Agar CLED vundament, kasutus ja ettevalmistus



The CLED-agar (Tsüsteiin-laktoos-elektrolüüdid-puudulikud) on diferentsiaalne tahke kultiveerimiskeskkond, mida kasutatakse kuseteede infektsioonide diagnoosimiseks. Toitekeskkonna koostis on ette nähtud uriini patogeenide hea kasvuks ja sobib ideaalselt kolooniat moodustavate üksuste (CFU) kvantifitseerimiseks..

CLED kultiveerimiskeskkond on mitteselektiivne, kuna selles võivad kasvada gramnegatiivsed ja ka grampositiivsed mikroorganismid. Kuid see ei ole probleem, sest enamik kuseteede infektsioone on põhjustatud ühest mikroorganismi tüübist.

Polümikroobse infektsiooni korral võib saada 2 või 3 erinevat bakterit, kuid see on väga haruldane ja enamasti on see saastunud proov..

Gramnegatiivsete bakterite hulgas, mis võivad selles söötmes kasvada, kuuluvad perekonda kuuluvad batsillid Enterobakterid ja teised enteerilised batsillid, kus uropatogeenid on kõige sagedamini isoleeritud uriiniproovides, järgmised: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, muu hulgas.

Samuti on selles söötmes kasvavate grampositiivsete bakterite hulgas Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp. ja nad võivad isegi kasvada pärmi, nagu kompleks Candida albicans.

Samas ei võimalda söötme keemilise koostise tõttu mõnede nõudlike genotoorse patogeenide, nagu Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, muu hulgas.

Indeks

  • 1 CLED-agari loomine
  • 2 CLED-agari rajamine (Bevis)
  • 3 Kasutamine
    • 3.1 Uriiniproovide külvamine
    • 3.2 Suuline tõlge
    • 3.3 Identifitseerimine
  • 4 Valmistamine
  • 5 Viited

CLED-agari loomine

CLED-kultuurisöötmel on lihaekstrakt, kaseiini pankrease hüdrolüsaat ja želatiini hüdrolüsaat. Nad annavad toitainete soovimatute bakterite arendamiseks.

See sisaldab ka tsüstiini, aminohapet, mis võimaldab kolibakterite kasvu, mis erineb selle väikese suuruse poolest.

Samamoodi sisaldab laktoos fermenteeritavat süsivesikut, seetõttu on see söötme erinevus; on võimeline eristama kääritavaid baktereid fermenteerimata laktoosist.

Käärivad bakterid muudavad söötme pH-d hapete tootmisel, arendades kollaseid kolooniaid, samas kui kääritamata bakterid ei tekita söötmes muutusi, mistõttu nad võtavad algse agari värvuse, rohelise värvuse.

Fermentatsioonireaktsioon ilmneb tänu pH indikaatorile, mis selles söötmes on bromotümoolsinine.

Teisest küljest inhibeerib sööde madal elektrolüütide kontsentratsioon perekonna tüüpilist invasiivset kasvu Proteus, nimetatakse swarming efekti. See tekitab eelise teiste vahendite suhtes, kuna see võimaldab UFC-de lugemist, sealhulgas juhul, kui Proteus perekond on olemas.

Siiski vähendab elektrolüütide madal kontsentratsioon mõne perekonna liigi kasvu Shigella, see on teiste vahendite suhtes ebasoodne.

CLED-agari alus (Bevis)

Selle keskkonda on varustatud või modifitseerinud Bevis, kes ühendas esialgse fuchsiini happe koostise (Andrade'i näitaja) algse koostisse. See toimib koos bromotümoolsinisega, et eristada kääritamist fermenteerimata bakteritest.

Erinevus tavalise ja modifitseeritud söötme vahel on kolooniate poolt vastu võetud värv. Laktoosiga käärivate bakterite puhul omandavad kolooniad roosa või punase halogeeniga punakasoranži värvi, kuid kääritamata on sinakas hall..

Kasutamine

CLED-agarit kasutatakse ainult uriiniproovide külvamiseks. Selle keskkonna kasutamine on Euroopa laborites eriti sagedane, samas kui Ameerikas on seda vähem kasutatud.

Proovi kogumine peab usaldusväärsete tulemuste saamiseks vastama teatavatele parameetritele, sealhulgas:

  • Enne proovi võtmist antibiootikume ei võeta.
  • Soovitavalt võtke uriin esimesest hommikust tunnist, sest see on kontsentreeritum, kui proove ei ole võimalik invasiivsete meetoditega võtta..
  • Enne proovi võtmist peske suguelundid põhjalikult.
  • Visake esimene urineerimisvoog ja asetage konteiner.
  • Koguda 25–30 ml uriini steriilsetes märgistatud mahutites.
  • Viige kohe laborisse ümbritsetud jää.
  • Seda tuleb töödelda enne 2 tunni möödumist või jahutada temperatuuril 4 ° C maksimaalselt 24 tundi.

Uriiniproovide külvamine

Uriini proov tuleb lahjendada 1:50.

Lahjendamiseks pannakse 0,5 ml patsiendi uriini ja lahjendatakse 24,5 ml steriilse füsioloogilise lahusega.

Mõõdetakse 0,1 ml lahjendatud uriini ja külvatakse ühe pinna kohta drigalski spaatliga CLED söötmel. See on külvimeetod, mis on ette nähtud kolooniate loendamiseks. Seetõttu kasutatakse seda uriiniproovides, sest tulemused tuleb väljendada CFU / ml.

Saadud kolooniate kvantifitseerimiseks toimige järgmiselt: loendage plaadi kolooniad ja korrutage 10-ga ja seejärel 50.-ga. Sel viisil saadakse CFU / ml uriini kogus..

Tõlgendamine

Arvutades üle 100 000 CFU / ml -Indica kuseteede infektsiooni

Arvestades alla 1000 CFU / ml - infektsioon puudub

Arvutades 1000–10 000 CFU / ml -Täpne, võimalik saastumine, korrake proovi võtmist.

Identifitseerimine

CLED-agaril kasvatatud kolooniad tuleks valmistada grammiks ja sõltuvalt mikroorganismi morfotüüpsetest omadustest tehakse teatud subkultuur..

Näiteks, kui see on gramnegatiivne batsill, külvatakse see MacConkey agarile, kus on kinnitatud laktoosi käärimine või mitte. Lisaks on oksüdaasi testi läbiviimiseks lisatud toitev agar.

Juhul, kui gramm näitab grampositiivseid kooke, võib seda subkultuurida soolases mannitooli agaris ja toites agaris. Viimases teostatakse katalaasikatse. Lõpuks, kui leitakse pärmi, külvatakse see Sabouraudi agarile.

Paljud laborid välistavad CLED-söötme kasutamise ja eelistavad ainult uriiniproovide külvamiseks vere agarit, MacConkey'i ja toitainerarit..

Ettevalmistus

Ühe liitri destilleeritud veega viaalis lahustatakse 36,2 g pulbristatud CLED-agarit. Pärast 5-minutilist puhke- mist soojendage resuspendeeritud agarit, segades pidevalt kuni 1 minutini.

Seejärel steriliseeritakse autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit. Kui aeg on lõppenud, eemaldatakse see autoklaavist ja lastakse jahtuda kuni temperatuurini 45 ° C. Seejärel serveeriti igas steriilses Petri tassi vahemikus 15–20 ml.

Plaatide serveerimise protseduur tuleb läbi viia laminaarse vooluhulga või Bunsen-põleti ees, et vältida saastumist..

Serveeritud plaadid lastakse tahkestuda, tellitakse plaadihoidikus ümberpööratud ja säilitatakse külmkapis (2–8 ° C) kuni kasutamiseni.

Valmistatud söötme lõplik pH peaks olema 7,3 ± 0,2.

Viited

  1. Soovitused kuseteede infektsiooni mikrobioloogiliseks diagnoosimiseks. chil infektool.  2001; 18 (1): 57-63. Saadaval aadressil: scielo.org.
  2. Panchi J. Mikroobse aine identifitseerimine, mis põhjustab kuseteede kateteriseerimist läbivate sisemiste patsientide kuseteede infektsioone. 2016. bakalaureuseõpe, et taotleda kliinilise laboratooriumi litsentiaadi tiitlit. Ambato tehniline ülikool. Ecuador.
  3. Laboratooriumid Britania. Half CLED. Saadaval aadressil: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Kasutusjuhend, CLED Agar. 2013 Saadaval aadressil: www.renylab.ind.br.
  5. Kultiveeritud laborid Mikrobioloogia põhijuhend. Saadaval aadressil: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agari valik uriinikultuuri rutiinis. Prognoosiv ja võrdlev hindamine. Diagnostiline Microbiol nakatab Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiline kliiniline mikrobioloogia. Cadizi ülikool, 2. väljaanne. UCA väljaannete talitus.