Simmons tsitraadi agari vundament, ettevalmistamine ja kasutamine



The Simmons tsitraat-agar See on tahke söötmik, mida kasutatakse biokeemilise testina mikroorganismide, eriti gramnegatiivsete batsillide identifitseerimiseks. Algne meedium on loodud Koseri poolt 1923. aastal.

Koser tsitraadi söötmes oli naatriumfosfaati, ammooniumfosfaati, monokaliumfosfaati, magneesiumsulfaati ja naatriumtsitraati sisaldav puljong..

Nagu näha, on ainus süsinikuallikas söötmes tsitraat ja lämmastik on ammooniumfosfaat, valgud ja süsivesikud on nende elementide allikaks välja jäetud, nad on tavaliselt teistes söötmetes..

Seetõttu võib selles söötmes inokuleeritud bakter paljuneda ainult siis, kui see on võimeline võtma tsitraatsüsinikku. Test oli positiivne, kui söötmes oli hägusust, kuid selle puuduseks oli see, et võib esineda mittespetsiifiline hägusus.

Selle probleemi lahendas Simmons, lisades Koseri algvalemile agari ja bromotümooli sinise. Kuigi põhimõte on sama, tõlgendatakse seda erinevalt.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Külverežiim
    • 1.2 Suuline tõlge
  • 2 Valmistamine
  • 3 Kasutage
  • 4 Lõplikud kaalutlused
    • 4.1
    • 4.2
    • 4.3 Värvi intensiivsus
  • 5 Viited

Sihtasutus

Mõnedel bakteritel on võime jääda fermenteerumise või piimhappe tootmise puudumise tõttu ellu jääda, sest nad vajavad energiat teiste substraatide abil. Selles katses on ainus pakutav süsinikuallikas tsitraat.

Bakterid, mis suudavad neil tingimustel ellu jääda, metaboliseerivad kiiresti tsitraadi, kasutades alternatiivi traditsioonilisele meetodile, kasutades trikarboksüülhappe tsüklit või tsitraatide fermentatsioonitsüklit..

Tsitraadi bakterite katabolism sisaldab ensümaatilist mehhanismi ilma koensüümi A sekkumiseta. Seda ensüümi nimetatakse tsitritsaasiks (tsitraatoksaloatsetaat-lüaas) või tsitraat-desmolaasiks. Reaktsioon nõuab bivalentse katiooni olemasolu, mis antud juhul on saadud magneesiumi kaudu.

Reaktsioon tekitab oksaloatsetaati ja püruvaati, mis tekitab seejärel orgaanilise happe leeliselise pH keskel, mis moodustub lämmastikuallika kasutamisega. Neid orgaanilisi happeid kasutatakse süsinikuallikana, mis tekitab karbonaate ja vesinikkarbonaate, alustades veel aluse.

Külvi režiim

Simmons tsitraadi söödet tuleb kergelt inokuleerida kalade saba külge sirge või nõela abil ja inkubeerida 24 tundi 35-37 ° C juures. Aja lõpus jälgitakse tulemusi.

Külvamine toimub ainult agari pinnal. Ärge tehke läbitorkamist.

Tõlgendamine

Kui keskkond on esialgse värvi (roheline) ja puudub nähtav kasv, on test negatiivne, kuid kui sööde muutub siniseks, näitab see leeliste toodete olemasolu, mida pH-indikaator tuvastab. Sel juhul on test positiivne.

See juhtub sellepärast, et kui bakter kasutab tsitraadi süsinikku, on see võimeline võtma ka ammooniumfosfaadi lämmastikku, millega ta ammoniaaki vabaneb, sööde leelistades..

Teisest küljest, kui söötmes on täheldatud bakterite kasvu, kuid värvi ei muutu, tuleks testit pidada ka positiivseks, sest kui kasv on olemas, tähendab see seda, et bakterid võisid kasutada tsitraati süsinikuallikana, kuigi pH ei muutu hetkel (mõnikord võib see võtta).

Kui lõpliku värvi tõlgendamisel on kahtlusi, võib seda võrrelda tsentraadita tsitraaditoruga.

Ettevalmistus

Kaaluge 24,2 g veetustatud keskkonda ühe liitri vee kohta. Segada ja lasta seista umbes 5 minutit. Lõpeta sööde lahustamine kuumutades 1 või 2 minutit, sageli segades.

Serveerige 4 ml katseklaasidesse ja autoklaavige 121 ° C juures 15 minutit. Autoklaavist lahkudes kallutatakse tugi abil nii, et agar tahkeks muutuks väikese klambri või põhjaga ja rohkem kaldu..

Tsitraadikeskkonna lõplik pH on 6,9 (roheline). See keskkond on pH muutuse suhtes väga tundlik.

PH 6 juures või alla selle muutub söötme kollaseks. Seda värvi ei täheldata bakteritega testimisel.

Ja pH 7,6 või kõrgemal tasemel muutub keskmine intensiivne Preisi sinine.

Kasutage

Simmons tsitraatagarit kasutatakse teatavate mikroorganismide, eriti Enterobacteriaceae sugukonda kuuluvate batsillide ja teiste glükoosi mittekäärivate batsillide identifitseerimiseks..

Lõplikud kaalutlused

Simmonsi tsitraadi keskkond on väga delikaatne test, sest teatud vigade korral on võimalik saada valepositiivseid tulemusi.

Ettevaatust tuleb võtta järgmistes küsimustes:

Inokulaat

Ärge tehke väga paksu või koormatud bakteriaalset inokulaati, sest see võib põhjustada istutuskohas kollakasvärvi teket, mõjutamata seejuures ülejäänud söödet, kuid see võib viia usku, et kasv on olemas. Sama ei tähenda testi positiivsust.

Samuti võib paksu inokulaat tekitada valepositiivse, sest surnud bakterite rakuseintes olevad eelvormitud orgaanilised ühendid võivad pH indikaatori muutmiseks vabastada piisavalt süsinikku ja lämmastikku..

Seetõttu on ideaalne, et nõela kasutamine plaatina käepideme asemel, et vältida liigse materjali võtmist.

Külvatud

Teisest küljest, kui biokeemiliste katsete aku istutatakse kõnealuse mikroorganismi identifitseerimiseks, on oluline, et tsitraadi test oleks esimesena inokuleeritav, et vältida valkude või süsivesikute teisaldamist teisest söötmest.

Sellises olukorras on võimalik saada valepositiivne, sest ükskõik milline neist ekslikult tekkinud ainetest metaboliseerub ja põhjustab pH muutust..

Teine võimalus ainete tõmbamise vältimiseks on käepide põletamine hästi ja uue inokulaadi võtmine ühe katse ja teise vahel.

Tuleb hoolitseda ka koloonia puudutamisel inokulaadi tegemiseks, sest tuleks vältida agari osa tõmbamist kultuurist, millest bakterid tulevad, eelnevalt selgitatud.

Selles mõttes soovitavad Matsen, Sherris ja Branson inokulaati lahjendada füsioloogilises lahuses enne tsitraadi testi inokuleerimist, et vältida teiste süsinikuallikate ülekandmist..

Värvi intensiivsus

Tuleb arvestada, et positiivse värvi tekitatud värvi intensiivsus võib olenevalt kommertsmajast erineda.

Lisaks on olemas mikroorganismid, mis testivad positiivselt 24 tunni jooksul, kuid on ka teisi tüvesid, mis vajavad pH muutust 48 tundi või kauem..

Viited

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokeemilised testid kliinilise tähtsusega bakterite identifitseerimiseks. 3. ed. Toimetus Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD laboratooriumid BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Saadaval aadressil: bd.com
  5. Laboratooriumid Britania. Simmonsi tsitraadi agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmonsi tsitraadi agar. 2016. Saadaval aadressil: andinamedica.com.