Peptooni vee alus, ettevalmistamine ja kasutamine

The peptonada vesi see on mitteselektiivne vedeliku rikastamiskeskkond, mida kasutatakse peamiselt toidu proovide või muude materjalide lahjendajana. See tähendab keemilisest seisukohast väga lihtsat, sisaldab liha peptooni, naatriumkloriidi ja vett.

Sellel on teatud toiteväärtus, mis võimaldab proovi rikastada. Kui on baktereid, on see võime elujõulisuse parandamiseks. See on eriti kasulik Enterobacteriaceae perekonda kuuluvate bakterite taastumiseks.

Salmonellide taastumise korral on soovitatav kasutada puhverdatud peptonada vee varianti; See toimib proovi eelvõimendamise vahendina, sellisel juhul sisaldab see teisi elemente, nagu dinaatriumfosfaat ja dikaliumfosfaat..

Tavaliselt valmistatakse peponada vesi neutraalsel pH tasemel, kuid on ka teisi variante, kus on vajalik, et pH oleks 8,5 ± 0,2 (leeliseline), sest eraldatavad bakterid on alkalofiilsed, nagu näiteks Vibrio cholerae.

Teisest küljest võib seda söödet kasutada süsivesikute fermentatsioonikatsete alusmaterjalina.

Indeks

• 1 Sihtasutus
• 2 Valmistamine
  • 2.1 Kodu ettevalmistamine (mitteäriline)
  • 2.2 Valmistamine kaubandusliku söötme abil
  • 2.3 Fermentatsioonikatsete ettevalmistamine
  • 2.4 Peptonada vee muud variandid
• 3 Kasutage
  • 3.1. Soola proovid
  • 3.2 Toidu proovid
• 4 Kvaliteedikontroll
• 5 Piirangud
• 6 Viited

Sihtasutus

Peptoonid pakuvad bakterite arenguks vajalikke toitaineid, eriti lämmastiku- ja lühikese ahelaga aminohappeid, samas kui naatriumkloriid säilitab osmootse tasakaalu.

Lisaks võimaldab keskkond hajutada, homogeniseerida ja parandada tööstuslike protsesside poolt kahjustatud bakterirakke..

Lahjendina on see ideaalne, asendades tõhusalt füsioloogilise lahuse (SSF) või fosfaatpuhvri (PBS)..

Bakterite kasv on ilmne, jälgides selle hägusust.

Ettevalmistus

Kodune valmistis (mitteäriline)

Kaalutakse 1 g peptooni ja 8,5 g naatriumkloriidi, lahustatakse 1 liitris destilleeritud vees. PH tuleks reguleerida 7,0-ni. Selleks saate kasutada 1 N naatriumkloriidi.

Valmistamine kaubandusliku söötme abil

Kaalutakse 15 grammi veetustatud söödet ja lahustatakse ühe liitri destilleeritud vees. Homogeenige segu. Vajadusel keedetakse segu 1 minuti jooksul täieliku lahustumise soodustamiseks. Serveeri vajadusel 100 ml viaalides või 10 ml torudes. Autoklaav 121 ° C juures 15 minutit.

Jahutage ja kasutage või säilitage külmkapis. Söötme lõplik pH on 7,2 ± 0,2.

Dehüdreeritud söötme värvus on kerge beež ja valmistatud kergelt merevaigukollasena.

Kääritamiskatsete ettevalmistamine

Eelmisele preparaadile - enne steriliseerimist - tuleks süsivesikuid lisada lõppkontsentratsioonini 1%, pluss Andrade indikaator (happe fuksiin) või fenoolpunane (0,018 g / l). Torudele tuleb asetada gaaside moodustumise jälgimiseks mõeldud Durhami kella.

Muud peptonada veevariandid

-Peptooni vesi, mis on puhverdatud või puhverdatud

See sisaldab kaseiini ensümaatilist hüdrolüsaati, naatriumkloriidi, kaaliumdivesinikfosfaati ja naatriumvesinikfosfaadi dodekahüdraati. Lõplik pH on 7,0 ± 0,2.

Valmistamiseks kaalutakse 20 g veetustatud söödet ja lahustatakse 1 liitris destilleeritud vees. Lasta seista umbes 5 minutit. Kuumutage 1 minut, kuni see on täielikult lahustunud.

Valage sobivatesse pudelitesse vastavalt vajadusele. Steriliseerige autoklaavi kasutades 121 ° C juures 15 minutit.

-Leeliseline peptiidne vesi

Kaalutakse 25 g veetustatud söödet ja lahustatakse 1 liitris vees. Jätkake eespool kirjeldatud viisil. PH on vahemikus 8,3 kuni 8,7.

Kasutage

Inokulaat viiakse proovi otse asetamisega.

Seda kasutatakse proovide lahjendamiseks, eriti kui kahtlustatakse bakterite kahjustumist. Tavaliselt on lahjendused 1:10 ja 1: 100.

Inkubeerige 24 tundi aerobiosis temperatuuril 35-37 ° C.

Soola proovid

Salmonellat otsivate väljaheiteproovide puhul on soovitatav puhverdatud või puhverdatud vee kasutamine rikastamiseelsena..

Selleks toimige järgmiselt.

Kui väljaheide on moodustunud, võtke 1 g proovi. Kui need on vedelad, võtke 1 ml väljaheidet ja suspendeerige 10 ml puhverdatud peponiseeritud veega katseklaasis. Rektaalsete tampoonide puhul tühjendage tampoonis sisalduv materjal puhverdatud peptiiditud veega torusse.

Kõikidel juhtudel segatakse ja homogeniseeritakse proov väga hästi.

Inkubeerige temperatuuril 37 ° C 18 kuni 24 tundi. Seejärel kultiveeritakse 18-24 tundi 37 ° C juures rikastamise puljongis, nagu seleeni tsüstiini puljongis või tetrationaadi puljongis. Lõpuks kasvatatakse selektiivses söötmes Salmonella, nagu SS agar, XLD agar, Hektoen agar, muu hulgas.

Toidu proovid

Peptooni vett kasutatakse rikastusmeediumina või lihtsa lahjendajana, kuid kui soovitakse Salmonella liike, kasutatakse seda rikastamise eelsöötana, nagu juba kirjeldatud..

Toiduainete puhul toimitakse järgmiselt:

Tahkete toiduainete puhul kaalutakse 25 g proovi ja vedelate toiduainete puhul mõõdetakse 25 ml seda. Asetage see osa kolbidesse, mis sisaldavad 225 ml peptoonitud vett. Proov segatakse ja homogeniseeritakse.

Kui kahtlustatakse, et mikroobide koormus on suur, võib kolooniat moodustavate üksuste (CFU) loendamise hõlbustamiseks teha mitmeid lahjendusi või kümnendkoha..

Lahjenduste arv sõltub proovi tüübist ja analüütilistest kogemustest.

Vastupidi, kui kahtlustatakse, et mikroobide koormus on väga väike, ei ole vaja teha lahjendusi. Järgnevalt subkultiveeritakse valikulises meedias.

Merest pärit toidu puhul, nagu mereannid, püüda muu hulgas kala Vibrio cholerae või muud Vibrio liigid, tuleb kasutada peptiooni vett, mis on reguleeritud pH 8,5-ni (leeliseline peptoonitud vesi).

Kvaliteedikontroll

Igast valmistatud partiist tuleb inkubeerida üks kuni kaks katseklaasi 24 tundi inokuleerimata 37 ° C juures. Aja lõpus ei tohi täheldada hägusust ega värvimuutusi.

Nende efektiivsuse hindamiseks võib kasutada ka tuntud kontrolltüvesid:

Selleks võib kasutada järgmisi bakteritüvesid: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Kõigil juhtudel on oodata rahuldavat mikroobide arengut, mida täheldab söötme hägusus.

Piirangud

-Dehüdreeritud sööt on väga hügroskoopne, mistõttu tuleb seda niiskusest eemal hoida.

-Söödet ei tohi kasutada, kui täheldatakse teatud tüüpi halvenemist.

-Dehüdreeritud kultuurikeskkonda tuleb hoida vahemikus 10–35 ° C

-Valmistatud sööde tuleb hoida külmas (2-8 ° C)..

Viited

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. Toidu mikrobioloogilise analüüsi meetodid. 2009, 2. ed. Keemiainstituut, UNAM. Mehhiko UNAMi keemiainstituudi käsiraamatute ja dokumentide haldaja (AMyD) versioon 1. Saadaval aadressil: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratooriumid Britania. Puhverdatud peponada vesi. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Peptooni vesi. Saadaval aadressil: foodsafety.neogen.com
4. Laboratooriumid Britania. Peptooni vesi. 2015. Saadaval aadressil: britanialab.com
5. Merck Laboratories Puhverdatud peptoonvesi. Saadaval aadressil: merckmillipore.com
6. Laborid Conda Pronadisa. Leeliseline peptiidne vesi. Saadaval aadressil: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'i mikrobioloogiline diagnoos. 12 ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.