Agaril on standardne alus, ettevalmistus ja kasutusalad



The standardne agar on tahke, mitteselektiivne söötmik, mis on ette nähtud joogivee, reovee, piimajookide proovides esineva aeroobse mikroobikoormuse kvantifitseerimiseks muude toiduainete hulgas. Seda söödet tuntakse ka PCA agarina akronüümina inglise keeles Plate Count Agar. See loodi 1953. aastal Buchbinder, Baris ja Goldstein.

Standardne agar-keskkond koosneb pärmiekstraktist, tripteiinist, glükoosist, agarist ja destilleeritud veest. See koostis sisaldab põhilisi toitumisalaseid elemente, mis võimaldavad arendada praegust aeroobset mikroobkoormust, mis ei ole nõudlik.

Kuna sööde ei sisalda inhibiitoreid, võivad bakterid areneda ilma piiranguteta, seega on see ideaalne üldiste kolooniate arvu jaoks. Plaadi kvantifitseerimise meetod ei tuvasta siiski kõiki olemasolevaid baktereid, vaid ainult neid, mis on võimelised kasvama keskkonnatingimustes, millele standardne külvatud agar allutatakse..

Selles mõttes püütakse plaadi kvantifitseerimismeetodil üldjuhul määrata aeroobse mesofiilse tüüpi bakterite kogus, st need, mis arenevad temperatuuril vahemikus 25 kuni 40 ° C, optimaalse temperatuuri juures 37 ° C juures..

See bakterirühm on väga oluline, sest inimesel on enamik patogeensetest bakteritest.

Tuleb märkida, et mõnikord võib olla mõttekas kvantifitseerida toidus esinevate psührofiilsete bakterite kogus. Need bakterid on need, mis arenevad madalatel temperatuuridel (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Samuti võivad teatud tüüpi toiduainetes, näiteks konserveeritud, olla olulised termofiilsed bakterid, mis arenevad vahemikus 50 ° C kuni 80 ° C või rohkem..

Mikroobide kvantifitseerimist väljendatakse kolooniat moodustavates ühikutes (CFU) grammi või proovi milliliitri kohta.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 Plaadi valamise tehnikale
    • 2.2 Pinna istutamiseks
  • 3 Kasutage
    • 3.1 Plaadi valamise tehnika (külvatud sügavuse järgi)
    • 3.2 Pinnale külvatud tehnika
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Piirangud
  • 6 Viited

Sihtasutus

Standardne loenduskeskkond on konstrueeritud selliselt, et see võimaldaks rahuldavalt areneda nõudmatuid aeroobseid baktereid, kuna pärmiekstrakt, tripheiin ja glükoos tagavad vajaliku toitainete hea mikroobide arenguks.

Teisest küljest on kandjal selge värv ja läbipaistev välimus, mistõttu sobib see ideaalselt sügava külvamise meetodil arenenud kolooniate kuvamiseks (plaadile valamine)..

Samuti on võimalik arvutada kolooniad Drigalski spaatliga pinnal külvamise meetodil.

Kui mikroobne koormus on kõrge, tuleb CFU-de loendamiseks teha uuritava proovi kümnendlahjendused.

Tuleb märkida, et seda meediat soovitab Ameerika rahvatervise assotsiatsioon (APHA) aeroobsete mesofiilide loendamiseks..

Ettevalmistus

Kaaluge 23,5 g veetustatud keskkonda ja lahustage 1 liitris destilleeritud vees. Segu täielikuks lahustamiseks tuleb kuumutamist sageli kuumutada, kuni see keeb. Alljärgnevad sammud sõltuvad kasutatavast külvimistehnikast.

Plaadi valamise tehnika jaoks

Jaotage 12–15 ml katseklaasidesse. Seejärel steriliseeritakse autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit. Laske vertikaalselt ploki kujul tahkestuda. Hoida külmkapis kuni kasutamiseni.

Sulatage kiht, kui seda kasutatakse. Pärast sulatamist hoidke proovide ettevalmistamisel veevannis 44-47 ° C juures.

Pinnale istutamiseks

Söötme steriliseerimine autoklaavis temperatuuril 121 ° C ja seejärel jaotatakse 20 ml steriilsetesse Petri tassidesse. Laske enne kasutamist tahkestuda, pöörata ja hoida külmkapis.

Enne kasutamist seadistage plaadid. Söötme pH peaks olema 7,0 ± 0,2.

Kasutage

Agari standardarvu kasutatakse vee ja toidu mikrobioloogilise analüüsi ajal aeroobse mesofiilide arvu määramise meetodil. Aeroobsete mesofiilide loendamine on vajalik, kuna see määrab uuritava proovi sanitaar kvaliteedi.

Selle meetodi rakendamine (kasutades seda söödet) võimaldab isoleeritud kolooniate makroskoopilist visualiseerimist nende kvantifitseerimiseks.

Tahvli valamise tehnika (külvatud sügavuse järgi)

-Menetlus

Meetod koosneb järgmisest:

1) Proov homogeniseeritakse olemasolevate bakterite ümberjaotamiseks.

2) Esmane suspensioon viiakse läbi steriilses viaalis või kotis, võttes arvesse 10 g või 10 ml proovi suhet 90 ml lahjendisse (10-1).

3) Esialgsest suspensioonist tehakse vastavad kümnendlahjendused sõltuvalt proovi tüübist. Näide: (10-2, 10-3, 10-4). Lahjendused tehakse peptioonvee või fosfaatpuhvriga.

Selleks võtke 1 ml algsuspensiooni ja pange 9 ml lahjendisse, vajadusel jätkake lahjendusi, võttes nüüd 1 ml lahjendust.-2 ja nii edasi.

4) Võtke 1 ml igast lahjendusest ja pange tühjadesse steriilsetesse Petri tassidesse.

5) Lisage igale plaadile 12–15 ml eelnevalt sulatatud ja 44–47 ° C juures seatud standardarvu agarit.

6) Andke plaatidele siledad pöörlevad liikumised, et jaotada proov agarile ühtlaselt ja lasta tahkestuda.

7) Plaate pöörata ja inkubeerida temperatuuril 37 ° C aerobiosis 24 kuni 48 tundi.

8) Kui aeg on lõppenud, jätkake plaatide uurimist ja loendage kolooniad lahjenduses, mis seda võimaldab. See valitakse nende plaatide loendamiseks, millel on vahemikus 30 kuni 300 CFU.

Loendust saab teha käsitsi või kasutada koloonia loenduriseadet.

Lubatud väärtused proovi milliliitri kohta võivad riigiti erineda vastavalt nende normidele.

-UFC arvutamine

Üldine arvutus tehakse järgmise valemi abil:

Väljendada tulemused 1 või 2 numbriga, korrutades vastava alusega 10. Näide: kui tulemus on 16,545, ümardatakse see kolmanda numbri põhjal 17.000 ja väljendatakse järgmiselt: 1,7 x 104. Kui tulemus oleks 16,436, ümardatakse see 16 000-ni ja väljendatakse 1,6 x 104.

Pinnale istutatud tehnika

-Menetlus

-Inokuleerige 0,1 ml otsenäidist, kui see on vedelik, esialgne suspensioon 10-1 või järjestikustest lahjendustest 10-2, 10-3 jne standardse agariplaadi keskel.

-Proov jaotatakse ühtlaselt Drigalski spaatliga või L-kujulise klaasvardaga, lastakse seista 10 minutit.

-Pöörake plaate tagasi ja inkubeerige aerobiosis temperatuuril 37 ° C 24 kuni 48 tundi.

-Jätkake kolooniate loendamist, vali need plaadid, mis jäävad vahemikku 20-250 CFU.

-UFC arvutamine

Arvutamisel kasutatakse lahjendustegurit, mis on pöördvõrdeline. Arv on ümardatud 2 olulise numbriga (ümardamine vastavalt kolmandale numbrile) ja väljendatakse 10 baasvõimsusena, näiteks kui proovis lahjendatakse 224 CFU (10-1), Teatatakse 22 x 101  UFC, kuid kui see arv on 225, siis teatatakse sellest 23 x 101 UFC.

Nüüd, kui sa loendad 199 CFU lahjenduses 10-3, Esitatakse 20 x 104 UFC, kuid kui samal lahjendusel loendatakse 153 CFU, teatatakse 15 x 104 UFC.

Kvaliteedikontroll

Standardse loenduskultuuri söödet võib hinnata tuntud sertifitseeritud tüvedega, näiteks: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Kui kultiveerimiskeskkond on optimaalsetes tingimustes, on kõigil juhtudel oodata rahuldavat kasvu, välja arvatud L. fermentum see võib olla regulaarne.

Kultuurikeskkonna steriilsuse hindamiseks tuleks iga ettevalmistatud partii ühte või kahte plaati (inokuleerimata) inkubeerida 37 ° C juures aerobioosis 24 tundi. Selle aja möödudes ei tohiks söötme kasvu ega värvi muutumist täheldada..

Piirangud

-Ärge sulatage agarit rohkem kui üks kord.

-Valmistatud sööde võib kesta kuni 3 kuud, kui seda hoitakse külmkapis ja kaitstuna valguse eest.

-See sööt ei sobi nõudlikele mikroorganismidele ega anaeroobidele.

Viited

  1. Riiklik ravimite haldamine toidu- ja meditsiinitehnoloogias (ANMAT). Toidu mikrobioloogiline analüüs, ametlik analüütiline metoodika, indikaator mikroorganismid. 2014. köide 3. Saadaval aadressil: anmat.gov.ar
  2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Plokk Agar. 2009. Saadaval aadressil: http://f-soria.es
  3. Laborid Conda Pronadisa. Agar standardmeetodite jaoks (PCA) vastavalt APHA ja ISO 4833. nõuetele. Saadaval aadressil: condalab.com
  4. Laboratooriumid Britania. Loendatakse agariplaadil. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. 2009. Toidu mikrobioloogilise analüüsi meetodid. 2nd ed. Keemiainstituut, UNAM. Mehhiko Saadaval aadressil depa.fquim.unam