks Kirby plaadi difusiooni meetodil. Bauer.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutamine
    • 3.1 Antimikroobne tehnika
    • 3.2 Plaatide strateegiline paigutamine Müeller Hintoni agarile
  • 4 Vale tulemuse põhjused
  • 5 Piirangud
  • 6 Kvaliteedikontroll
  • 7 Viited

Sihtasutus

Kuna see on mitteselektiivne toiteaine, on see suurepärane paljude patogeensete bakterite kasvuks.

Teisest küljest muudab selle lihtsa koostisega aine kergesti hajutatavaks, mis on leviku difusiooni meetodil tundlikkuse testile omane..

Teine selle omadus on see, et see sisaldab väikest kogust inhibiitoreid, mis võimaldavad efektiivselt hinnata sulfoonamiide, trimetoprimi ja tetratsükliine..

Siiski tuleb meeles pidada, et andmekandja peab selle nõuetekohase toimimise tagamiseks vastama teatavatele tingimustele, sealhulgas:

PH reguleerimine, agari sügavus ja tümiini, tümidiini, Ca piisav kontsentratsioon++, Mg++ ja Zn++.

Samuti peame teadma, et metoodika on standarditud ja seetõttu peavad kõik parameetrid olema täidetud, näiteks:

Inokulaadi kontsentratsioon, antibiootiliste ketaste kontsentratsioon ja säilitamine, sobiva arvu plaatide paigutamine agarile, vahekaugus ühe plaadi ja teise vahel, teatud antibiootikumide, atmosfääri, temperatuuri ja aja strateegiline paigutamine. inkubatsioon.

Ettevalmistus

Kaaluge 37 g veetustatud Müeller Hintoni söödet ja lahustage 1 liitris destilleeritud vees. Kuumutage söödet segades, et see lahustada. Lase keeda 1 minut.

Autoklaav steriliseeritakse 121 ° C juures 15 minutit. Autoklaavist eemaldamisel tuleb fiola panna 50 ° C veevannis jahtuma. Vala 25-30 ml steriilsetesse Petri tassidesse, mille läbimõõt on 10 cm.

Plaadid peaksid olema keskmise paksusega 4 mm (ideaalne), lubatud vahemikus 3-5 mm.

Kui soovitakse valmistada veri agarit, kasutades Müeller Hintoni agarialust, valatakse enne plaatidele manustamist 5% steriilset ja defibrineeritud lambavere..

Söötme lõplik pH peaks olema vahemikus 7,2 kuni 7,4.

Investeerige ja säilitage külmkapis kuni kasutamiseni. Laske plaadil enne kasutamist kasutada toatemperatuuri.

Valmistatud söötme värvus on kerge beež.

Kasutamine

Seda kasutatakse antibiootikumi või antibiootikumi suhtes tundlikkuse testi läbiviimiseks enamiku kiiresti kasvavate patogeenide puhul.

Kui agarit täiendatakse verega, siis täidab see nõudlike mikroorganismide, näiteks: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, muu hulgas. Seda on kasutatud ka isoleerimiseks Legionella pneumophila.

Antibiogrammi meetod

Enne antibiootikumi läbiviimist tuleb valmistada 1,5 x 10 ekvivalentne bakterilahus8 rakke.

Selleks võetakse puhtast kultuurist 3 kuni 4 kolooniat ja suspendeeritakse tripticase soja puljongis või Müeller Hintoni puljongis, inkubeeritakse 2 kuni 6 tundi ja kontsentratsiooni reguleeritakse steriilse soolalahusega, võrreldes seda Mac Farlandi standardiga. 0,5%.

Kui nad on nõudlikud mikroorganismid, võib kolooniad otse peatada, kuni nad saavutavad 0,5% Mac Farlandi kontsentratsiooni. Seejärel külvatakse Müeller Hintoni plaat ettevalmistatud bakterilahusega immutatud tampooniga.

Selleks kastke tampoon lahusesse ja eemaldage seejärel liigne vedelik, vajutades toru torudele. Vahetult pärast tampooni läbimist kogu pinnale, jättes puutumata kohad, pöörake seejärel plaati kergelt ja külvage uuesti. Toimingut korratakse veel 2 korda.

Laske seista 10 minutit ja seejärel asetage antibiootikumid plaatidele steriilsete tangidega, jättes nende vahele 24 mm ruumi. Pärast iga plaadi asetamist agarile vajutage igaüks klambriga kergelt, et tagada nende hea kleepumine.

Protsessi järel pööratakse plaat ümber ja inkubeeritakse aerobioosis temperatuuril 16-18 tundi temperatuuril 35-37 ° C. Kui see on nõudlik mikroorganism, võib see vajada mikroaerofiiliat ja kui antibiootogramm sisaldab oksatsilliini plaate, tuleb seda lugeda 24 tundi..

Iga halo läbimõõdu mõõtmiseks kasutatakse joonlauda. Tulemused tuleb registreerida millimeetrites. Seejärel korrigeeritakse saadud väärtused praeguste CLSI käsiraamatus avaldatud lõikepunktide tabelitega.

Esitage vajadusel tundlik (S), vahe (I) või resistentne (R).

Antibiootikumid valitakse vastavalt eraldatud mikroorganismile ja esineva nakkuse tüübile.

Mõnikord tuleks kaaluda antibiootikumide strateegilist paigutamist fenotüübiliste resistentsusmudelitega.

Plaatide strateegiline paigutamine Müeller Hintoni agarile

Enterobakterite puhul tuleb klavulaanhappe ketas asetada 3. ja 4. põlvkonna tsefalosporiinide ette. Munakujuline laienemine näitab, et tüvi on laiendatud spektri beeta-laktamaaside (ESBL) tootja. See tähendab, et patsienti ei tohi ravida tsefalosporiiniga.

Staphylococcus'is on oluline asetada erütromütsiini või asitromütsiini ketas klindamütsiini plaadi ette (D-test)..

Erütromütsiini resistentne halo ja klindamütsiini halo lamedus näitavad, et tüvel on indutseeritav resistentsus klindamütsiini, tüve (RIC) suhtes. See tähendab, et ravi klindamütsiiniga ei ole efektiivne.

Indutseeritavate AMP C tüvede otsimiseks Enterobacteriaceae's ja mõningatel kääritamatutel gramnegatiivsetel bakteritel on tseftasidiimi, tsefoksitiini või piperatsilliini tazobaktaani plaadid 27 mm kaugusel imipeneemiga..

Üks imipeneemile suunatud ketastes lamedat halo näitab indutseeritava AMP C olemasolu.

Konstitutiivse AMP C otsingu jaoks on kloksatsilliini 500 µg ketas 25 mm kauguses tseftasidiimiga (30 μg) ja tsefotaksiimiga (30 μg). Laiendatud halo ühest tsefalosporiinist näitab positiivsust.

Kloksatsilliini ketast saab asendada ka 9 mm Whatman No. 6 filtriga paberiga, mis on immutatud fenüülboorhappega (400 μg) 18 mm kaugusega. Seda tõlgendatakse sama kui eelmist.

Lõpuks uuritakse metallo-beeta-laktamaaside tootmist, eriti Pseudomonas aeruginosa, 15 mm kaugusel on imipeneemi ja meropeneemi ketaste külge 10 μl etüleendiamiintetraäädikhappega (EDTA 750 μg) ja tioglükoolhappega (SMA 300 μg) immutatud ketas..

Test on positiivne, kui imipeneemi või meropeneemi halosid EDTA / SMA ketta suunas laieneb. Seda tulemust tuleb kinnitada modifitseeritud Hodge-testiga.

See meetod seisneb Escherichia coli ATCC 25922 Müeller Hintoni plaadil. Imipeneemi ketas asetatakse plaadi keskele ja seejärel tehakse plaadilt flööt perifeeria suunas koos tüve tüvega. P. aeruginosa kahtlustatav Plaadi kohta saate testida kuni 4 tüve.

Test on positiivne, kui striast ümbritseva imipeneemi halo on moonutatud.

Vale tulemuse põhjused

-Halvasti säilinud antibiootikumide plaadid võivad tekitada valesid takistusi. Näiteks on oksatsilliini ketas temperatuuri muutuste suhtes väga tundlik.

-Temperatuuril, mis on madalam kui näidatud (happeline), tekib aminoglükosiidides ja makroliidides (vale resistentsuse risk) väiksemaid haloone ja penitsilliini, tetratsükliini ja novobiotsiini suuremaid haloone (vale tundlikkuse risk).

-Kui pH on üle näidatud (leeliseline), siis on eespool kirjeldatud toimed vastupidised.

-Kõrge tümiini ja tümidiini kontsentratsiooniga söötmed vähendavad oluliselt sulfoonamiidide ja trimetoprimi inhibeerimist.

-Kaltsiumi ja magneesiumi kõrged kontsentratsioonid põhjustavad aminoglükosiidide, polümüksiin B ja tetratsükliinide vale resistentsuse \ t Pseudomonas aeruginosa.

-Kaltsiumi ja magneesiumi väikesed kontsentratsioonid tekitavad aminoglükosiidide, polümüksiin B ja tetratsükliinide vale tundlikkuse. Pseudomonas aeruginosa.

-Tsinki esinemine mõjutab karbapeneemide ketaste (imipeneem, meropeneem ja ertapeneem) tulemusi..

-Alla 3 mm kandja paksus tekitab vale tundlikkuse tulemusi, samas kui paksus üle 5 tekitab vale vastupanu.

-Plaatide mobiliseerimine antibiootikumis annab deformeerunud halosid, kuna antibiootikumide eraldumine on vahetu.

- Väga nõrgad inokulaadid mõjutavad tulemusi, kuna agaril ei ole ühtlast või konfluentset kasvu, mis on vajalik tingimus inhibitsioonitsoonide mõõtmiseks, lisaks sellele, et haloonid võivad anda tavalisest suuremad..

-Ülekoormatud inokulaadid võivad anda tavapärasest väiksemaid haloosi.

-Kettadevahelise kauguse eiramine põhjustab ühe halo teise kattumise ja seda ei saa korrektselt lugeda.

-Inkubeerige CO2 suurendab tetratsükliini ja metitsilliini ketaste halo suurust.

-Inkubeerimine temperatuuril alla 35 ° C toodab suuremaid haloone.

-Vere lisamine vähendab sulfoonamiidide halo suurust.

Piirangud

Antibiootikumi tundlikkus mikroorganismi vastu (in vitro) ei garanteeri, et see toimib in vivo.

Kvaliteedikontroll

Et teada saada, kas söötmes on õige kogus tümiini, tuleks külvata tüvi Enterococcus faecalis’t ATCC 29212 ja testida vastuvõtlikkust trimetoprimi sulfametoksasoolile (SXT), peaks see andma halo, mis on võrdne või suurem kui 20 mm..

Viited

  1. "Agar Müller-Hinton." Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 16. november 2018, 12:23 UTC. 27. jaanuar 2019, 04:22
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  3. Cona E. Hea tundlikkuse uuringu tingimused agari difusioonikatse abil. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
  4. Difco Francisco Soria Melguizo labor. Müeller Hintoni agar, milles oli 5% lambavere. 2009. Saadaval aadressil: http://f-soria.es
  5. BD Müeller Hinton II Agari labor. 2017. Saadaval aadressil: .bd.com
  6. Laboratooriumid Britania. Müeller Hintoni agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas tüüp AmpC: Üldised ja meetodid fenotüübiliseks avastamiseks. Soc. Ven. Microbiol. 2009; 29 (2): 78-83. Saadaval aadressil: scielo.org.
  9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. Fenotüüpiline metallobetalaktamaaside avastamine kliinilistes isolaatides Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012; 40 (2): 113-121. Saadaval aadressil: scielo.org.