Agar Endo vundament, ettevalmistamine ja kasutamine



The Endo agar või keskkond Endo on kindla selektiivsusega tahke, diferentsiaalne kultiveerimissööt. Algne valem loodi Endo poolt 1904. aastal, et eristada laktoosiga kääritavaid baktereid mitte-käärivatest bakteritest. Alguses oli see mõeldud isoleerimiseks Salmonella typhi, kuid hiljem pöördus meedia eesmärk kolibakterite otsingule.

Endo agari põhimõte on säilinud, kuid selle koostises on aastate jooksul toimunud palju muutusi. Praegu koosneb söötmest peptiidiga lagundatud loomkuded, laktoos, dikaliumvesinikfosfaat, naatriumsulfit, põhifuksiin ja agar..

Söötme peamine kasutusala on seotud Enterobacteriaceae sugukonda kuuluvate gramnegatiivsete batsillide ja teiste lähedaste perede eraldamisega ja diferentseerumisega..

Pikka aega kasutati seda kolibakterite avastamiseks vee-, piima- ja toiduproovides, kuid tänapäeval on selle söötme kasutamine teiste poolt sarnaste funktsioonidega ümber paigutatud. Siiski kasutavad mõned mikrobioloogia laborid seda agarit Enterobacteriaceae isoleerimiseks kliinilise päritoluga proovidest.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Agari m-Endo variant
  • 3 Kasutage
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Piirangud
  • 6 Viited

Sihtasutus

Endo agar sisaldab peptoone, mis toimivad aminohapete, lämmastiku, süsiniku ja energia allikana, mis on vajalik soovimatute mikroorganismide kasvuks.

Teisest küljest on agari veidi selektiivne iseloomulik naatriumsulfiti ja põhifuksiini lisamine; mõlemad komponendid inhibeerivad osaliselt või täielikult enamiku grampositiivsete bakterite arengut.

Diferentseeritud iseloomu annab fermenteeritava süsivesiku olemasolu, mis antud juhul on laktoos ja põhifuksiin, mis toimib ka pH indikaatorina..

Gramnegatiivsed bakterid, mis kasvavad sellel agaril ja suudavad fermenteerida laktoosi, moodustavad tugevad roosad kolooniad; on. \ t Escherichia coli tumepunaste kolooniate moodustumine rohelise metallist sära iriseeriva värviga. Selle põhjuseks on süsivesikute kääritamisel tekkivate hapete suur tootmine.

Tuleb märkida, et kolooniate ümber olev keskkond muutub samuti tugevaks roosaks. Kuigi laktoosi mittekäärivad gramnegatiivsed bakterid moodustavad kahvaturoosa kolooniad, mis on sarnased keskmise või värvitu värvusega.

Dikaliumvesinikfosfaat tasakaalustab söötme pH ja agar on komponent, mis tagab tahke konsistentsi.

Ettevalmistus

Endo Agar

Kaalutakse 41,5 g veetustatud keskkonda ja lahustatakse 1 liitris destilleeritud vees. Kuumutage segu sageli segades, kuni sööde on täielikult lahustunud. Steriliseerige autoklaavis temperatuuril 121 ° C 15 lb rõhul 15 minutit.

Autoklaavist eemaldamisel lastakse jahtuda temperatuurini umbes 45-50 ° C, loksutage segu enne serveerimist homogeniseerimiseks. Vala 20 ml steriilsetesse Petri tassidesse.

Laske plaatidel enne külmkapis säilitamist tahkuda, pöörata ümber ja hoida karbis või mähkida tumeda paberiga. On väga oluline kaitsta ettevalmistatud keskkonda otsese valguse eest. Soovitatav on valmistada ette täpne summa, mida vajatakse.

Kui neid hoitakse külmkapis, tuleb plaate enne kasutamist soojendada.

Söötme pH peaks olema vahemikus 7,2-7,6 ja ettevalmistatud söötme värvus on kahvaturoosa..

Variant agar m-Endo

Endo agaril (m-Endo) on veel üks versioon, mis järgib McCarthy, Delaney ja Grasso valemit, mis sisaldab rohkem ühendeid ja varieerub valmistamisviisi poolest..

See variant sisaldab: laktoosi, triptoosi, kaseiini ensümaatilist lagundamist, loomsete kudede ensümaatilist lagundamist, naatriumkloriidi, kahealuselist kaaliumfosfaati, naatriumsulfiiti, pärmiekstrakti, kaaliumfosfaati, ühealuselist fosfiini, naatriumdoksükolaati, laurüülsulfaati naatriumi ja agarit.

Sel juhul kaalutakse 51 g veetustatud söödet ja suspendeeritakse see 1 liitris destilleeritud vees, mis sisaldab 20 ml etanooli..

Kuumutage veidi segades, kuni sööt on täielikult lahustunud. Mitte üle kuumeneda ega steriliseerida autoklaavis. Kui segu on homogeenne, toimige steriilsetes Petri tassides ja lastakse tahkestuda.

Kasutage

Mõnes riigis kasutatakse seda veel kogu- ja fekaalse kolibakterite loendamiseks vee- ja toiduproovides, eriti \ t Escherichia coli väljaheidete peamise näitajana.

D-desinfitseerimis- ja reoveepuhastusprogrammide jälgimiseks ja kontrollimiseks ning joogivee kvaliteedi hindamiseks soovitab Ameerika rahvatervise ühing (APHA) M-Endo agarit..

Kõige kasutatavam meetod on membraanfiltreerimine pärast proovi rikastamist Laurüülsulfaadi puljongiga 2 kuni 4 tundi..

Seda võib kasutada ka EMB agari asendamiseks toidu ja vee mikrobioloogilises analüüsis kõige tõenäolisema arvutusmeetodiga (NMP), täpsemalt täielikus kinnitusfaasis, et kinnitada selle olemasolu. E. coli hägune EÜ puljong.

Kvaliteedikontroll

Valmistatud Endo agari partii kvaliteedi hindamiseks külvatakse tuntud või sertifitseeritud kontrolltüved.

Selleks otstarbeks kasutatavate tüvede hulgas on: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 ja Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Tüved külvatakse ammendumise teel ja inkubeeritakse 37 ° C juures 24 tundi aerobioosis.

Oodatavad tulemused on:

  • Et Escherichia coli: kolooniad tugev punane, metallist sära.
  • Et E. cloacae ja K. pneumoniae kolooniad peaksid olema roosad limaskestad.
  • S puhul. typhimurium, S. flexneri ja P. mirabilis kolooniad on tavaliselt kahvatu roosa või värvitu.
  • Lõpuks, E. faecalis eeldatavasti on see osaliselt inhibeeritud, mistõttu selle kasv peaks olema halb, väga väikeste tugeva roosade kolooniatega.

Piirangud

-Endo keskkonnas on madal selektiivne võimsus, mistõttu on võimalik, et mõned grampositiivsed mikroorganismid nagu Staphylococcus, Enterococcus ja isegi pärmid võivad kasvada.

-Teised bakterid, mis ei kuulu Enterobacteriaceae perekonda, võivad areneda sellises keskkonnas nagu näiteks Pseudomonas sp ja Aeromonas sp. Nende tüvede omadused on värvitu, ebakorrapärased kolooniad.

-Valmistatud keskkond on väga tundlik valguse suhtes, mistõttu pikaajaline kokkupuude sellega halvendab indikaatorisüsteemi, kahjustades pöördumatult keskkonda.

-Söötme komponente peetakse kantserogeenseks, mistõttu tuleb vältida otsest kontakti.

-Dehüdreeritud keskkond on väga hügroskoopne ja seda tuleb hoida originaalpakendis toatemperatuuril, tihedalt suletuna ja kuivas keskkonnas..

Viited

  1. BD laboratooriumid Endo Agar. 2013. Saadaval aadressil: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, vaba entsüklopeedia. 7 september 2017, 08:27 UTC. 28. veebruar 2019, 22:55. Saadaval: en.wikipedia.
  4. MercK labor. Endo agar 2019. Saadaval aadressil: merckmillipore.com
  5. Laborite tehniline leht. M -Endo Agar LES. 2015. Saadaval aadressil: liofilchem.net