Agari LIA (lüsiin raua) vundament, valmistamine ja kasutamine

The LIA agar (Lüsiini raud) on biokeemiline test, mida kasutatakse Enterobacteriaceae perekonna bakterite tuvastamiseks. Selle kandja on loonud Edwards ja Fife, lähtudes Falkow'i valemist.

Algselt oli see test puljong, mis sisaldas peptoone, pärmiekstrakti, glükoosi, L-lüsiini, bromokresooli lilla ja destilleeritud vett. Edwards ja Fife lisasid agar-agarit, raud (II) ammooniumtsitraati ja naatriumtiosulfaati.

Test koosneb peamiselt ensüümi lüsiindekarboksülaasi olemasolu tõendamisest, mis on võimeline reageerima aminohappe L-lüsiini karboksüülrühmaga. Aminohappe deaminatsioon võib toimuda ka ensüümi lüsiindeaminaasi tõttu.

Lisaks võimaldab söötme koostis näidata mõnede bakteriaalsete perekondade võimet tekitada vesiniksulfiidi. Lõpuks on võimalik jälgida ka keskmist põlvkonda või mitte.

Indeks

• 1 Sihtasutus
  • 1.1 Peptoonid ja pärmiekstrakt
  • 1.2 Glükoos
  • 1,3 L-lüsiin
  • 1.4 pH indikaator (bromokresoollilla)
  • 1.5. Ammoonium-raudtsitraat ja naatriumtiosulfaat
• 2 Katse tõlgendamine
  • 2.1 Lüsiini dekarboksüülimine
  • 2.2 Lüsiini desamiinimine
  • 2.3 Vesiniksulfiidi tootmine (H2S)
• 3 Tulemuste salvestamine
• 4 Valmistamine
• 5 Kasutamine
• 6 Viited

Sihtasutus

Peptoonid ja pärmiekstrakt

Nagu enamik kultuurisöötmeid, sisaldab raua lüsiini agar komponente, mis tagavad bakterite kasvuks vajalike toitainete allika. Neid komponente esindavad peptioonid ja pärmiekstrakt.

Glükoos

Samuti sisaldab see agar fermenteeritavat süsivesiku glükoosi. On teada, et kõik Enterobacteriaceae perekonna bakterid fermenteerivad glükoosi.

See etapp on otsustava tähtsusega, sest see vastutab sööde hapestamise eest, mis on oluline tingimus ensüümi lüsiindekarboksülaasi, kui see on olemas, toimimiseks selle substraadil.

Mõnes bakterite perekonnas võib täheldada gaasi tootmist glükoosi kääritamise tõttu.

Gaasi tõestatakse siis, kui torus on agari nihkumine, jättes toru alumisse ruumi tühja ruumi või murdes keskkonda kahes või enamas osas..

L-lüsiin

Kui lüsiin on dekarboksüülitud, moodustub diamiin (kadaveriin) ja süsinikdioksiid.

Dekarboksüülimine toimub koensüümi püridoksaalfosfaadi juuresolekul. See reaktsioon on pöördumatu.

PH indikaator (bromokresoollilla)

Kõik pH muutused, mis ilmnesid söötmes erinevate reaktsioonide abil, tuvastatakse bromokresooli lilla pH indikaatoriga.

Selles mõttes muutub hapestumise korral keskkond kollaseks ja leeliselöögi korral taastub sööde algse lilla või lilla värvi juurde.

Kui lüsiini deaminatsioon toimub ensüümi lüsiindeaminaasi juuresolekul, moodustub pinnale pruunidele, Providenciale ja mõnedele Morganella liikidele tüüpiline punakas värvus.

See on tingitud asjaolust, et deaminatsiooni käigus moodustub alfa-keto-hape, mis reageerib ammooniumtsitraadiga hapniku juuresolekul, mis põhjustab ülalnimetatud värvi..

Ammoonium-raudtsitraat ja naatriumtiosulfaat

Teisest küljest tõestavad vesiniksulfiidi tootvad bakterid naatriumtiosulfaadi (väävli allikas) ja raudmoniumtsitraadi olemasolu, mis on H-i arendaja.₂S.

Tiosulfaadi reduktaasi ensüümiga bakteritel on võime toimida, vähendades olemasolevat naatriumtiosulfaati, moodustades sulfiti ja vesiniksulfiidi (H₂S).

Viimane on värvitu gaas, kuid kui see reageerib raudsoolaga, moodustab see metallilise raudsulfiidi, mis on lahustumatu ühend (nähtav must sade)..

Kuid H-i moodustumise võime₂Selle söötmega S ei ole väga usaldusväärne, sest mõned negatiivsed lüsiindekarboksülaasi bakterid, mis on võimelised tootma H₂S ei moodusta musta sadet, sest sööde happesus häirib. Seetõttu on soovitatav kontrollida teiste raua sisaldavate vahenditega.

Katse tõlgendamine

Lüsiini dekarboksüülimine

Torud tuleb lugeda pärast 24-tunnist inkubeerimisperioodi lõppu, vastasel juhul tekib oht, et reaktsioon on valesti tõlgendatud, teatades valest negatiivsest..

Tuleb meeles pidada, et esimene reaktsioon, mis tekib, on glükoosi kääritamine, mistõttu kõik 10 kuni 12 tunni pärast olevad torud muutuvad kollaseks.

Kui inkubatsiooniperioodi (24 tundi) lõpus täheldatakse lilla või lilla pinnaga kollast tausta, on reaktsioon negatiivne. Pinna lilla värvus vastab söötme leeliselisusele peptoonide kasutamisega.

Positiivne reaktsioon on selline, milles toru põhja ja pind on täiesti lilla, see tähendab, et ta naaseb algse värvini.

Seega, kes määrab testi positiivsuse, on sööde alus või põhi. Kui teil on värvi suhtes kahtlusi, saate seda võrrelda inokuleerimata LIA tuubiga.

Lüsiini desamiinimine

Torul, mis näitab lüsiini deaminatsiooni, on punakaspruun pind ja kollane taust (hape) või kogu punakaspruun toru..

Seda reaktsiooni tõlgendatakse kui lüsiini dekarboksüülimise negatiivset, kuid lüsiini deaminatsiooni suhtes positiivset..

See reaktsioon on defineeritud ja tõlgendatud kaldpinnal.

Vesiniksulfiidi tootmine (H₂S)

Positiivset reaktsiooni täheldatakse musta sademe ilmnemisel kogu söötmes või selle osas. Üldiselt kaldpinna ja aluse vahel.

Kui sade tekib kogu katseklaasis, ei näita see teisi söötmes esinevaid reaktsioone.

Tulemuste registreerimine

Katse tõlgendamisel registreeritakse tulemused järgmiselt:

Kõigepealt lugege kaldu, siis põhja või taco, seejärel H₂S ja lõpuks gaasi tootmine.

Näide: K / A + (-). See tähendab:

• K: leeliseline raam (lilla)
• A: happe (kollane) taust, st negatiivne dekarboksüülimisreaktsioon ja negatiivne deaminatsioon.
• +: Vesiniksulfiidi tootmine
• (-): Ilma gaasita.

Ettevalmistus

Kaaluge 35 g lüsiini agari veetustatud rauda ja lahustage 1 liitris destilleeritud vees.

Kuumutage, kuni agar on täielikult lahustunud, nii et keetke seda mõneks minutiks segamiseks. Jaotage 4 ml söödet 13/100 katseklaasis puuvillase kaanega.

Steriliseerida autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit. Eemaldage autoklaavist ja laske libisema kaldu nii, et seal on sügav alus ja lühike kaldpind.

Hoida külmkapis 2-8 ° C. Laske enne bakteritüve istutamist tuimastada.

Dehüdraaditud söötme värvus on beež ja keskkond on punakaspunane.

Valmistatud söötme lõplik pH on 6,7 ± 0,2.

Sööde muutub kollaseks, pH on võrdne või väiksem kui 5,2 ja purpurne pH 6,5 juures.

Kasutamine

Seda testi koos teiste biokeemiliste testidega kasutatakse Enterobacteriaceae perekonna batsillide identifitseerimiseks..

Sööde külvatakse sirge silmusega või nõelaga, üks või kaks lööki tehakse toru põhja ja seejärel sööde pind on siksakitud.

Seda inkubeeritakse 24 tundi 35-37 ° C juures aerobioosis. Vajadusel jäetakse see inkubeerima veel 24 tundi.

Peamiselt on kasulik eristada negatiivseid Citrobacteri laktoosi liike Salmonellas sp.

Viited

1. Mac Faddin J. (2003). Biokeemilised testid kliinilise tähtsusega bakterite identifitseerimiseks. 3. ed. Toimetus Panamericana. Buenos Aires Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
4. Laboratooriumid Britania. Lüsiini rauagar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
5. BD laboratooriumid BBL lüsiini rauagar kaldub. 2007. Saadaval aadressil: bd.com
6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Saadaval aadressil: andinamedica.com