Agar M.R.S sihtasutus, valmistamine ja kasutamine



The agar M.R.. on selektiivne tahke kultuurikeskkond, mida kasutatakse piimhappebakterite, eriti perekonna Lactobacillus isoleerimiseks ja loendamiseks. See agar loodi 1960. aastal Mani, Rogosa ja Sharpe'i poolt, mille keskel oli sama nimi, kuid selle keerukuse tõttu kasutatakse sageli lühendit M.R.S..

See koosneb proteoosi peptoonist, lihaekstraktist, pärmiekstraktist, glükoosist, sorbitaanmonoleaadist, dikaliumfosfaadist, naatriumatsetaadist, ammooniumtsitraadist, magneesiumsulfaadist, mangaansulfaadist ja agarist..

See kompositsioon võimaldab kliiniliste proovide piimhappebakterite, nagu väljaheide, tupe sekretsiooni, suukaudsete proovide ja rinnapiima, samuti piimatoodete ja lihatoodete nõuetekohast arengut..

Seda ei kasutata kliinilistes laborites rutiinselt, sest piimhappebakterid on harva seotud patoloogiliste protsessidega. M.R.S agari kasutamine on aga sagedamini toidu mikrobioloogia valdkonnas..

Teisest küljest kasutavad seda meediat mõned uurimiskeskused, mille eesmärk on piimhappebakterite uurimine.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutamine
    • 3.1 Kolooniate omadused
    • 3.2 Piimhappebakterite eraldamine
    • 3.3 Piimhappebakterite loendamine
    • 3.4 Teadusuuringute tasandil
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Viited

Sihtasutus

Agar Man, Rogosa ja Sharpe on üsna keerulise koosseisuga. Jaotades funktsiooni, mida iga selle komponent täidab, saab selgitada selle vundamenti.

Proteiini peptoon, lihaekstrakt, pärmiekstrakt ja glükoos on toitained, mis annavad bakterite kasvuks vajaliku süsiniku, lämmastiku, vitamiinide ja mineraalainete allika. Lisaks on glükoos universaalne energiaallikas, mida kasutatakse enamikus kultuurikeskkondades.

Teisest küljest, selleks, et soodustada piimhappe bakterite kasvu, on vajalik Lactobacilluse ja sellega seotud bakterite metabolismis vältimatute kofaktorite (katioonide) olemasolu; Need ühendid on naatriumi, magneesiumi ja mangaani soolad.

Samamoodi on sorbitaanmonoleaat või polüsorbaat 80 oluliste rasvhapete allikad, kui neid absorbeeritakse toitainetena..

Lisaks toimivad sorbitaanmonoleaat ja ammooniumtsitraat inhibeerides kaasneva taimestiku, eriti gramnegatiivsete bakterite arengut, tagades selle agari selektiivse iseloomu..

Lõpuks annab agar-agar keskkonda tahke konsistentsi.

Man Rogosa Sharpe agaril on ka teisi variante; üks neist on tsüsteiiniga (M.R.S.c), mis on väga kasulik bifidobakterite eraldamiseks teiste mikroorganismide seas. Teisest küljest on olemas MRS-keskkond, millele on lisatud neomütsiini, paromomütsiini, nalidikshapet ja liitiumkloriidi, eriti bifidobakterite selektiivseks loendamiseks piimatoodetes..

Ettevalmistus

Kaalutakse 68,25 grammi veetustatud söödet ja lahustatakse ühe liitri destilleeritud vees. Laske seista 5 minutit. Tervenisti lahustumiseks viige soojusallikale sageli segades ja keedetakse 1-2 minutit. Steriliseerida autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit.

Autoklaavist lahkudes laske paar minutit seista ja jagada veel sooja steriilsetesse Petri tassidesse.

Laske plaatidel tahkuda ja pöörata ümber, tellida plaatides ja hoida külmkapis kuni kasutamiseni. Laske plaatidel enne nende kasutamist toatemperatuuril võtta.

Söötme pH peaks olema 6,4 ± 0,2. Mõned kommertsmajad soovitavad pH väärtust vahemikus 5,5 kuni 5,9.

Dehüdreeritud sööt on beež ja valmistatud tumedaks merevaiguks.

Nii veetustatud keskkonda kui ka ettevalmistatud plaate tuleb hoida temperatuuril 2–8 ° C.

Kasutamine

Agariplaadid M.R. neid võib külvata pinnale (väsimus või Drigalski spaatliga). Seda võib külvata ka sügavusega. Plaate tuleb inkubeerida 37 ° C juures mikroaerofiilses (4% O2 ja 5-10% CO2) 24 kuni 72 tundi.

Külvimeetod valitakse vastavalt taotletavale eesmärgile (isolatsioon või loendamine).

Kolooniate omadused

Lactobacillus'e eeldatavad kolooniad kasvavad valkelt ja neil on agaril limaskesta või kreemjas välimus. Siis peavad nad kindlaks tegema.

Piimhappebakterite eraldamine

Selleks kasutatakse pinna istutamist. Istutatavad proovid vajavad eelnevat protseduuri. 

Rinnapiima proovide puhul on soovitatav tsentrifuugida 1 ml proovi 14 000 rmp juures 10 minutit, et eemaldada rasvakiht. 900 μl visatakse ära ja ülejäänud 100 μl-s suspendeeritakse sade ja valatakse M.R. Siis tuleb see jaotada ühtlaselt Drigalski spaatliga.

Väljaheidete proovide puhul kaalutakse üks (1) väljaheide ja homogeniseeritakse 9 ml 0,1% steriilses peptoonitud vees, mis vastab 1/10 lahjendusele. Seejärel tehakse seerialahjendused, kuni saadakse lõplik lahjendus 10-4.

Lõpuks võetakse 100 μl lahjendusi 10-2, 10-3 ja 10-4 ja iga lahjendus külvatakse MRS agarile, jaotades ühtlaselt Drigalski spaatliga.

Piimhappebakterite loendamine

Sel juhul toimub külvamine sügavusel.

Rinnapiima proovide puhul võtke 1 ml ja asetage see steriilsesse koonilisse plastikust katseklaasi. MRS-agarit lisatakse temperatuuril umbes 40 ° C kuni lõppmahuni 25 ml, saades homogeense segu. Seejärel valatakse see ühtlaselt steriilsetesse Petri tassidesse ja lastakse seista kuni see polümeriseerub..

Lahjendused tehakse väljaheidete proovide jaoks, nagu eespool kirjeldatud. Võtke 1 ml iga lahjendust ja asetage steriilsesse koonilisse plastikust katseklaasi. Sulatatud MRS agar lisatakse 25 ml mahuni.

Iga lahjenduse segu valatakse ühtlaselt steriilsetesse Petri tassidesse. Lõpuks lasta seista kuni polümerisatsioonini.

Teadusuuringute tasandil

Iga päev muutub piimhappebakterite uurimine huvitavamaks; eelkõige uurijad püüavad teada saada, millised on uued tüved ja nende potentsiaal piimatoodete valmistamisel standardimise algatamiseks..

Selles mõttes Alvarado et al. (2007) kasutas M.R. viia läbi uuring, milles nad isoleerivad, tuvastasid ja iseloomustasid piimhappebaktereid, mis esinevad käsitööna suitsutatud Venezuela juustus.

Juustus leidsid nad perekondade Lactococcus ja Lactobacillus bakterite olemasolu ning jõudsid järeldusele, et isoleeritud tüvede segud on sobivad pastöriseeritud piimast valmistatud juustude valmistamiseks algse tüvedena..

Teisest küljest, Sánchez et al. (2017) kasutas M.R. agarit. uurida piimhappebakterite esinemist põrsaste seedetraktis, et kasutada neid natiivsete probiootikumidena, mis suurendavad tervete põrsaste tootlikkust.

Selle söötmega õnnestus neil eraldada neli liiki: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae ja Pediococcus pentosaceus.

Samamoodi, Báez et al. (2019) kasutas M.R. agarit. hinnata piimhappebaktereid (BAL) ja bifidobaktereid koos probiootilise potentsiaaliga imikute piimas ja väljaheites.

Nad suutsid isoleerida 11 BAL ja 3 Bifidobacteria sp rinnapiima ja 8 BAL ja 2 Bifidobacteria sp. väljaheites Kõik vastavad teatud parameetritele, mis akrediteerivad neid probiootilise aktiivsusega bakteritena.

Autorid jõudsid järeldusele, et nii rinnapiimaga kui ka ainult rinnaga toidetavate imikute rinnus on probiootiliste bakterite looduslikud allikad.

Kvaliteedikontroll

Hinnata M.R.S. kontrolltüvesid võib kasutada näiteks:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli ja Bacillus cereus.

Prognoositavad tulemused on rahuldavad kasv esimese 6 bakteri jaoks E. coli ja Bacillus cereus peab olema täielikult blokeeritud.

Viited

  1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Andide käsitsi valmistatud suitsutatud Venezuela juustu piimhappebakterite eraldamine, identifitseerimine ja iseloomustamine. Selle kasutamine stardikasvatusena. Teadlane (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Saadaval aadressil: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro piimhappebakterite eraldamine põrsaste seedetraktist. Rev. loomaarst. Peruu 2017; 28 (3): 730-736. Saadaval aadressil: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Piimhappebakterite ja Bifidobakterite hindamine probiootilise potentsiaaliga rinnapiimas ja imikute väljaheites Acevedo vallas, Miranda 2017. Bakalaureusekraadi saamiseks bakalaureuseõppes Bioanalüüs Carabobo ülikool, Venezuela.
  4. Briti labor M.R. agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  5. Wikipedia toetajad. MRS agar Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. jaanuar 2018, 19:44 UTC. Saadaval aadressil: wikipedia.org 17. veebruaril 2019.
  6. Roy D. Media piimatoodetes bifidobakterite eraldamiseks ja loendamiseks. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.