Agari BHI vundament, valmistamine ja kasutamine

The BHI agar või aju südame infusiooni agar on toitev tahke kultiveerimiskeskkond. Hispaania keeles nimetame seda aju südame infusiooniagariks. Tegemist on mitteselektiivse söötmega, mis tähendab, et on võimalik arendada kõiki grampositiivseid ja gramnegatiivseid baktereid, samuti mõningaid pärmi- ja niitide seeni.

See koosneb vasikate aju ja südame infusioonist, loomsete kudede peptiidhüdrolüsaadist, kaseiini pankrease hüdrolüsaadist, naatriumkloriidist, glükoosist, dinaatriumfosfaadist ja agarist..

Tuleb märkida, et BHI agar on bakterioloogilistes laborites üks sagedasemaid söötmeid. Seda võib kasutada ilma lisanditeta esmase kultuuri, teistes selektiivsetes söötmetes saadud kolooniate subkultuuri või tüvede säilitamiseks laboris.

Teisest küljest on see ideaalne keskkond, mida kasutatakse alusena rikastatud söötme, näiteks vere agari ja šokolaadiagari valmistamisel. Mõlemad on ideaalsed selleks, et isoleerida nõudlikud mikroorganismid toitumisest. Siiski tuleb arvestada, et kuna see sisaldab glükoosi, ei ole see hemolüüsi mustrite jälgimiseks piisav.

Samamoodi võib BHI agarit kasutada erimeetodite valmistamiseks, mis on ette nähtud rasket kasvu põhjustavate patogeensete mikroorganismide eraldamiseks tavalises keskkonnas: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae ja Histoplasma capsulatum.

Antibiootikumiga muutub BHI agar seente selektiivseks söötmeks.

Indeks

• 1 Sihtasutus
• 2 Valmistamine
  • 2.1 Kiilud
  • 2.2 Plaadid
  • 2.3 Vere agari valmistamine
• 3 Kasutamine
  • 3.1 Kasutada ilma lisanditeta
  • 3.2 Alusagarina teiste kandjate valmistamiseks
• 4 Kvaliteedikontroll
• 5 Viited

Sihtasutus

See on toitev söödekeskkond mõõdukalt nõudlike mikroorganismide isoleerimiseks, mis on võimeline suurendama selle rikastumist veri ja muude toidulisandite lisamisega.

Tegemist on mitteselektiivse söötmega, seega võimaldab see enamiku grampositiivsete ja gramnegatiivsete bakterite, samuti mõnede seente kasvu. Siiski võib see antibiootikumide lisamisega muutuda selektiivseks.

Sööde sisaldab vasika aju ja südame infusiooni, loomsetest kudedest saadud peptiidhüdrolüsaati ja kaseiini pankrease hüdrolüsaati; kõik need ühendid toimivad vitamiinide, aminohapete, lämmastiku ja süsiniku allikana.

Glükoos on süsivesik, mis annab mikroorganismidele energiat, kui nad on seda fermenteerinud. Arvestades, et naatriumkloriid ja dinaatriumfosfaat säilitavad osmootse tasakaalu ja tagavad pH neutraalsuse lähedal. Lõpuks annab agar söötmele tahke konsistentsi.

Ettevalmistus

Kaalutakse 52 grammi veetustatud söödet ja lahustatakse ühe liitri destilleeritud vees. Viige segu kuumutamisallikale, kuni see keeb, segades seda sageli lahustumisprotsessi ajal.

Saate valmistada kihti või plaate BHI agarist ilma lisanditeta.

Kiilud

Kiilude valmistamiseks serveeri preparaati kuni pooleni igast torust, katke ja steriliseerige autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit, kui minna välja alusele, kuni need tahkestuvad. Seejärel hoidke enne kasutamist külmkapis.

Plaadid

Lahustatud segu autoklaavitakse 121 ° C juures 15 minutit, kui lahus jäetakse jahtuma temperatuurini 50 ° C ja 20 ml söödet manustatakse steriilsetes Petri tassides. Neil lastakse tahkuda, inverteerida ja hoida külmkapis, kuni neid kasutatakse. Laske plaatidel enne istutamist võtta toatemperatuur.

Söötme pH peaks olema 7,4 ± 0,2.

Ettevalmistamata sööde on beež ja valmistatud kergelt merevaigukollaseks.

Vere agari valmistamine

Pärast söötme steriliseerimist jahutatakse temperatuurini umbes 45 kuni 50 ° C, lisage sel ajal veri (50 ml), segage õrnalt homogeniseerimiseks ja aseptiliselt iga 20 ml Petri tassi kohta. Kui plaadil on mullid, tuleb põleti leek kiiresti läbi mullide eemaldada.

Samamoodi võib valmistada spetsiaalseid söötmeid, lisades vastavad lisandid, kui segu jõuab temperatuurini 45 kuni 50 ° C.

Sööde on kirsi punane.

Kasutamine

Kasutage ilma lisanditeta

BHI agar ilma lisanditeta on kasulik primaarseks kultuuriks ja puhta mikroorganismide tüvede istutamiseks, mis on keskmise või mõõdukalt nõudlikud hilisemaks identifitseerimiseks..

Kuna tegemist on heleda värviga söötmega, on see ideaalne pigmentide jälgimiseks ja ka seetõttu, et see ei sisalda segavaid aineid, võib seda kasutada biokeemiliste testide läbiviimiseks, nagu oksüdaas ja katalaas, või selleks, et paigaldada muudest biokeemilistest testidest kolooniatest. agar.

Samamoodi kasutatakse BHI agari kiilusid laialdaselt tüvede säilitamiseks kindlaksmääratud aja jooksul laboris (bakteriotek)..

Bakteritüvedega pinnale istutatud plaate või kiilu inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C 24 kuni 48 tundi. Seened sõltuvad temperatuurist ja inkubatsiooniajast soovitud seente tüübist.

Alusagarina teiste söötmete valmistamiseks

Selle alusega saab valmistada rikastatud ja selektiivseid kandjaid.

Rikastatud

Selle peamine ülesanne on olla aluseks agarite valmistamisel mikrobioloogia laborites tavapäraseks kasutamiseks. Eriti soodustab BHI alus C-tüvede eraldamist Streptococcus sp. Siiski on selle puuduseks see, et see ei sobi hemolüüsimustrite vaatlemiseks, kuna see sisaldab glükoosi.

Seda kasutatakse ka küüliku või hobuse vere agari valmistamiseks Haemophilus sp. Paremate tulemuste saamiseks võite lisada rikastamislisandi (IsoVitaleX).

Kui proovid tulevad hingamisteedest agarile, võib batsitrasiini lisada kaasneva taimestiku pärssimiseks ja suurendada tüvede taastumise tõenäosust. Haemophilus sp.

Teisest küljest võib vere agarit (lambaliha või inimene) valmistada telluriidi tsüstiiniga, et isoleerida Corynebacterium diphtheriae. Samuti on kasulik valmistada küüliku vere agarit, lisades tsüstiini ja glükoosi, Francisella tularensis.

Vere agariplaatide külvamine toimub ammendumise teel ja inkubeeritakse 35-37 ° C juures 24-48 tundi mikroaerofiilses (5-10% CO).₂).

Selektiivne

See sööde koos antibiootikumidega võib asendada Sabouraud agari seente eraldamiseks.

BHI agari ja kloramfenikooli - gentamütsiini või penitsilliini, streptomütsiini ja hobune verega kombinatsioon on ideaalne \ t Histoplasma capsulatum.

Sõltuvalt eraldatavast mikroorganismist on soovitatav inkubeerida aerobioosi temperatuuril 35-37 ° C või toatemperatuuril. Mõnikord on mõlemas temperatuurivahemikus vajalik inkubatsioon, kasutades selleks 2 plaati.

Mõned seened meeldib Trichophyton mentagrofüüdid neid tuleb inkubeerida toatemperatuuril kuni 7 päeva.

Kvaliteedikontroll

Igast ettevalmistatud partiist soovitatakse inkubeerida 1 plaati või kiilu temperatuuril 37 ° C 24 tundi ja kontrollida, et ei esine kasvu; Eriti oluline on vere agari valmistamisel, sest see on kergesti saastunud.

Teisest küljest võib söötme kvaliteeti hinnata tuntud või sertifitseeritud standardtüvede inokuleerimise ja nende arengu jälgimise teel.

Selles mõttes hinnatakse BHI agarit ilma lisanditeta Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 või Candida albicans ATCC 10231. Neid inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C aerobioosis 24 kuni 48 tundi. Kõigil juhtudel on oodata rahuldavat kasvu.

Hinnata vere agariplaate,. \ T  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 või Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteritüvesid inkubeeritakse 37 ° C juures microaerophilicuses 24 tundi, samas kui seeni inkubeeritakse toatemperatuuril niiskes kambris kuni 7 päeva. Kõigil juhtudel on oodata rahuldavat kasvu.

Viited

1. Laboratooriumid Britania. Aju südame infusiooni agar. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com.
2. BD laboratooriumid Aju südame infusiooni (BHI) agar. 2013. Saadaval aadressil: bd.com.
3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Aju südame infusiooni agar. 2009.
4. Neogeenlabor. Aju südame infusiooni agar. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Agari veri: sihtasutus, kasutamine ja valmistamine. 2018. Saadaval aadressil: lifeder.com.
6. Wikipedia toetajad. Aju südame infusioon Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. september 2018, 03:58 UTC. Saadaval aadressil: wikipedia.org. Juurdepääs 2. märtsil 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.