MIO keskkond, ettevalmistus ja kasutusviisid



The pool MIO on biokeemiline test, mida kasutatakse Enterobacteriaceae perekonda kuuluvate bakterite liikide tuvastamiseks. See on üsna toitev ja koosneb glükoosist, pärmiekstraktist, peptoonist, tripteiinist, L-ornitiinvesinikkloriidist, bromokresoollillast ja agarist..

Selle akronüümi (MIO) tähendus kirjeldab kõiki parameetreid, mida selles söötmes täheldatakse; motoolsus, indool ja ornitiin. Liikuvus on mikroorganismi võime lipu olemasolu tõttu liikuda. Selle omaduse jälgimiseks peab söötme konsistents olema pooltahke, nii et preparaadil on vähem agarit..

Indooli produktsioon näitab, et on olemas trüptofanaasi ensüüm, mis toimib aminohappe trüptofaanile, kuna see on vajalik paljastava reagendi kasutamiseks, et muuta indooli produktsioon nähtavaks.

Lõpuks määrab ornitiin, kas bakter on võimeline aminohapet dekarboksüülima, st kui tal on ensüüm orinitiindekarboksülaas.

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Peptoon, pärmiekstrakt ja tripteiin
    • 1.2. Liikuvus
    • 1.3 Glükoos
    • 1.4 L-ornitiin
    • 1.5 pH indikaator
  • 2 Külvi- ja arendustehnika
  • 3 Valmistamine
    • 3.1 MIO keskmine
    • 3.2 Kovacsi reaktiiv (indooli testija)
  • 4 Kasutamine
  • 5 Kvaliteedikontroll
  • 6 Viited

Sihtasutus

Peptoon, pärmiekstrakt ja tripteiin

Need elemendid aitavad kaasa selle söötme toiteväärtusele. Nad on toitainete ja essentsiaalsete aminohapete allikaks bakterite arenguks.

Lisaks on tripteiin trüptofaani allikas, et tõendada ensüümi tryptofanaasi olemasolu, mis lagundab trüptofaani redutseeriva deaminatsiooni vabastava indooli, püroveenhappe, ammoniaagi ja energia abil..

Indool on värvitu, seega ilmneb selle olemasolu, lisades viis tilka Ehrlichi või Kovacsi reaktiivi, mõlemad koos p-dimetüülaminobensaldehüüdiga.

Selle ühendi aldehüüdrühm reageerib indooliga, tekitades agaripinnal rõngakujulise fuksiapunase toote.

Igat värvi jälge tuleks pidada positiivseks tõendiks. Katse tuleb kohe lugeda, sest mõne aja pärast värv halveneb.

Teisest küljest tuleks see test ilmneda pärast ornitiini liikuvuse ja dekarboksüülimise tulemuste registreerimist..

Tõlgendamine

Positiivne test: fuksija punase rõnga moodustumine, kui Kovacsi reaktiiv lisatakse.

Negatiivne test: ei ole rõnga moodustumist.

Liikuvus

Bakterite liikumisvõimet tõestatakse, kui täheldatakse hägusat keskkonda või kui on olemas paks kasvuala, mis laieneb esialgse inokulatsiooni ümber.

Negatiivse liikumiskatsega tõestatakse õhukest kasvu, ja kõikjal ei ole kasvu.

Oluline on, et motoorika lugeks enne indooli paljastamist, kuna reaktiivi lisamine pilvab kogu söötme.

Liikuvatel, kuid aeglaselt kasvavatel bakteritel on selle kandjaga nende liikuvust raske näidata. Sellisel juhul on soovitatav kasutada muid katseid või meetodeid, näiteks liikumiskeskkonda või tilkade langemise meetodit.

Glükoos

Glükoos on kääritatav süsivesik, mis lisaks energia hapestamisele muudab keskkonda vajalikuks tingimuseks ka aminohappe ornitiini dekarboksüülimiseks..

Glükoosi kääritamine peaks alati toimuma, lähtudes põhimõttest, et kõik Enterobacteriaceaee sugukonda kuuluvad bakterid glükoos.

L-ornitiin

Kui bakter toodab ornitiini dekarboksülaasi ensüümi, võib see toimida pärast seda, kui söötmest on glükoosi kääritamise teel hapestatud..

Ornitiini dekarboksülaasi ensüüm toimib aminohappe karboksüülrühmale, mis toodab amiini, mida nimetatakse putresiiniks, mis leelistab sööde uuesti.

Seda testi tuleb lugeda pärast 24-tunnist inkubeerimist, sest kui proovite lugeda enne testi valesti negatiivse tõlgendamisega.

Tuleb meeles pidada, et esimene reaktsioon, mis toimub, on glükoosi kääritamine, nii et söötmeks muutub algfaasis kollane (esimesed 10 kuni 12 tundi). Kui ornitiini dekarboksüülimine toimub hiljem, muutub söötme lilla.

On oluline tõlgendada ornitiini dekarboksüülimiskatset enne indooli paljastamist, kuna Kovacsi reagendi lisamine muudab söötme värvi..

Tõlgendamine

Negatiivne test: keskmine kollane või kollase taustaga.

Positiivne test: täiesti lilla.

PH indikaator

Sel juhul kasutatakse bromokresooli lilla; isik, kes vastutab paljastamise eest, kui keskel on pH muutus. Kui hapestatakse, muutub indikaator kollaseks ja leeliselisena muutub lilla.

Seemne- ja arendustehnika

MIO keskkonda istutamiseks kasutatakse sirget või nõela ja sellega kogutakse osa uuritavast kolooniast..

MIO-söötmes tehakse sirge joonega sügav torkimine. Kahekordset läbistamist ei ole soovitatav teha, sest see võib anda vale liikumiskujunduse, kui punktid ei toimu samas kohas.

Inkubeerige aerobioosis temperatuuril 37 ° C 24 kuni 48 tundi. Jälgige tulemusi selles järjekorras: liikuvus, ornitiini dekarboksüülimine ja lõpuks indooli avastamine.

Soovitatav on aseptiliselt võtta 2 ml söödet, viia see steriilsesse katseklaasi ja viia seal läbi indooltesti, nii et kui negatiivne on, võib ülejäänud proovi inkubeerida 24 tundi, et näidata indooli uuesti..

Indooli areng viiakse läbi järgmisel viisil: MIO söötmele lisatakse 3 kuni 5 tilka Kovacsi reaktiivi ja segatakse intensiivselt. Täheldatakse, kui ilmub fuksiapunane rõngas või mitte.

Ettevalmistus

Half MIO

Kaalutakse 31 g MIO söödet ja lahustatakse ühe liitri destilleeritud vees.

Kuumutage, kuni segu keedetakse üks minut, sageli segades, kuni agar on täielikult lahustunud. Jaotage 4 ml söödet 13/100 katseklaasis puuvillase kaanega.

Steriliseerida autoklaavis 121 ° C juures 15 minutit. Eemaldage autoklaavist ja laske tal seista otse riiulile nii, et moodustub pooltahke plokk.

Hoida külmkapis 2-8 ° C. Laske enne bakteritüve istutamist tuimastada.

Dehüdreeritud söötme värvus on beež ja kergelt lilla opalestseeruva söötme värv.

Valmistatud söötme lõplik pH on 6,5 ± 0,2

Sööde muutub happelise pH-ga kollaseks ja on leeliselise pH juures lilla.

Kovacsi reaktiiv (indooli katse arendaja)

See reaktiiv valmistatakse järgmiselt:

Mõõdetakse 150 ml amül-, isoamüül- või butüülalkoholi (ükskõik milline kolmest). Selles lahustatakse 10 g p-dimetüülaminobensaldehüüdi. Seejärel lisatakse aeglaselt 50 ml kontsentreeritud vesinikkloriidhapet.

Valmistatud reaktiiv on värvitu või helekollane. Seda tuleb hoida merevaikkollases pudelis ja hoida külmkapis. Tumepruun värvus näitab selle halvenemist.

Samuti võib Kovacsi reaktiivi asendada Ehrlichi reaktiiviga. Viimane, mis on tundlikum, on eelistatud indooli avaldamine bakterites, mis seda toodavad minimaalsetes kogustes, nagu mõnedes gramnegatiivsetes fermenteerimata batsillides ja teatud anaeroobides.

Kasutage

See keskkond on test, mis täiendab Enterobacteriaceae perekonda kuuluvate bakterite identifitseerimiseks vajalikke biokeemilisi teste..

Ornitiini de-karboksüülimisandmed aitavad eristada Shigella sonnei, mis annab positiivse tulemuse Shigella boydii, Shigella flexneri ja S. dysenterieae, mis annavad negatiivseid.

Samuti eristab see perekonda Klebsiella, mis annab negatiivse perekonna Enterobacter, kus enamik selle liike on positiivsed.

Kvaliteedikontroll

Iga kord, kui valmistatakse MIO-söötme partiid, võib läbi viia kontrollkatse. Selleks kasutatakse söötme käitumise jälgimiseks tuntud või sertifitseeritud tüvesid.

Kasutatavad tüved on Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ja Proteus mirabilis.

Oodatavad tulemused on E. coli ja M. morganii. Dan M: +, I: + ja O: +.

Klebsiella pneumoniae annab kõik negatiivsed (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis ja Enterobacter aerogenes dan M: + I: - ja O: +.

Viited

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokeemilised testid kliinilise tähtsusega bakterite identifitseerimiseks. 3. ed. Toimetus Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratooriumid Britania. MIO Medio 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
  5. BD laboratooriumid BBL Motility Indole ornitiini (MIO) keskmine. 2007. Saadaval aadressil: bd.com
  6. Valtek Laboratories Medium M.I.O. Liikuvus, indool, ornitiin. 2010. Saadaval aadressil: andinamedica.com