Agar Hektoeni vundament, valmistamine ja kasutamine



The Hektoeni agar või enteeriline Hektoeni agar on tahke, selektiivne ja diferentsiaalne söötmevesi. See loodi Hektoeni Instituudis kuningas ja Metzgeris perekondade Shigella ja Salmonella enteropatogeensete bakterite isoleerimiseks..

Sööde koosneb proteoosi peptoonist, pärmiekstraktist, sapphappe sooladest, laktoosist, sahharoosist, salitsiinist, naatriumtiosulfaadist, naatriumkloriidist, raudtsitraadist, ammooniumtsitraadist, bromotümoolsinisest, happe fuksiinist ja agarist. See formulatsioon võimaldab eristada perekonda Shigella ja Salmonella ülejäänud bakteritest, mis on võimelised kasvama selles söötmes.

Kuigi on olemas ka teisi vahendeid, millel on sama funktsioon nagu Hektoeni agaril, on see võrreldes teiste vahenditega suurem eelis, eriti kui soovid Shigella liigid taastada.

Mõlema perekonna liigid põhjustavad inimestel raskeid seedetrakti probleeme, mis on tingitud saastunud toidu tarbimisest; seetõttu on ülekanne väljaheide - suukaudne. Seetõttu on Hektoeni agari kasutamine peamiselt näidustatud väljaheite ja toidu proovide mikrobioloogilises analüüsis..

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutage
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Piirangud
  • 6 Viited

Sihtasutus

Hektoeni agar sisaldab toitainete allikana peptoone ja pärmiekstrakti, mis on mikroobide arengu põhielemendid..

Kuid sellel on ka sapphappe soolad, mis pärsivad mõne bakteri, eriti grampositiivse ja mõne grammi negatiivse kasvu kasvu. Sel põhjusel peetakse seda selektiivseks keskkonnaks.

Teisest küljest on Hektoeni agar diferentsiaalne keskkond. See omadus tuleneb kääritatavate süsivesikute, nagu laktoos, sahharora ja salitsiin, esinemisest koos pH indikaatorisüsteemiga, mida esindab bromümolooli sinine ja happe fuksiin..

Kõik bakterid, mis on võimelised kasvama selles söötmes, mis ei kuulu perekonda Salmonella ja Shigella, arenevad lõhe- või oranžikolooniad, välja arvatud perekond Proteus. See on tingitud ühe või mitme olemasoleva süsivesiku fermentatsioonist, mis hapestab söödet, mis põhjustab pH indikaatori pöördumist.

Omalt poolt ei suuda perekond Shigella ja Salmonella fermenteerida mingeid olemasolevaid süsivesikuid, kasutades energiaallikana ainult peptoone, mis leelistavad keskkonda ja seetõttu selle kolooniad on sinised-rohelised.

Samuti võib selles söötmes eristada baktereid, mis on võimelised moodustama vesiniksulfiidi (värvitu gaas). Naatriumtiosulfaat toimib väävli allikana, samas kui raua tsitraat on paljastav vahend. Mõlemad ühendid võimaldavad moodustada raua sulfiidi musta sademe, mis näitab reaktsiooni.

Must sade koloonia keskel, millel on läbipaistev halo, annab kala silma. See omadus viitab perekonna Salmonella esinemisele.

Lõpuks säilitab naatriumkloriid osmootse tasakaalu ja agar annab söötmele tahke konsistentsi.

Ettevalmistus

Kaalutakse 76 g veetustatud söödet ja lahustatakse ühe liitri destilleeritud vees. Loksutage segu intensiivselt ja laske seejärel 10–15 minutit seista. Seda saab kuumutada ja keeta, andes pöörlevatele liikumistele kuni selle täieliku lahustumiseni. Seda söödet ei autoklaavita.

Kui söötme temperatuur on ligikaudu 45 ° C, valatakse 20 ml maht otse steriilsetesse Petri tassidesse..

Agaril lastakse tahkuda. Tol ajal on nad valmis kasutamiseks. Soovitatav on neid kohe kasutada. Kui need ei ole võimalikud, tuleb neid hoida külmkapis kuni nende kasutamiseni.

Enne istutamist toatemperatuurini tuleb plaadid külmkapist varakult eemaldada.

Söötme pH peaks olema 7,5 ± 0,2. Dehüdreeritud söötme värvus on lilla ja valmis on pruunikasroheline.

Kasutage

Hektoeni agari kasutamine on soovitatav perekonna Shigella ja Salmonella bakterite otsimiseks väljaheites ja toidu proovides..

Nende bakterite isoleerimise võimalus on oluliselt suurenenud, kui proovi on varem rikastatud spetsiaalsete puljongitega, nagu seleniidi puljong, seleniidi tsüstiinipuljong, tetrationaadi puljong jne..

Inokulaat peab olema tugev ja külvamine toimub kihi abil. Plaate inkubeeritakse 37 ° C juures 24 kuni 48 tundi aerobioosis.

Inkubeerimist soovitatakse 48 tunni jooksul, sest kolooniate omadused on nende tõlgendamise ja diferentseerumise jaoks selged.

Kvaliteedikontroll

Selle söötme kvaliteedikontrolli teostamiseks kasutatakse sertifitseeritud bakteritüvesid, näiteks: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ja Shigella sonnei ATCC 25931.

Oodatavad tulemused on järgmised: Salmonella typhimurium ja  Salmonella enteritidis nad peavad arendama rohelise sinise kolooniaid musta keskusega või ilma. Shigella liigid kasvavad sinise rohelise kolooniana.

Võite lisada ka tüved Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Sellistel juhtudel on täheldatud omadused järgmised: E. coli ja K. pneumoniae Selles keskkonnas arenevad nad lõhe-oranži kolooniad, mille ümber on sama värvi sade. Vahepeal arendab Proteus sinise rohelise kolooniaid musta keskusega või ilma.

Kuigi S. aureus ja  E. faecalis tuleb mõnikord pärssida E. faecalis õnnestub kasvada kollaste kolooniatena, väga väike.

Teisest küljest, kuna seda söödet ei steriliseerita autoklaavis, on oluline hinnata söötme steriilsust. Seetõttu tuleb iga valmistatud partiid inkubeerida üks kuni kaks plaati ilma inokuleerimiseta 37 ° C juures 24 tundi aerobioosis..

Ilmselt eeldatakse, et plaadil ei ole mingit kasvu.

Piirangud

-Proteuse liigid võivad selles keskkonnas areneda ja nende kolooniate omadusi võib segada Salmonella või Shigella liikidega. Seetõttu tuleb kõik kahtlased kolooniad kinnitada biokeemiliste testidega.

-Selle söötme kasutamist on vaja kaasata teiste vähem selektiivsete agaritega, sest kui soovitud mikroorganism on väike kontsentratsioon, ei pruugi see selles söötmes areneda..

-Ärge soojendage selle valmistamise ajal ülekuumenemist, kuna ülemäärane kuumus muudab söötme koostist.

-Ebatavaliselt laktoosiga fermenteerivad Salmonella kolooniad võivad tunduda tähelepanuta.

Viited

  1. Wikipedia toetajad. Hektoeni enteraalne agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. märts 2019, 23:38 UTC. Saadaval aadressil: .wikipedia.org / 16. märtsil 2019.
  2. BD laboratooriumid BD Hektoeni enteraalne agar (HE Agar). 2013. Saadaval aadressil: bd.com
  3. Laboratooriumid Britania. Hektoeni enteraalne agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoeni agar. Saadaval aadressil: f-soria.es
  5. Difco & BBL käsiraamat, Hektoen Enteric Agar. 2. väljaanne. Saadaval: bd.com/europe