Agari šokolaadi vundament, kasutusviisid ja valmistamine



The šokolaadiagar see on tahke, rikastatud, mitteselektiivne ja diferentseerimata kultuurikeskkond. Seda kasutatakse peamiselt toitumisest seisukohalt nõutavate mikroorganismide eraldamiseks, kuigi see võib kasvada mistahes tüüpi baktereid..

Sellepärast suureneb selle kasulikkus eriti normaalselt steriilsete proovide, näiteks CSF-i ja liigeste vedeliku külvamisel. Kuigi see sisaldub ka vahendites, mis on valitud polümikroobsete proovide külvamiseks, on sellistel juhtudel vaja lisada antibiootikume, mis inhibeerivad samaaegset taimestikku..

Sellel söötmel on iseloomulik pruun värv, mis on väga sarnane šokolaadiga, seega ka selle nimi. Preparaat on väga sarnane vere agariga, ainult sel juhul tuleb verd kuumutada, et punaliblede laguneks.

Selle valmistamine, nagu vere agar, on väga õrn, sest see on kergesti saastatav. Sel põhjusel eelistavad paljud laborid omandada seda keskkonda, mis on juba valmistatud kaubanduskodudes, mis tagavad nende kvaliteedi.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
  • 2 Kasutamine
    • 2.1 Columbia agariga valmistatud šokolaadiagar
    • 2.2 GC baasagariga (gonokokkidele) valmistatud šokolaadiagar
    • 2.3 Müeller Hintoni agariga valmistatud šokolaadiagar
    • 2.4 Thayer Martin agariga valmistatud šokolaadiagar
  • 3 Valmistamine
    • 3.1 Arvutused
    • 3.2 Kaaluge ja lahustage
    • 3.3 Steriliseerida
    • 3.4 Vere koondamine
    • 3.5 Teine võimalus šokolaadiagari valmistamiseks ilma vereta
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Viited

Sihtasutus

See keskkond koosneb toitaineid sisaldava agari ja kuumutatud verega. Punaste vereliblede hemolüüs pakub X-tegurit (hemiini) ja faktorit V (NAD), mis on vajalikud mõnede mikroorganismide, näiteks perekonna kasvuks. Haemophilus. Samuti on see väga kasulik Neisserias sp.

Sarnaselt vere agarile võib baasagarina sõltuvalt vajadusest kasutada erinevaid söötmeid. Kasutatud meediakanalite hulka kuuluvad aju südame infusioon ja trüptikaasi sojaagar, kuigi kõige soovitatavamad on Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar ja Thayer Martin agar..

Mõned šokolaadiagari variandid sisaldavad kaubanduslikult saadavat rikastatud lisandit, mida nimetatakse Isovitalex või Polivitex.

Need toidulisandid sisaldavad B-vitamiini12, L-glutamiin, adeniin, guaniinvesinikkloriid, p-aminobensoehape, nikotiinamiidadeniini dinukleotiid (NAD), tiamiinpürofosfaat, raudnitraat, tiamiinvesinikkloriid, tsüsteiinvesinikkloriid, L-tsüstiin ja glükoos.

Oluline on märkida, et šokolaadiagar on rohkem rikastatud kui vere agar, kuid ei võimalda hemolüüsi mustrit jälgida.

Kasutamine

Columbia agariga valmistatud šokolaadiagar

See sööde sisaldab kaseiini ja südame pankrease lagundatavat, seeditavat liha peptiidi, naatriumkloriidi, agarit, pärmiekstrakti ja maisitärklist. Samuti on see rohkesti vitamiine, mineraalaineid ja asendamatuid aminohappeid.

See kuumutatud verega alus sobib ideaalselt perekonna Neisseria bakterite isoleerimiseks. Teisest küljest, kui söötmele lisatakse Brucella lisand, võib eespool nimetatud mikroorganismi isoleerida. Tulemused paranevad hobuse verega.

GC baasagariga (gonokokkidele) valmistatud šokolaadiagar

See sööde sisaldab peptoone, maisitärklist, ühealuselisi ja kahealuselisi puhvreid, naatriumkloriidi ja agarit.

Enamik kaubanduslikult valmistatud šokolaadiagari esitusviisidest on selle alusega kaasas ning ei sisalda kuumutatavat verd, vaid sünteetilist hemiini segu ja kasvufaktorite, vitamiinide, mineraalide, aminohapete, faktor V ja glükoosi keemilist lisandit..

Müeller Hintoni agariga valmistatud šokolaadiagar

Seda kasutatakse nõutavate mikroorganismide, nagu Streptococcus pneumoniae kasutades 5% kuumutatud ram-verd.

See teenib ka Neisserias ja Haemophilus esmast isoleerimist, kuid konkreetsel juhul Haemophilus eelistatud on hobavere kasutamine, kuna see on rikas X ja V teguri allikas.

Teisest küljest, kui külvatav proov pärineb mittesteriilsest piirkonnast, soovitatakse piirkonna normaalse taimestiku pärssimiseks antibiootikumide lisamist..

Näide hingamisteede proovidest, kus kahtlustatakse perekonna bakterite esinemist Haemophilus Batsitratsiini kasutatakse inhibeerimiseks Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus ja Saprophytic Neisseria.

Genitaalhaiguse proovide puhul, kui seda kahtlustatakse Haemophilus ducreyi, Järgmisel viisil valmistatud šokolaadiagarit on edukalt kasutatud: Müeller-Hintoni agar 5% šokolaaditud hobuse verega, 1% Isovitalexi rikastamisega ja 3 μg / ml vankomütsiiniga.

Thayer Martin agariga valmistatud šokolaadiagar

See keskkond on spetsiaalne Neisseria gonorrhoeae. See peab sisaldama antibiootikume, et pärssida kaasnevat taimestikku. Kasutatakse lambavere.

Ettevalmistus

Tuleb näha kasutatava aluse agari valmistamise näidustusi. Need on veetustatud söötme pakendi tagaküljel. Tavaliselt kirjeldatakse neid, kui palju tuleks kaaluda ühe liitri söötme valmistamiseks.

Laboris saab ette valmistada vajaliku koguse, see võib olla suurem või väiksem kui üks liiter.

Arvutused

Kolme reegel tehakse selleks, et arvutada, kui palju tuleks kaaluda, et valmistada soovitud maht. Näide:

Kui 1 liitris on vaja kaaluda 40 gr ja labor vajab 800 ml, siis öeldakse:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Valem on järgmine:

X = 32 gr (kogus kaalub 800 ml).

Kaaluge ja lahustage

Me kaalume vajalikku kogust ja asetame veega veega.

Kuumutage mõõduka kuumuseni ja segage õrnalt pöörlevate liigutustega, kuni veetustatud keskkond on täielikult lahustunud, jättes selle keema 1 minutiks.

Steriliseerida

Fiola sisestatakse autoklaavi, et steriliseerida sööde temperatuuril 121 ° C 20 minutit.

Vere kogum

Autoklaavist lahkudes jäetakse see seisma, kuni sööde temperatuur on ligikaudu 56 kuni 70 ° C, et asetada veri ja segada, kuni sööt on pruuniks.

Kui te lisate toidulisandeid, on see aeg seda teha. Seejärel segatakse ja töödeldakse igasse steriilsesse Petri tassi 20 ml.

Kogu protseduur tuleb läbi viia laminaarse vooluhulga või Bunseni põleti juures.

Laske seista, kuni need tahkestuvad ja jäävad külmkapis ümber.

Teine võimalus valmistada šokolaadiagarit ilma vereta

Aluskeskkond valmistatakse vastavalt ülalkirjeldatule, kaubanduslikult saadud veetustatud hemoglobiin lahustatakse ja steriliseeritakse autoklaavis.

Mõlemal lahusel lastakse jahtuda temperatuurini 50 ° C, liidetakse ja lisage lisand. Segage aseptilistes tingimustes ja seejärel toimige steriilsetes Petri tassides.

Kvaliteedikontroll

On oluline, et veri asetataks näidatud temperatuurini, sest see on ideaalne punaste vereliblede lüüsimiseks ja samal ajal säilitama termosensitiivse teguri V..

Agari pinnal ei tohiks olla mulle. Iga 100 plaadi partiid tuleb inkubeerida ühe või kahe plaadiga ahjus temperatuuril 37 ° C 24 tundi, et kontrollida selle steriilsust..

Parimate tulemuste saavutamiseks tuleb varsti pärast valmistamist kasutada šokolaadiagarit.

Laboris tuleb võtta kontrollbakteritüvesid, et hinnata värskelt valmistatud söötme tõhusust peamiste kliiniliselt oluliste mikroorganismide kasvuks.

Viited

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktiline kliiniline mikrobioloogia. Cadizi ülikool, 2. väljaanne. UCA väljaannete talitus.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Toimetaja.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. (5. väljaanne). Argentina, Redaktsioon Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. GC-Bioceni agari aluskultuurisöötme kasutamise võimalikkus mikrobioloogia laboris. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Saadaval aadressil: scielo.sld.
  5. Wikipedia toetajad. Šokolaadiagar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. detsember 2018, 19:54 UTC. Saadaval aadressil: en.wikipedia.org.