Baird Parkeri Agari vundament, ettevalmistamine ja kasutamine

The Baird Parkeri agar see on tahke, selektiivne ja diferentsiaalne kultiveerimiskeskkond. See loodi 1962. aastal positiivse Staphylococcus'i loendamise ja koagulaasi määramiseks (Staphylococcus aureus).

See koosneb kaseiini pankrease hüdrolüsaadist, lihaekstraktist, pärmiekstraktist, liitiumkloriidist, glütsiinist, naatriumpüruvaadist, kaaliumtelluurist, agarist ja munakollase emulsioonist..

Baird Parkeri agar põhineb KTK võimekusel S. aureus telluriidi redutseerimisel ja letsitinaasi tootmisel. Mõlemad omadused tekitavad selle liigi jaoks spetsiifiliste omadustega koloonia. Seetõttu pakub see mikroorganismi avastamisel suurt tõhusust.

Tüüpilised kolooniad S. aureus need on mustad või tumehallid, värvitu piir ja nende ümbritsev selge halo, eristades end ülejäänud mikroorganismidest. Seda patogeeni võib leida kliinilistest proovidest, vetes, kosmeetikatoodetes ja toores või keedetud toidus.

Selle diagnoosimine või avastamine on väga oluline, kuna see tekitab mitmesuguseid patoloogilisi häireid, nagu näiteks toidu mürgistus, põletatud naha sündroom, toksilise šoki sündroom, abstsessid, meningiit, septitseemia, endokardiit..

Indeks

• 1 Sihtasutus
  • 1.1 Toiteväärtus
  • 1.2 Valikuline
  • 1.3 Diferentsiaal
• 2 Valmistamine
  • 2.1 Munakollase emulsioon
  • 2.2 Kaalium-telluur 1% w / v
  • 2.3. Söötme valmistamine
• 3 Kasutage
  • 3.1 Kliinilised proovid
  • 3.2 Toidu proovid
  • 3.3 Vee proovid
• 4 Kvaliteedikontroll
• 5 Soovitused
• 6 Viited

Sihtasutus

Toitev jõud

Kaseiini pankrease hüdrolüsaat, lihaekstrakt ja pärmiekstrakt on üldiste mikroobide arenguks vajalike toitainete, vitamiinide ja mineraalide allikad, samas kui püruvaat ja glütsiin on ühendid, mis soodustavad spetsiifilist kasvu. Staphylococcus aureus.

Selektiivne

Baird Parkeri agar on selektiivne, kuna sisaldab aineid, mis pärsivad kaasneva taimestiku kasvu, edendades samal ajal nende arengut. S. aureus. Inhibeerivad ühendid on liitiumkloriid ja kaalium-telluur.

Diferentsiaal

See tähendab, et on võimalik eristada S. aureus ülejäänud koagulaas-negatiivsetest stafülokokkidest. S. aureus on võimeline vähendama telluriiti mustaks metallivaba telluuriks, moodustades mustad või tumehallid.

Samamoodi pakub munakollane substraatidele ensüümi letsitinaasi ja lipaasi olemasolu. S. aureus see on positiivne letsitiin ja seetõttu on koloonia ümbruses selge halo, mis näitab, et letsitiin hüdrolüüsiti.

Selles mõttes näitavad selles agaris musta või tumehalli kolooniad, mis on heledad ja heledad halogeeniga S. aureus. 

Kui tekib sademevöönd, on näidatav, et on lipaasi aktiivsus. Mõned tüved S. aureus need on positiivsed lipaasid ja teised negatiivsed.

Juhul kui S. aureus Kui lipaas on positiivne, täheldatakse musta või tumehalli kolooniat ümbritseva läbipaistmatu tsooni ja seejärel letsitinaasi toime tõttu selge halo..

Bakterite kolooniad, va S. aureus kasvab selles söötmes, tekib värvitu või pruun koloonia ilma halogeenita.

Ebatüüpilisi musti kolooniaid võib täheldada ka värvitu piiriga või ilma selleta, kuid ilma selge halogeenita. Neid kolooniaid ei tohiks arvesse võtta, need ei vasta S. aureus.

Ettevalmistus

Munakollane emulsioon

Võtke värske kanamuna, peske seda hästi ja asetage 2 kuni 3 tundi 70% alkoholis. Seejärel avab muna aseptiliselt ja munavalge eraldatakse munakollast hoolikalt. Seejärel võetakse 50 ml munakollast ja segatakse 50 ml steriilse füsioloogilise lahusega.

Kaalium-telluur 1% w / v

Mõned kommertsmajad müüvad 1% kaalium-telluriidi kasutamiseks valmis. See lisatakse söötmele enne söötme tahkestumist.

Selle lahuse valmistamiseks laboris kaalutakse 1,0 g kaalium-telluriiti ja lahustatakse osa veest. Seejärel viiakse vee kogus 100 ml-ni. Lahus tuleb steriliseerida filtrimismeetodiga.

Söötme valmistamine

Kaalutakse 60 g veetustatud söödet ja lahustatakse 940 ml destilleeritud vees. Jätke segu umbes 5 kuni 10 minuti vältel seisma.

Lahustamisprotsessi parandamiseks kantakse söödet sageli segades. Lase keema üks minut. Steriliseerida autoklaavis temperatuuril 121 ° C 15 minutit.

Laske seista kuni temperatuurini 45 ° C ja lisage 50 ml munakollase emulsiooni ja 10 ml 1% telluuri. Segatakse hästi ja serveerige 15-20 ml steriilsetel Petri tassidel.

Laske tahkestuda, pöörata ümber plaatides ja hoida külmkapis kuni kasutamiseni.

Valmistatud söötme lõplik pH peaks olema 6,8 ± 0,2.

Enne proovi istutamist oodake, kuni plaat võtab ümbritseva õhu temperatuuri. Külvage plaadid vööri või külvamisega pinnale Drigalski spaatliga.

Dehüdreeritud söötme värvus on helepruun ja ettevalmistatud söötme värvus on kerge merevaigukollane.

Kasutage

Kliinilised proovid

Kliinilised proovid külvatakse otse, eemaldades osa materjali plaadi ühest otsast ja sealt liigub see ammendumise teel. Inkubeerige 24-48 tundi temperatuuril 35-37 ° C.

Toidu proovid

Kaalutakse 10 g toiduproovi ja homogeniseeritakse 90 ml 0,1% peptiinkihiga vees, vajadusel valmistatakse lahjendused. Plaadid inokuleeritakse kolmes korduses 0,3 ml ettevalmistatud lahustega ja külvatakse pinnale Drigalski spaatliga. Inkubeerige 24-48 tundi temperatuuril 35-37 ° C.

See metoodika võimaldab arvestada saadud tüüpilisi kolooniaid ja on ideaalne juhul, kui on olemas S. aureus üle 10 CFU ühe g / ml proovi kohta.

Kui kahtlustate, et summa on S. aureus see on väike või on palju kaasnevat taimestikku, soovitatakse proovi rikastada tripticase soja puljongis 10% NaCl ja 1% naatriumpüruvaadiga. See soodustab kasvu S. aureus ning pärsib kaasneva taimestiku arengut. Pilvine torud külvatakse Baird Parkeri agarile.

Vee proovid

Vaakumfiltratsioonisüsteemis filtreeritakse ja filtreeritakse 100 ml vett ning seejärel eemaldatakse 0,4 mikroni mikropoorne membraan steriilse klambriga ja asetatakse Baird Parkeri plaadile. Inkubeerige 24-48 tundi temperatuuril 35-37 ° C. See meetod võimaldab tüüpiliste kolooniate loendamist S. aureus.

Kvaliteedikontroll

Baird Parkeri agari kvaliteedi hindamiseks võib kasutada tuntud tüvesid, näiteks Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 või Proteus mirabilis ATCC 43071.

Tüvede puhul. \ T S. aureus On teada, et ATCC vähendab telluriiti ja nad on positiivsed lipaasid ja letsitiin. Seetõttu peab olema rahuldav areng ja kumerate kolooniate kasvamine musta keskme ja värvitu servaga, läbipaistmatu halo ja muu välise selge halo abil..

Teisest küljest S. epidermidis selles keskkonnas on oodata halba arengut, hallikaspruunist kuni mustade kolooniateni, ilma selge halo.

Et E. coli ja P. mirabilis see on täielikult või osaliselt inhibeeritud. Kasvamise korral tekivad pruunid kolooniad ilma läbipaistmatu tsoonita ega selge halo.

Soovitused

-Sööde ei tohiks pärast telluriidi ja munakollase lisamist kuumutada.

-Munakollase emulsiooni valmistamine ja selle lisamine söötmesse on väga haavatav saastumise etapp. Äärmiselt ettevaatlik tuleb olla.

-Kui on olemas tüüpilised kolooniad S. aureus tuleb kinnitada koagulaasikatse paigaldamisega kõnealusele tüvele.

-Kui koagulaasiga on kahtlusi, tuleb paigaldada muud kinnitavad katsed.

-Olge ettevaatlik, et mitte segi ajada tüüpiliste kolooniate olemasolu S. aureus musta värvi ebatüüpiliste kolooniatega.

Viited

1. Wikipedia toetajad. Baird-Parkeri agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. märts 2017, 19:36 UTC. Saadaval aadressil: wikipedia.org/ Juurdepääs 18. veebruarini 2019.
2. BD laboratooriumid. Baird Parker Agar. 2006. Saadaval aadressil: bd.com
3. Laboratooriumid Britania. Baird Parkeri agarialus. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Saadaval aadressil: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratooriumid Britania. Kaalium-telluur. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus enterotoksigeenne A-tüüpi, nasofarüngeaalsetes määrdudes toidukäitlejates. Rev Med Tšiili 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuela standard Covenin 1292-89. (1989). Toit Isoleerimine ja loendamine Staphylococcus aureus. Saadaval:sencamer.gob.ve