Pool SIM-i vundament, ettevalmistamine ja kasutamine



The pool SIM See on pooltahke ja diferentsiaalne agar, mis on spetsiaalselt loodud selleks, et aidata tuvastada mõned bakterid, peamiselt Enterobacteriaceae perekonnast. See koosneb tripteiinist, peptoonist, raudsulfaatist, ammooniumsulfaadist, naatriumtiosulfaadist ja agarist.

See keskkond võimaldab teostada kolme olulist testi: vesiniksulfiidi tootmist (H2S), indooli moodustumine ja liikuvus, seega lühend SIM. Tänu oma suurele kasulikkusele ei saa seda bakterioloogia laboris puududa.

Erinevalt teistest söötmetest peab see olema pooltahke, nii et mõnede bakterite liikumisvõime on tuvastatav. Selles mõttes toimib see test Enterobacteriaceae puhul väga hästi, kuid mitte gramnegatiivsetes kääritamata batsillides, kus eelistatakse kasutada muid meetodeid, näiteks ootamatut tilka.

SIM-keskkond võimaldab eristada teatud spetsiifilisi omadusi, mis iseloomustavad mõningaid baktereid teiste suhtes. Näiteks Escherichia coli seda iseloomustab H2S (-), indool (+) ja liikuvus (+) Proteus mirabilis see on H2S (+), indool (-), liikuvus (+).

Indeks

  • 1 Sihtasutus
    • 1.1 Toide
    • 1.2 Vesiniksulfiidi tootmine
    • 1.3 Indooli moodustumine
    • 1.4 Liikuvus
  • 2 Valmistamine
    • 2.1 Pool SIM
    • 2.2 Kovaci reaktiiv
    • 2.3 Erlichi reaktiiv
  • 3 Kasutamine
    • 3.1
  • 4 Kvaliteedikontroll
  • 5 Piirangud
  • 6 Viited

Sihtasutus

See on kultiveerimiskeskkond, mida peetakse diferentsiaalseks, sest selle kasutamine suudab eristada mikroorganisme, mis on võimelised tootma vesiniksulfiidi, nendest, kes seda ei tee; tõstab esile ka need, mis moodustavad indooli trüptofaanist nende hulgast, kes seda ei moodusta, ning lõpuks eristab liikumatu liikumatu bakteri liikumist.

Toiteallikas

Nagu mistahes kultiveerimiskeskkonnana, on sellel elemente, mis pakuvad vajalikke toitaineid nii, et ei tekiks nõudlikke mikroorganisme. Neid elemente esindavad peptoonid ja tripteína.

Mikroorganismi areng keskkonnas on oluline selleks, et oleks võimalik jälgida selle keskkonnaga hinnatud omaduste olemasolu või puudumist.

Vesiniksulfiidi tootmine

Akronüümi SIM täht S tähistab vesiniksulfiidi tootmist (H2S). Bakterid, mis on võimelised moodustama vesiniksulfiidi, võtavad naatriumtiosulfaadi väävli.

Kui H on moodustunud2S - värvitu gaas - see reageerib söötmes leiduva rauasisaldusega, moodustades selgelt nähtava (must sade) raudsulfiidi. Bakterid, mis ei moodusta H2S, jäta algse värvi keskele (beež).

Musta sademe olemasolu võib takistada liikuvuse tõlgendamist. Siiski on teada, et enamik H-i tootvatest enterobakteritest2S on positiivne liikuvus, nagu Salmonella, Proteus ja Citrobacter. Lisaks sellele viitab must sade, mis hõlmab peaaegu kogu söödet, positiivset motoorikat.

Indooli koolitus

Akronüümi SIM teine ​​täht on "I", mis tähistab indooli moodustumist.

Selles mõttes täidab tripteína lisaks toitainete allikale veel ühte põhifunktsiooni. See peptoon on rikas aminohappega, mida nimetatakse trüptofaaniks, seega võib see näidata baktereid, mis toodavad trüptofanaasi..

See ensüüm vastutab aminohappe trüptofaani lõikamise eest, mille tulemusena moodustub indool (värvitu aine), püroviinhape ja ammoonium..

Sellepärast on selle reaktsiooni demonstreerimiseks vaja lisada paljastav aine (Ehrlichi reaktiiv või Kovaci reaktiiv). Kumbki reageerib indooliga, moodustades agari pinnal ringikujulise punase fukseesia aine. Kui fuksia rõngas ilmub, tõlgendatakse indooli test positiivsena.

Bakterid, millel seda ensüümi ei ole, ei moodusta rõngast ja neid tõlgendatakse negatiivse indooli testina.

Oluline on märkida, et indooli test peaks olema viimane, mida tuleb tõlgendada, kuna pärast reaktiivi lisamist muutub keskkond häguseks, mistõttu on motoorika visualiseerimine raskendatud..

Liikuvus

Lõpuks tähendab sõna "SIM" täht "M" liikuvust. Motoorika hindamiseks on see keskkond strateegiliselt pooltahke, kuna see omadus on oluline, et jälgida, kas bakterite liikumine on olemas või mitte. Bakterid, millel on lipulaev, on need, mis annavad selle positiivse testi.

Positiivne test ilmneb hägususe täheldamisel nii esialgses inokulaadis kui ka selle ümber. Kuigi mitte-liikuvad bakterid arenevad ainult algse inokulaadi teel.

Ettevalmistus

Pool SIM

Kaalutakse 30 g veetustatud söödet ja lahustatakse ühe liitri destilleeritud vees. Segu jäetakse 5 minutiks seisma ja kuumutatakse seejärel keemistemperatuurini, segades seda sageli kuni täielikult lahustumiseni..

Jaotage segu katseklaasidesse puuvillase kaanega ja autoklaavitakse 121 ° C juures 15 minutit. Eemaldage toru hammas autoklaavist ja laske see tahkuda püstises asendis, nii et keskkond oleks ploki kuju..

Hoidmiseks hoitakse seda külmkapis, kuni seda kasutatakse. Valmistatud sööde pH peab olema 7,3 ± 0,2.

Söötme inokuleerimise hetkel peab see olema toatemperatuuril. Söötme värv on beež.

Kovaci reaktiiv

Mõõdetakse 150 ml amüül- või isoamüül- või butüülalkoholi. (Kasutage ühte mainitud kolmest).

10 g p-dimetüülaminobensaldehüüdi lahustatakse. Seejärel lisatakse aeglaselt 50 ml kontsentreeritud vesinikkloriidhapet.

Kasutusvalmis reaktiiv on värvitu või helekollane. Seda tuleb hoida merevaikkollases pudelis ja hoida külmkapis. Ärge kasutage, kui selle värvus on tumepruun; mis näitab, et see on kahjustatud. See reaktiiv on eelistatud enterobakteritega tegelemisel.

Erlichi reaktiiv

Kaalutakse 2 g p-dimetüülaminobensaldehüüdi ja lahustatakse 190 ml absoluutses etüülalkoholis ning segatakse aeglaselt 40 ml kontsentreeritud vesinikkloriidhappega. Hoidke Kovaci reaktiivi samal viisil. Ehrlichi reaktiivi kasutatakse rohkem kääritamata ja anaeroobseteks bakteriteks.

Kasutamine

SIM-keskkonda kasutatakse bakterioloogias laborites. Selle eeliseks on see, et samas tuubis võib Enterobacteriaceae identifitseerimisel täheldada kolme olulist omadust.

Külvatud

Õige viis selle söötme külvamiseks on nõela kasutamine, millega võetakse osa puhtast kolooniast, mis on uuritav, ja sisestatakse keskmise keskele vertikaalselt. Tuleb teha üks tõukejõud. Puhastamine ei tohiks ulatuda toru põhja, õige on katta ainult kaks kolmandikku sügavusest.

Inokulaati ei ole soovitatav korrata, sest see võib viia positiivse motoorika vale tõlgendamiseni. Inokuleeritud söödet inkubeeritakse aerobiosis temperatuuril 37 ° C 24 tundi.

Lõpetati aeg, mil täheldatakse H-i tootmist või mitte2Loetakse S ja liikuvust. Lõpuks ilmneb indool, lisades 3-4 tilka Ehrlichi või Kovaci reaktiivi, segatakse õrnalt ja tõlgendatakse.

Kvaliteedikontroll

Steriilsuse kontrollimiseks inkubeeritakse ühte või kahte tuubi inokuleerimata ahjus temperatuuril 37 ° C 24 tundi. Eeldatakse, et pärast seda aega ei teki värvi kasvu ega muutusi.

Kvaliteedikontrollina võib kasutada sertifitseeritud tuntud tüvesid, näiteks: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Oodatavad tulemused on: Escherichia coli H2S negatiivne, indool ja positiivne liikuvus, Enterobacter aerogenes ainult positiivne liikuvus, Salmonella typhimurium H2S ja positiivne liikuvus, negatiivse indooliga. Proteus vulgaris kõik positiivsed, samas Klebsiella pneumoniae ja Shigella sonnei kõik negatiivsed.

Piirangud

-Mõned tüved Morganella morganii, teiste tüvede hulgas võib melaniini tootmise tõttu sellises keskkonnas pruunikas pigmendi tekitada, seda ei tohiks segi ajada raudsulfiidi sademega. Kogenumate spetsialistide puhul võib selline olukord tekitada H-testi tõlgendamisel valepositiivseid tulemusi2S.

-Tugevad aeroobsed bakterid kasvavad ainult toru pinnal, mis muudab motoorika tõlgendamise raskeks.

Viited

  1. BD laboratooriumid BBL SIM-i keskmine. 2008. Saadaval aadressil: bd.com
  2. Neogen Laboratories SIM-i keskmine. Saadaval: foodsafety
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM-i keskmine. 2009. Saadaval aadressil: http://f-soria.es
  4. Brizuela-Labi labor SIM-i keskmine. Saadaval aadressil: .brizuela-lab.com
  5. Laboratooriumid Britania. SIM-i keskmine. 2015. Saadaval aadressil: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloogiline diagnoos. 5. ed. Toimetus Panamericana S.A. Argentina.