Agari EMB vundament, ettevalmistamine ja kasutamine



The EMB agar on selektiivne ja diferentsiaalne tahke kultiveerimiskeskkond, mida kasutatakse gramnegatiivsete bakterite, peamiselt Enterobacteriaceae perekonna ja teiste mittevajalike gramnegatiivsete batsillide eraldamiseks. Seda tuntakse ka lühendiga EAM, mis tähendab eosiin-metüleensinist.

Selle kandja on loonud Holt-Harris ja Teague 1916. aastal. See sisaldab peptooni, laktoosi, sahharoosi, dikaliumfosfaati, agarit, eosiini, metüleensinist ja vett. See on väga sarnane MacConkey agariga, eriti kui kasutatakse Levine'i poolt modifitseeritud EMB agarit, mis ei sisalda sahharoosi.

Tegelikult otsustab iga labor, kas see töötab ühe või teise, sest nad täidavad sama funktsiooni, kuigi biokeemiliselt on nad erinevad.

Sellel on isegi sama puudus kui klassikalise MacConkey agariga, mis on seotud perekonna Proteus sigimisega. Selle nähtuse vältimiseks saate agari kontsentratsiooni suurendada kuni 5%..

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Selektiivne
    • 1.2 Diferentsiaal
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutamine
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Lõplikud kaalutlused
  • 6 Viited

Sihtasutus

Selektiivne

EMB agar on delikaatselt selektiivne, kuna see sisaldab aniliinvärve (eosiin ja metüleensinine), mis toimivad inhibiitoritena, takistades enamiku grampositiivsete bakterite ja mõnede nõudlike gramnegatiivsete bakterite kasvu..

Kuid sellel agaril on puudus, et mõned Gram-positiivsed bakterid võivad takistada inhibeerivate ainete olemasolu ja kasvavad väikeste värvitu punktide kujuliste kolooniatena, nagu näiteks Enterococcus faecalis ja mõned Staphylococcus.

Võite kasvatada ka teatud pärmi, näiteks Candida albicans'i kompleks, See annab väga väikesed roosad kolooniad. Sellest pärmist saab välja töötada isegi klamüüdosporid, kui proovi külvatakse sügavuti.

Diferentsiaal

Teisest küljest on EMB agar ka diferentsiaalne keskkond, kuna need värvained koos (eosiin ja metüleensinine) omavad happe pH-s sademe moodustumist, mistõttu need toimivad nende valmistamise indikaatoritena..

Seetõttu toodavad nõrgalt fermenteerivad laktoosi- või sahharoosbakterid lilla kolooniad 24 kuni 48 tunni jooksul. Näiteks perekonnad Klebsiella, Enterobacter ja Serratia.

Need bakterid, mis tugevalt fermenteerivad laktoosi, näiteks Escherichia coli, või sahharoos, nagu Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, moodustavad rohekas-musta sademe, andes nendele liikidele metallist sära.

Tuleb märkida, et kui kasutatakse EMB leviini söödet (ilma sahharoosita), Yersinia enterocolitica ja Proteus penneri nad toodavad läbipaistvaid kolooniaid.

Baktereid, mis ei fermenteeri laktoosi või sahharoosi, toidavad peptiidide olemasolu, mis annavad bakterite arenguks vajalikke aminohappeid ja lämmastikku ning toodavad läbipaistvaid kolooniaid. Näiteks Salmonella ja Shigella perekonnad.

Samuti on oluline märkida, et perekonnast Acinetobacter saab esitada lavendli sinise kolooniaid, kuigi see ei ole laktoosi ega sahharoosi kääritaja, kuid neil on omadus kinnitada oma rakuseinas metüleensinine. See võib juhtuda ka teiste oksüdatiivsete bakterite puhul.

Ettevalmistus

Algne veetustatud keskkond on kerge beež.

Selle söötme valmistamiseks kaalutakse 36 grammi veetustatud söödet ja suspendeeritakse viaalis, mis sisaldab ühte liitrit destilleeritud vett..

Pärast segu lahkumist 5 minutit puhata, viia fiola soojusallikasse, segades jõuliselt ja pidevalt, kuni see keeb ja on täielikult lahustunud..

Seejärel steriliseeritakse lahustunud kultuurisöötmega autoklaav 121 ° C juures 15 minutit.

Aja möödudes eemaldatakse see autoklaavist ja jäetakse lühikesteks. Seejärel serveeritakse igas steriilses Petri tassis isegi kuuma (45 - 50 ° C) 15-20 ml agarit. Kandja peaks olema sinine lakmus.

Pärast plaatide serveerimist jäetakse kergelt katmata, kuni agar veidi jahtub. Siis need kaetakse ja lastakse täielikult tahkestuda. Hiljem tellitakse need ümberpööratud tahvlite hoidikusse ja säilitatakse külmkapis (8 ° C) kuni nende kasutamiseni.

See protseduur viiakse eelistatult läbi laminaarses voolikus või Bunseni põleti ees, et vältida saastumist.

Oluline on meeles pidada, et iga kommertsmaja näitab kultiveerimiskeskkonna valmistamiseks kaalutavat kogust.

Söötme lõplik pH peaks olema 7,2 ± 0,2

Kasutamine

Seda söödet kasutatakse uriini ja väljaheidete või mis tahes kliiniliste proovide külvamiseks, eriti kui kahtlustatakse nõutavate gramnegatiivsete bakterite olemasolu, nagu Enterobacteriaceae sugukonda kuuluvad batsillid, mis kasvavad väga hästi selles söötmes.

Shigella ja Salmonella perekondade enteropatogeensed bakterid eristuvad värvitu või kergelt merevaigukollektiivi järgi..

Samuti kasvavad ka muud kääritamata laktoosbatsillid, nagu näiteks Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Samuti on see keskkond väga kasulik toidu ja vee mikrobioloogiliseks analüüsiks, kuna see sobib ideaalselt kolibakterite määramise täieliku kinnitava faasi jaoks, st selleks, et kinnitada selle olemasolu. E. coli hägusast EÜ puljongist, kõige tõenäolisemast arvutusmeetodist (NMP).

Kvaliteedikontroll

Selleks, et kontrollida, kas äsja kultiveeritud söötme toimib hästi, võib kolooniate omaduste jälgimiseks istutada kontrolltüvesid ja veenduda, et nad annavad nii nagu oodatud.

Selleks, ATCC tüved või hästi identifitseeritud tüved E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ja mõned Gram-positiivsed bakterid, nagu S. aureus.

Eeldatakse, et E. coli Loo hästi arenenud sinakas-must kolooniad rohelise metallist läikega. Niikaua kui, Enterobacter aerogenes ja Klebsiella sp nad peavad andma hästi arenenud limaskesta kolooniad sinakas-mustaks.

Omalt poolt, Salmonella typhimurium ja Shigella flexneri, nad peavad välja töötama suured kolooniad, värvitu või kergelt kollase värvusega.

Lõpuks žanr Pseudomonas aeruginosa see kasvab ebakorrapärase suurusega värvitu kolooniatena, samas kui grampositiivsed bakterid peavad olema väga väikeste kolooniatega täielikult inhibeeritud või kasvama säästlikult.

Lõplikud kaalutlused

Mõnikord põhjustab steriliseerimine metüleensinise vähenemise, täheldades oranži söödet. Selleks, et metüleensinine oksüdeeruks ja lilla värvus taastuks, tuleb seda õrnalt segada kuni värvi taastumiseni.

Samuti võib pärast steriliseerimist värvainet sadestada, nii et see tuleb enne Petri tassi serveerimist hästi segada.

Viited

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. 2009. Toidu mikrobioloogilise analüüsi meetodid. 2nd ed. Keemiainstituut, UNAM. Mehhiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Tüvede iseloomustus ja jaotus Escherichia coli Võimalikud patogeensed kodulinnukasvatuse kanaliha broilerite isolaadid Peruus. Rev. loomaarst. Peruu 2012 23 (2): 209-219. Saadaval aadressil: scielo.org.
  3. Laboratooriumid Conda S.A. Eosiini agar ja metüleensinine. 2010. Saadaval aadressil: condalab.com
  4. Laboratooriumid Britania. Levine E.M.B (koos Eosini ja metüleensinistega) 2011. Saadaval aadressil: britanialab.com
  5. BD laboratooriumid BD EMB agar (Eosiin-metüleensinine agar), modifitseeritud. 2013. Saadaval aadressil: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. (5. väljaanne). Argentina, Redaktsioon Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scotti mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja